一种攻毒用菌液的保存方法，涉及一种用于动物疫苗效力检验攻毒用菌液的保存方法。其特征在于取攻毒用细菌菌种划线接种于适当培养基，37℃培养24h，挑取典型菌落接种液体培养基，37℃培养16h，进行活菌计数，然后将菌液用漩涡震荡器混匀，分装于灭菌冻存管中置于-80℃中保存。本发明专利技术的攻毒用菌液的保存方法，菌液存活率高，节省大量人力物力，且保证每次攻毒菌液的稳定性和准确性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及一种攻毒用菌液的保存方法，特别设及一种用于动物疫苗效力检验攻 毒用菌液的保存方法。
技术介绍
评价兽用疫苗产品品质的一个最主要指标是疫苗的免疫保护效力，疫苗免疫动物 后用相应的菌毒株进行攻毒，根据攻毒后免疫动物的发病或死亡数量，评判疫苗免疫保护 效力的优劣。 在每次疫苗免疫后攻毒试验时，都需要对攻毒用细菌数进行活菌计数，确定实际 攻毒细菌数量，此工作工作量大且受每次操作人员实际操作的影响，同一种疫苗的攻毒菌 数变化波动较大，因此，需要开发一种高效的保存菌种的方法W解决上述问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，本保存 方法菌液存活率高，节省大量人力物力，且保证每次攻毒菌液的稳定性和准确性。[000引为实现上述目的，本专利技术采用W下技术方案： -种攻毒用菌液，其征在于，所述的攻毒用菌液主要应用于动物疫苗的效力检验。 进一步地，所述的攻毒用菌液在保存一段时间后不必进行活菌计数即可进行攻毒 试验。 -种用于动物疫苗效力检验攻毒用菌液的保存方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)取攻毒用细菌菌种划线接种于适当培养基，37°C培养24h; (2)挑取典型菌落接种液体培养基，37°C培养16h，进行活菌计数； (3)将菌液用縱满震荡器混匀，分装于灭菌冻存管中，每管ImL，编号后置于-80°c 中保存。 进一步地，所述的步骤(1)中适当培养基是根据攻毒用菌株进行确定，禽多杀性己 氏杆菌使用的培养基为鲜血马下琼脂培养基。 进一步地，所述的步骤(2)中液体培养基是根据攻毒用菌株进行确定，禽多杀性己 氏杆菌使用的液体培养基为含血清的马下肉汤培养基。 进一步地，所述的-80°c保存可W存放35天。[001引进一步地，所述的-80°c保存后菌液存活率含95%。 本专利技术的有益效果是:本专利技术的保存方法菌液存活率高，保存时间长，节省大量财 力人力物力，且保证每次攻毒菌液的稳定性和准确性。【具体实施方式】 下面结合实施例，对本专利技术的用于动物疫苗效力检验攻毒用菌液的保存方法作进 一步详细说明。[001引菌种:禽多杀性己氏杆菌，由王永明、王晓丽等分离提供。 疫苗:禽霍乱疫苗，由王永明、王晓丽提供。 培养基:鲜血马下琼脂培养基，含血清的马下肉汤培养基，自行配置。试验动物:SPF鸡购于济南斯帕法斯有限公司。[002引一、保存方法 实施例1 (1)取攻毒用细菌菌种划线接种于鲜血马下琼脂培养基，37°C培养2地； (2)挑取典型菌落接种含血清的马下肉汤培养基，37°C培养16h，进行活菌计数，活 菌计数结果为5.32 X 109CFU/mL。 (3)然后将菌液用縱满震荡器混匀，分装于灭菌冻存管中，每管ImL，编号A1~A10， B1~B20，其中A1~A10置于4°C保存，B1~B10置于-80°C中保存。 二、存活率检验[002引 实施例2 ①于第二天分别取A1~A5，B1~B5进行复数活菌计数，计数结果如表1: 表1攻毒用细菌在4°C和-80°C下保存1天后活菌的情况 ②于第Ξ天分别取A6~A10，B6~B10进行复数活菌计数，计数结果如表2: 表2攻毒用细菌在4°C和-80°C下保存2天后活菌的情况 Γ00341'~③于第30^，取-80°C保存B11~B1 ^进行复数活菌计数I，于第35天，取-80°C保存I B16~B20进行复数活菌计数，计数结果如表3: 表3攻毒用细菌在-80°C下保存30天和35天后活菌情况 ~由上述试验结果可知，菌液在4°C条件下保存，菌液死亡率较高，而在-80°C保存35' 天后菌液存活率依然高达95% W上，此方法用于保存攻毒菌液效果较好。 Ξ、菌液毒力检验 实施例3 为了验证-80°C保存菌液的毒力，进行了动物试验：用SPF鸡分为4组，每组10只，颈 部皮下注射， 第1组:新培养的菌液，调整菌液浓度，攻毒菌数3CFU/只，10/10死亡 第2组:-80°C保存30天，调整菌液浓度，攻毒菌数3CFU/只，10/10死亡 第3组:-80°C保存35天，调整菌液浓度，攻毒菌数3CFU/只，10/10死亡 [004引第4组:灭菌生理盐水，10/10健活。 试验结果表明，菌液于-80°C保存35天，未影响菌液毒力，可W用于疫苗免疫后攻 毒保护试验。 此菌液保存方法，节省大量人力物力，且保证每次攻毒菌液的稳定性和准确性。【主权项】1. 一种攻毒用菌液，其特征在于，所述的攻毒用菌液主要应用于动物疫苗的效力检验。2. 根据权利要求1所述的攻毒用菌液，其特征在于，所述的攻毒用菌液在保存一段时间 后不必进行活菌计数即可进行攻毒试验。3. -种用于动物疫苗效力检验攻毒用菌液的保存方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 取攻毒用细菌菌种划线接种于适当培养基，37°C培养24h; (2) 挑取典型菌落接种液体培养基，37°C培养16h，进行活菌计数； (3) 将菌液用漩涡震荡器混匀，分装于灭菌冻存管中，每管lmL，编号后置于-80°C中保 存。4. 根据权利要求3所述的保存方法，其特征在于，所述的步骤（1)中适当培养基是根据 攻毒用菌株进行确定，禽多杀性巴氏杆菌使用的培养基为鲜血马丁琼脂培养基。5. 根据权利要求3所述的保存方法，其特征在于，所述的步骤(2)中液体培养基是根据 攻毒用菌株进行确定，禽多杀性巴氏杆菌使用的液体培养基为含血清的马丁肉汤培养基。6. 根据权利要求3所述的保存方法，其特征在于，所述的-80°C保存菌液可以存放35天。7. 根据权利要求3所述的保存方法，其特征在于，所述的-80°C保存后菌液存活率2 95%〇【专利摘要】一种攻毒用菌液的保存方法，涉及。其特征在于取攻毒用细菌菌种划线接种于适当培养基，37℃培养24h，挑取典型菌落接种液体培养基，37℃培养16h，进行活菌计数，然后将菌液用漩涡震荡器混匀，分装于灭菌冻存管中置于-80℃中保存。本专利技术的攻毒用菌液的保存方法，菌液存活率高，节省大量人力物力，且保证每次攻毒菌液的稳定性和准确性。【IPC分类】C12N1/04, C12N1/20【公开号】CN105543129【申请号】CN201511003060【专利技术人】王晓丽, 李志杰, 提金凤, 汤少伟, 付石军, 王永明, 王晓东, 王栋, 林冰钰, 王永亮 【申请人】王晓丽【公开日】2016年5月4日【申请日】2015年12月28日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种攻毒用菌液，其特征在于，所述的攻毒用菌液主要应用于动物疫苗的效力检验。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王晓丽，李志杰，提金凤，汤少伟，付石军，王永明，王晓东，王栋，林冰钰，王永亮，
申请(专利权)人：王晓丽，
类型：发明
国别省市：山东;37
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