本发明专利技术提供了一种人降钙素-葫芦脲复合制剂，该复合制剂包括人降钙素-葫芦脲超分子复合物、人降钙素和葫芦脲，其制备方法为：将人降钙素和葫芦脲在0～40℃的条件下溶解于pH值为7～8的水性溶剂中并混合均匀，即得到人降钙素-葫芦脲复合制剂；或者将人降钙素和葫芦脲在0～40℃的条件下溶解于pH值为7～8的水性溶剂中并混合均匀，然后冷冻干燥，即得到人降钙素-葫芦脲复合制剂。本发明专利技术所述复合制剂在使用过程不易发生纤维化，并且该复合制剂的生物活性较单独的人降钙素的生物活性更高，本发明专利技术有助于推进人降钙素的临床应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，特别涉及。
技术介绍
降钙素(calcit0nin，CT)为含有32个氨基酸的直线型多肽类激素，它是由脊椎动物的后鳃体和哺乳动物的甲状腺的滤泡旁细胞(parafolIicular cells,又称C细胞)分泌的激素，在骨和肾都有其相应的受体，具有调节钙、磷代谢的作用，目前主要用于和低骨量相关的疾病的治疗。降钙素的分泌与流经甲状腺的血液中的钙浓度有关，因此血钙浓度的增加可引起降钙素分泌增加和抑制骨吸收，降低高血钙病人的血钙浓度。不同来源的降钙素的氨基酸序列不同，对人都显示出生物活性，其中鲑鱼降钙素(sCT)、鳗鱼降钙素(eCT)和鸡降钙素(cCT)的活性最高，而人降钙素(hCT)由于会快速纤维化而活性最低。由于非人属来源的降钙素的氨基酸序列与人降钙素的氨基酸序列差异较大，例如，sCT与hCT的同源性仅为50%，对人体而言，非人属来源的降钙素是一种免疫反应原，人体对其产生的免疫反应会影响其临床应用价值。虽然目前临床治疗骨质疏松、高血钙症时多使用sCT，但由于其与hCT的同源性差，应用时产生的免疫反应和抗体会影响治疗效果O虽然将hCT用于治疗骨质疏松、高血钙症，人体不会对其产生免疫反应，但hCT比sCT更容易纤维化，在水性溶剂中，hCT分子很容易相互聚集并发生纤维化，形成长纤维沉淀物，降钙素的长纤维沉淀物容易引发甲状腺肿瘤(Hazard JB1Hawk WA1Crile G.J ClinEndocr Metab.1959 ； 19:152-61.);降钙素分子的相互聚集还会造成其生物活性降低。上述问题导致hCT的临床应用面临着很大的困境，hCT目前尚未实现临床应用。因此，若能开发出可有效抑制hCT纤维化的方法，制备出不容易纤维化且具有较高生物活性的hCT产品，对于推进hCT的临床应用将产生重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供，以抑制人降钙素在使用过程中发生纤维化，同时提高人降钙素的生物活性，推进人降钙素的临床应用。本专利技术所述人降钙素-葫芦脲复合制剂，包括人降钙素-葫芦脲超分子复合物、人降钙素和葫芦脲，所述葫芦脲为葫芦脲7或者葫芦脲8。本专利技术所述人降钙素-葫芦脲复合制剂的制备方法，操作如下:按照人降钙素与葫芦脲的摩尔比为1:(10?50)计量人降钙素和葫芦脲，将人降钙素和葫芦脲在O?40°C的条件下溶解于pH值为7?8的水性溶剂中并混合均匀，即得到人降钙素-葫芦脲复合制剂；或者按照人降钙素与葫芦脲的摩尔比为1:(10?50)计量人降钙素和葫芦脲，将人降钙素和葫芦脲在O?40°C的条件下溶解于pH值为7?8的水性溶剂中并混合均匀，然后冷冻干燥，即得到人降钙素-葫芦脲复合制剂；所述水性溶剂的用量应使人降钙素的浓度为100?200ymol/L、葫芦脲的浓度为I?lOmmol/L，所述葫芦脲为葫芦脲7或者葫芦脲8。上述方法中，优选的技术方案为按照人降钙素与葫芦脲的摩尔比为1: (10?25)计量人降钙素和葫芦脲。上述方法中，所述水性溶剂为去离子水、生理盐水或者磷酸盐缓冲液。按照上述第一种方法制备的人降钙素-葫芦脲复合制剂在调节好浓度后可以注射给药的方式使用，按照上述第二种方法制备的人降钙素-葫芦脲复合制剂在使用水性溶剂溶解并调节好浓度后可以注射给药的方式使用。本专利技术提供的人降钙素-葫芦脲复合制剂能抑制人降钙素纤维化并提高其生物活性的主要原因如下:葫芦脲7或葫芦脲8为环状大分子，其环状内腔为疏水性的，且葫芦脲7及葫芦脲8的环状腔体的尺寸与人降钙素多肽链上含苯环的氨基酸的尺寸匹配，在水性溶剂中，葫芦脲7或葫芦脲8的疏水内腔会包合人降钙素多肽链上含苯环的氨基酸并通过疏水相互作用使人降钙素的构象发生变化，构象变化后，人降钙素分子之间的相互聚集减少，从而有效抑制人降钙素因相互聚集而发生纤维化。同时，人降钙素分子之间相互聚集的减少能使水性溶剂中人降钙素单体的数量增加并保持稳定构象，而人降钙素单体的生物活性高于人降钙素聚集体的生物活性，因此本专利技术所述人降钙素-葫芦脲复合制剂能提高人降钙素的生物活性。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果:1.本专利技术提供的人降钙素-葫芦脲复合制剂是一种新型的人降钙素制剂，在水性溶剂中，葫芦脲环状疏水内腔会包合人降钙素多肽链上含苯环的氨基酸并通过疏水作用使人降钙素的构象发生变化，进而使人降钙素分子之间相互聚集的机会减少、抑制人降钙素因分子间相互聚集而发生纤维化，实验表明，人降钙素与葫芦脲相互作用后，人降钙素的聚集形态发生了变化，不再形成成熟的纤维，因此，本专利技术所述复合制剂能降低人降钙素的长纤维沉淀物引发甲状腺肿瘤的可能性，比单独的人降钙素的用药安全性更高。2.本专利技术提供的人降钙素-葫芦脲复合制剂中，由于葫芦脲与人降钙素的相互作用，使得人降钙素分子间的相互聚集的机会减少，从而增加了复合制剂中稳定构象的人降钙素单体的数量，人降钙素单体数量的增加可提高其生物活性，因此本专利技术所述复合制剂比单独的人降钙素具有更高的生物活性。细胞实验表明，与单独的人降钙素相比，本专利技术所述人降钙素-葫芦脲复合制剂的生物活性更高，且没有明显的细胞毒性。动物实验表明，本专利技术所述人降钙素-葫芦脲复合制剂的降血钙能力较单独的人降钙素明显更高，在相同浓度的条件下与鲑鱼降钙素的降血钙能力接近，且本专利技术所述人降钙素-葫芦脲复合制剂不会因同源性的原因在临床应用时产生的免疫反应而影响治疗效果。由以上内容可知，本专利技术所述人降钙素-葫芦脲复合制剂是具有临床应用前景的，本专利技术有助于推进人降钙素的临床应用。3.本专利技术所述人降钙素-葫芦脲复合制剂的制备方法简单，工艺条件温和易于推广应用。【附图说明】图1是实施例1和对比例I中各样品与ThT染料作用后的荧光强度随搅拌时间的变化曲线。图2是实施例1和对比例I中搅拌20h得到的各样品的透射电子显微镜照片，图中的标尺为I OOnm ο图3是实施例6采用等温滴定量热法测试人降钙素与葫芦脲7相互作用的结果图。图4是实施例7中的细胞毒性测试结果图。图5是实施例8中大鼠的血钙含量随时间的变化曲线。【具体实施方式】下面通过实施例结合附图对本专利技术所述人降钙素-葫芦脲复合制剂及其制备方法进行具体描述，有必要在此指出的是，实施例只用于对本专利技术作进一步的说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据本专利技术的内容作出一些非本质的改进和调整进行具体实施，但这样的具体实施应仍属于本专利技术的保护范围。下述各实施例中，磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)的配制方法为:分别配制0.2mol/L的Na2HP04和0.2mol/L的NaH2PO4母液，取19mL的NaH2PO4和81mL的Na2HP04母液加入容器中，然后加入NaCl，加蒸馏水或去离子水至700?900mL并搅拌使氯化钠完全溶解，调节pH值至7.0?7.4后用蒸馏水或去离子水定容至IL即得PBS缓冲液，其中，NaCl的浓度为lOOmmol/L。以下通过实施例1和对比例I说明单独的人降钙素和本专利技术所述人降钙素-葫芦脲复合制剂中人降钙素的纤维化情况。实施例1将人降钙素(hCT)2.0mg、葫芦脲7(CB)6.9mg加入已装有搅拌子的1#管制瓶中，将hCT 2.0mg、CB 17.4mg加入已装有搅拌子本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人降钙素‑葫芦脲复合制剂，其特征在于该复合制剂包括人降钙素‑葫芦脲超分子复合物、人降钙素和葫芦脲，所述葫芦脲为葫芦脲7或者葫芦脲8。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李建树，商惠，丁春梅，刘衍朋，陈星羽，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51
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