本发明专利技术公开了一种罂粟成分的实时荧光PCR检测方法，包括以下步骤：步骤一：以罂粟种子的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物；步骤二：检测扩增产物的荧光信号；其中，用于PCR扩增的反应体系中含有扩增罂粟成分的特异性引物对和罂粟成分的特异性探针。本发明专利技术的罂粟成分的实时荧光PCR扩增的特异性引物对和探针不仅特异性好，而且灵敏度高，为快速准确地检测食品添加剂或调味品中是否非法添加罂粟成分提供了一种很好的方法，具有较好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程领域，具体地说，是关于一种食品或调味品中磐粟成分的实 时巧光PCR检测方法。
技术介绍
磐粟壳为磐粟科植物磐粟的干燥成熟果壳，具有敛肺止咳、涩肠、止痛的功效，包 含吗啡、可待因、磐粟碱等20多种生物碱。吸食磐粟壳及制品，会使吸食者在屯、理、生理上 成癒，对人体的肝脏、屯、脏等器官产生毒害作用。因此，磐粟壳在我国被列入麻醉药品的范 围予W管制，作为非食用物质，严格禁止在食品及调味品中添加使用。 目前磐粟成分检测方法主要集中在对于磐粟来源生物碱成分的检测，方法主要有 薄层层析法、紫外分光光度法、液相色谱法、气相色谱-质谱法、酶联免疫法。运些方法适用 范围较广，但仅能对磐粟壳食物中残留的生物碱进行间接检测，不能对磐粟物种来源进行 准确定性，不能充分满足对磐粟违禁成分的执法检验和整治监管的需要。因此有必要建立 一种准确客观的检测磐粟成分的新方法。
技术实现思路
本专利技术首要目的在于提供一种磐粟成分的实时巧光PCR检测方法，W克服现有技 术所存在的上述缺点和不足。本专利技术的第二个目的在于提供一种检测试剂盒，W及检测试 剂盒的应用。本专利技术的第Ξ个目的在于提供一种磐粟成分实时巧光PCR的引物对和探针。 为实现上述目的，本专利技术采用W下技术方案： 作为本专利技术的第一个方面，一种磐粟成分的实时巧光PCR检测方法，该方法包括 W下步骤： 步骤一：W磐粟种子的DNA为模板，进行巧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物； [000引步骤二：检测扩增产物的巧光信号； 其中，用于PCR扩增的反应体系中含有扩增磐粟成分的特异性引物对和磐粟成分 的特异性探针，所述扩增磐粟成分的特异性引物对的序列如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2 所示，所述磐粟成分的特异性探针的序列如SEQ ID NO. 3所示。 根据本专利技术，所述PCR扩增的条件如下： 反应体系为：2XTaqManMastermix12. 5yL，引物各 1. 25yL，探针 0. 5yL，d地2〇 4. 5μLDM模板 5μL;[001引反应的条件为：50°C，2min;95°(：，10111111，90°(：，103,60°(：，1111111，45个循环。 作为本专利技术的第二个方面，一种磐粟成分的检测试剂盒，含有W下试剂： (a)扩增磐粟成分的特异性引物对； 化）磐粟成分的特异性探针； 其中，所述扩增磐粟成分的特异性引物对的序列如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2 所示，所述磐粟成分的特异性探针的序列如SEQ ID NO. 3所示。 根据本专利技术，所述检测试剂盒还包括：[001引 （C)标准参照物。 本专利技术的检测试剂盒可用于检调味品或食品添加剂中的磐粟成分。 作为本专利技术的第Ξ个方面，所述特异性引物对的序列如SEQIDNO. 1和SEQID NO. 2所示，所述特异性探针的序列如SEQIDNO. 3所示。 本专利技术的有益效果是： 1、可快速、简便地检测调味品中是否存在磐粟成分； 2、其特异性好，且灵敏度高，特别适用于各类调味料中非法添加磐粟成分的检测。【附图说明】 图1为实时巧光PCR引物特异性试验扩增曲线图。[002引图2为实时巧光PCR灵敏度试验扩增曲线图。[002引图3为实时巧光PCR检出限试验扩增曲线图。 图4为8种调味料实时巧光PCR扩增曲线图。【具体实施方式】W下结合具体实施例，对本专利技术作进一步说明。应理解，W下实施例仅用于说明本 专利技术而非用于限定本专利技术的范围。本专利技术的实验材料和仪器如下：[002引（1)桂皮、八角、香叶等7种调味料，海底拱清汤火锅底料、烛肉料、排骨鲜味王等8 种复合调味料均为市售产品； (2)磐粟种子为市售产品； (3)鱼腥草、金银花、紫花地下等36种药材，与磐粟具有同源性，均为市售产品； (4)TianGenDP-305植物基因组DNA提取试剂盒购自天根生物有限公司OlANGEN BIOTECH度EIJING)CO.，LTD,Beijing,China);[003引 （5)TianGenDP-326深加工食品DM提取试剂盒购自天根生物有限公司OlANGEN BIOTECH度EIJING)CO.，LTD,Beijing,China); (6)引物和探针由辉瑞公司合成（Pfizer,Inc.NYSE:P阳，USA); (7)TaqManGeneExpressionMasterMix(货号：4369016)试剂均购自Applied Biosystems公司(AppliedBiosystemsInc. ,USA)； (8)试验相关仪器：液氮冷冻研磨仪SPEX6580(S阳X，USA);紫外分光光度计 NanovuePlus(GEHealthcare,UnitedKingdom);实时巧光PCR仪ABIViia7(Applied BiosystemsInc.，USA);实时巧光PCR仪ABI7300(AppliedBiosystemsInc.，USA);核酸 蛋白分析仪；分析天平；离屯、机。 实施例1磐粟及香辛料、药材的DNA的提取 (1)固体样品：取25g磐粟种子，用液氮冷冻研磨仪研磨粉碎，称取200mg磐粟种 子粉末至离屯、管中。[003引 似液体样品：称取250g磐粟种子，倒入500血的分液滤斗中，静置1-2小时，样 品会分为3层，上层是油脂，中间是水化下层是固体残渣。残渣处理：将残渣分离到100ml烧杯中，取部分残渣到研鉢或者研磨仪中，研磨粉碎，取ImL至2ml的离屯、管中。水相处理： 残渣分离后往分液滤斗中加入lOOmL石油酸，震荡5分钟后静置，收集下层水相，采用大体 积浓缩仪（40~60°C+抽真空+低速离屯、）浓缩至1-5血，取1血至2血的离屯、管中。 (3)采用TianGen DP-305植物基因组DNA提取试剂盒灯ianGen DP305-02)对桂 皮、八角、香叶等7种香辛料和鱼腥草、金银花、紫花地下等36种药材进行提取。 (4)采用TianGen DP-326深加工食品DNA提取试剂盒对海底拱清汤火锅底料、烛 肉料、排骨鲜味王等8种复合调味料进行提取。[00化|上述（1)~（4)的DNA浓度采用紫外分光光度仪NanovuePlus测定，模板量控制 在30ng/反应W上，0D260/280控制在1. 8至2. 0之间当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种罂粟成分的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤一：以罂粟种子的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物；步骤二：检测扩增产物的荧光信号；其中，用于PCR扩增的反应体系中含有扩增罂粟成分的特异性引物对和罂粟成分的特异性探针，所述扩增罂粟成分的特异性引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述罂粟成分的特异性探针的序列如SEQ ID NO.3所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨捷琳，高琴，宗凯，
申请(专利权)人：上海出入境检验检疫局动植物与食品检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：上海;31
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