本发明专利技术公开了一种能够在目标细胞或组织中被选择性激活以治疗其中的状况的铰链抗体。该铰链抗体包括功能性抗体、两个抑制性结构域以及四个可裂解的接头。所述功能性抗体在激活状态下能够治疗所述状况，其具有两条轻链和两条重链。每个抑制性结构域含有免疫球蛋白的铰链区，且由两个肽臂组成。每个可裂解的接头含有可被在目标细胞或组织中特异性或高度表达的酶裂解的肽底物，且连接所述抑制性结构域的所述肽臂中的一个至所述功能性抗体的所述轻链和所述重链中的一个的N末端。本发明专利技术还公开了制备和使用该铰链抗体的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本
技术实现思路
通常涉及一种用作治疗多种医学状况的治疗剂的抗体靶向 (antibody-based)分子。更具体地，本
技术实现思路
涉及铰链抗体，所述铰链抗体在目标细胞或 组织中被选择性激活，以治疗其中的医学状况。
技术介绍
抗体靶向治疗剂，包括单克隆抗体，是作为有效治疗多种疾病的主要类别的药物 中的一种出现的。在2012年，全球销量前10的药物中，5种是治疗性抗体，包括HUMIRA?， REMICADE?，RITUXAN?，HERCEPTIN?和AVASTIN?。该5种药物在全球的总收入达到约450 亿美元，接近该年全球抗体靶向治疗剂市场的60%。当现有的产品扩宽它们的批准使用范 围，且新的准入者进入市场时，全球市场有望于持续增长。 尽管该领域持续发展，要给市场带来更有效更负担得起的抗体靶向候选物仍然有 许多挑战。目前抗体靶向治疗剂相关的一大问题是：作用位点的弱选择性。单克隆抗体和 可溶性蛋白能够特异性结合且中和它们意向的目标分子（例如，抗原和细胞表面受体）。但 是，大部分目标分子对疾病位点是非特异的，它们可能存在于除了疾病位点之外的细胞或 组织。因此，这些治疗剂可能在那些非病的正常细胞或组织发生作用。这些脱靶作用可能 导致不想要的副作用。因此，期望发展高精准性的抗体靶向治疗剂。 避免脱靶作用和提高选择性的一个可能的方案是提供可在目标位点激活 的前抗体（pro-antibody)。例如，专利号为No. 8, 399, 219的美国专利以及公开号 为No. 2010/0189651的美国专利申请公开了一种蛋白酶激活的抗体，该抗体通过肽饰 (peptidemask)或修饰部分（maskingmoiety)进行了修饰。在这些申请文件中，采用了· 菌体展示技术筛选能够抑制/减弱功能性抗体与其结合靶标的结合的肽或部分。但是，采 用这些方法获得的修饰部分不能广泛用于所有抗体，因为它们是基于其对特异性靶标的抑 制能力而确定的。因此，针对这些方法有必要发展一种能用于每种抗体靶向治疗剂的修饰 部分，这是非常耗时、昂贵和复杂的。此外，修饰部分的引入给受试者带来了诱导不必要的 免疫应答的风险。 鉴于上述内容，本领域存在提供下一代治疗剂的需要，该治疗剂被精心设计和处 理，以具有，例如，改善的作用位点选择性以及增强的效力等特性。进一步地，这些设计和处 理方案将应用于多种抗体靶向治疗剂，且不会引起不需要的免疫应答。
技术实现思路
接下来对本
技术实现思路
进行简单的概述，为读者提供基本的理解。该概述并非是本
技术实现思路
广泛的综述，也没有定义本专利技术的关键/决定性要素，或描绘本专利技术的保护范围。 该概述唯一的目的在于以简单的形式呈现本文中公开的一些概念，作为之后更加详细的描 述的前奏。 -方面，本专利技术意在一种铰链抗体。该抗体靶向的治疗剂能够在目标细胞或组织 中被选择性激活，以治疗目标细胞或组织中的状况。 根据本专利技术的各种实施例，铰链抗体含有功能性抗体，两个抑制性结构域以及四 个可裂解的接头。所述功能性抗体在激活状态下能够治疗状况，其具有两条轻链和两条重 链。两个抑制性结构域中每一个均由通过二硫键相互连接的两个肽臂组成。每个抑制性结 构域由两个通过二硫键相互连接的肽臂组成。四个可裂解的接头中的每一个含有被在目标 细胞或组织中特异性或高度表达的酶裂解的肽底物。每个可裂解的接头连接所述两个抑制 性结构域的两个肽臂中的一个至功能性抗体的两条轻链和两条重链中的一个的N末端。 根据本专利技术的某些实施例，两个抑制性结构域中的每一个均是免疫球蛋白 A(IgA)、免疫球蛋白D(IgD)或免疫球蛋白G(IgG)的铰链区或铰链区的片段。例如，抑制性 结构域可能包括以下序列中的任一种序列：IgG的SEQIDNos. 10，11，12，13;IgA的SEQID Nos. 14,15 ;以及IgD的SEQIDNos. 54, 55〇 在可选的实施例中，功能性抗体是anti-TNF-α抗体，anti-RANKL抗体， anti-CTLA-4 抗体，anti-HER2 抗体，anti-EGFR抗体，anti-VEGF抗体，anti-VEGFR2 抗体， anti_IL6R抗体，anti_IL12/23 抗体，anti_CD3 抗体，anti-CDlla抗体，anti_CD20 抗体， anti-⑶25抗体，anti-⑶30抗体，anti-⑶33抗体或anti-⑶52抗体。例如，功能性抗体的 轻链的氨基酸序列是SEQIDNos. 1，2,3,4,5,6,7,8和9中任一种氨基酸序列；而功能性抗 体的重链的氨基酸序列是SEQIDNos. 58, 59,60,61，62,63,64,65和66中的任一种氨基酸 序列。 在某些实施例中，所述肽底物被以下任一种酶裂解：基质金属蛋白酶（MMP)，组织 蛋白酶（CTS)，半胱天冬酶（CASP)或整合素样金属蛋白酶（ADAM)。例如，根据一些实施例， 酶是MMP-2或MMP-9,每个可裂解的接头包含氨基酸序列SEQIDNo. 6。 根据本专利技术的某些实施例，功能性抗体是anti-TNF-α抗体，其具有含有氨基酸 序列SEQIDNo. 1的轻链和含有氨基酸序列SEQIDNo. 58的重链，每个可裂解的接头包括 氨基酸序列SEQIDNo. 16 ;每个抑制性结构域含有氨基酸序列SEQIDNo. 10。 在另一方面，本专利技术意在产生本专利技术上述方面/实施例中的铰链抗体的表达系 统。 根据本专利技术的多个实施例，用于产生铰链抗体的表达系统包括第一核酸序列和第 二核酸序列。第一核酸序列，从5'到3'端包括第一抑制性结构域编码区，第一可裂解的接 头编码区以及轻链编码区。所述第一抑制性结构域编码区编码上述任一铰链抗体的抑制性 结构域的第一肽臂。第一可裂解的接头编码区编码上述铰链抗体的可裂解的接头，所述可 裂解的接头是可被在目标细胞或组织中特异性或高度表达的酶裂解的肽底物。轻链-编码 区编码上述铰链抗体的功能性抗体的轻链，其中所述功能性抗体在激活状态下能够治疗状 况。第二核酸序列，从5'到3'端包括第二抑制性结构域编码区，第二可裂解的接头编码区 以及重链-编码区。所述第二抑制性结构域编码区编码铰链抗体的抑制性结构域的第二肽 臂。第二可裂解的接头编码区编码铰链抗体的可裂解的接头。重链编码区编码铰链抗体的 功能性抗体的重链。 在本专利技术的某些可选实施例中，第一和第二核酸序列可以在单一表达载体中构 建。例如，表达系统可能进一步包括连接核酸序列，所述连接核酸序列连接所述第一核酸序 列和第二核酸序列。连接核酸序列的非限制性实施例包括编码Furin-2A多肽的序列或编 码内部核糖体进入位点（IRES)序列的序列。 在第一和第二核酸序列是在单一表达载体中构建的情况下，表达系统可能进一步 可选地包括可操作地连接到第一核酸性序列和第二核酸序列的调控序列，以调控第一核酸 序列、第二核酸序列以及可选的连接核酸序列在宿主细胞中的翻译。任选地，表达系统可能 包括至少两段分别可操作地连接到第一和第二核酸性序列的调控序列，以分别调控第一和 第二核酸序列的表达。 在一些其他实施例中，第一和第二核酸序列可能在两个单独的表达载体中构建。 例如，第一核酸序列与可操控地连接的第本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种铰链抗体，所述铰链抗体能够在目标细胞或组织中被选择性激活以治疗其中的状况，包括：在激活状态下能够治疗所述状况的功能性抗体，所述功能性抗体包括两条轻链和两条重链；两个抑制性结构域，其中每个抑制性结构域由两个通过二硫键相互连接的肽臂组成；以及，四个可裂解的接头，其中每个可裂解的接头包括可被在所述目标细胞或组织中特异性或高度表达的酶裂解的肽底物，且连接所述抑制性结构域的所述两个肽臂中的一个至所述功能性抗体的所述两条轻链和所述两条重链中的一个的N末端。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：程天禄，庄智洪，高秀芬，陆云驰，
申请(专利权)人：DCB美国有限责任公司，高雄医学大学，
类型：发明
国别省市：美国;US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。