检测乙肝病毒BCP的高敏感性巢式PCR引物及方法技术

本发明专利技术涉及基因检测领域，特别涉及检测乙肝病毒BCP的高敏感性巢式PCR引物及方法，以引物CPF1a和CPR1mer对待检测DNA进行第一轮PCR，得到第一轮PCR产物；以引物CPF2与CPR2或CPF2与CPR1mer对第一轮PCR产物进行第二轮PCR，得到第二轮PCR产物；对第二轮PCR产物进行检测即可。其中，各引物基因序列如SEQ ID No.1-SEQ ID No.4所示。本发明专利技术在长期实践的基础上，对相关引物进行优化设计，探索出的高特异、高灵敏度和高效的检测HBV基本核心基因启动子的方法，按照本发明专利技术所提供的实验体系，对血清HBV病毒检测灵敏度可达到4copies HBV DNA。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因检测领域，具体而言，涉及一种检测乙肝病毒BCP的高敏感性巢 式PCR引物及方法。
技术介绍
目前，乙型肝炎病毒（h印atitisBvirus，HBV)基因组变异的检测方法是建立在 对HBV基因组全长序列或特定目标序列PCR扩增的基础上。通过PCR扩增可以识别出该病 毒相应基因或区域的缺失等变异。专利技术人曾用巢式PCR方法对HBV核心基因包含其基本核 心基因启动子（Basalcorepromoter,BCP)的区域（nt1678~1948)进行了扩增。由于 引物设计以及HBV基因组负链自然缺失区域的影响，病毒载量较低（<103~105gen〇mes/mL) 的样本无法检出。 由于HBV基因组的部分双链结构，在其负链5'端存在2nt核苷酸自然缺口。而 BCP则非常靠近HBV基因组负链5'端，PCR扩增要跨过那段不连续的基因片段，导致传统的 扩增方法检出率较低，仅为60 %左右。目前，通过改用病毒的直接重复序列上的引物P2，使 检测的敏感性明显提尚，可达90%左右。然而，该套引物的另一条位于X基因上，该基因包 埋在基因组内层、且变异较多，导致PCR扩本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测乙肝病毒BCP的高敏感性巢式PCR引物，其特征在于，由第一对引物和第二对引物组成；第一对引物：CPF1a和CPR1mer；第二对引物：CPF2与CPR2或CPF2与CPR1mer；其中，CPF1a基因序列如SEQ ID No.1所示，CPR1mer基因序列如SEQ ID No.2所示，CPF2基因序列如SEQ ID No.3所示，CPR2基因序列如SEQ ID No.4所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：方钟燎，李国坚，杨庆利，李海，陈钦艳，王学燕，谭超，胡莉萍，李开文，
申请(专利权)人：广西壮族自治区疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：广西;45