脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料的制备方法，其包括以下步骤：步骤A：选取哺乳动物体或人体的一定部位的真皮组织；步骤B：通过对比所述真皮组织与角膜组织的结构，确定所述真皮组织结构中与所述角膜组织结构相近且相邻5层的真皮组织β层结构；步骤C：去除所述真皮组织中除真皮组织β层结构以外的其他层，获得真皮组织β层初级原料。本发明专利技术的制备方法拓宽了制备角膜以及眼表组织修复材料的原料来源，降低了生产角膜或眼表组织修复材料的成本，制备的脱细胞真皮基质角膜可广泛应用于感染、外伤或组织病变导致角膜损伤的眼角膜再生性修复。

【技术实现步骤摘要】
脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料的制备方法
本专利技术涉及一种脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料的制备方法。
技术介绍
目前，眼角膜病变是多发病、常见病，尤其是外伤、感染局部组织病变、晶体病变会导致眼角膜边缘改变，最终改变角膜组织的透明度导致失明。角膜病变导致的失明，目前唯一施行的治疗手段是异体角膜移植，由于捐献材料来源匮乏，大量角膜移植病例的病人因等待角膜移植而处于失明状态。根据2011年眼科流行病学调查报告显示：我国因角膜病变导致失明的病人约为十万分之七点一每年,即每年增长约十万例。目前我国每年可用于移植的异体角膜材料不足一万只，累计等待角膜修复治疗的病人数量在二百万例左右，如果计入因部分角膜病变或边缘角膜病变需要角膜材料或者眼表组织修复材料的病人这个数量将达到上千万。目前，国内外都在进行大量的角膜替代产品研究，角膜替代产品材料主要集中在异体羊膜、海洋生物胶原蛋白与异种角膜材料方面，上述材料由于材料自身特性的限制都很难达到永久性或复明性的效果。由此可见，国内外对角膜替代品以及眼表组织修复材料的需求量大，现有的产品不具有永久性或复明性的效果，亟待进一步开发新的生物组织工程学的角膜修复材料。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料的制备方法，该制备方法其拓宽了制备角膜以及眼表组织修复材料的原料来源，降低了生产角膜或眼表组织修复材料的成本，制备的脱细胞真皮基质角膜可广泛应用于感染、外伤或组织病变导致角膜损伤的眼角膜再生性修复。为解决上述技术问题本专利技术一种脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料的制备方法，其包括以下步骤：步骤A：选取哺乳动物体或人体的真皮组织；步骤B：通过对比所述真皮组织与角膜组织的结构，确定所述真皮组织结构中与所述角膜组织结构相近且相邻5层的真皮组织β层结构；步骤C：去除所述真皮组织中除真皮组织β层结构以外的其他层，获得真皮组织β层初级原料；步骤D：对所述真皮组织β层初级原料进行脱细胞处理，获得脱细胞真皮组织β层初级原料；步骤E：将经步骤D处理的脱细胞真皮组织β层初级原料在无菌、恒温条件下，于平衡液中混摇一定时间，复原所述脱细胞真皮组织β层初级原料中胶原蛋白、活性因子的生物性能；步骤F:将经步骤E中处理后的脱细胞真皮组织β层初级原料，在平衡液中处理，通过改变蛋白质膜的通透性和补充平衡离子的方式，封闭真皮组织β层初级原料的电位点，得到脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料。本专利技术的一个实施例中，所述步骤F中，通过组合离子或者单一离子来调平所述脱细胞后的真皮组织β层初级原料的电位差，达到封闭所述脱细胞后的真皮组织β层初级原料中蛋白质的电位点的目的。本专利技术的一个实施例中，所述步骤C中，去除真皮组织结构中除真皮组织β层结构以外的其他层的过程中，保留神经生长因子和巢蛋白-内功素，以利于建立细胞的非血管营养模式。本专利技术的一个实施例中，所述步骤D中，移除所述真皮组织β层初级原料中具有免疫原性的表皮细胞以及其他成体细胞，保留具有天然组织立体框架的胶原蛋白和弹力纤维，并维持真皮组织β层初级原料的脱细胞前结构。本专利技术的一个实施例中，所述步骤C中，利用固定液对所述真皮组织β层初级原料进行固定。本专利技术的一个实施例中，所述步骤E中，所述恒温条件中，温度选择范围为16-37摄氏度。本专利技术的一个实施例中，所述步骤E中，于平衡液中混摇的时间为4-24小时。本专利技术的一个实施例中，所制备的脱细胞真皮基质角膜或眼表组织修复材料直接用于人或动物的移植。本专利技术脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料的制备方法具有以下有益效果：本专利技术提供脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料的制备方法中，选取动物或者人体的真皮作为原料来源，拓展了原料的来源途径，降低了制备角膜替代材料的成本，且本专利技术的制备方法简单，制造成本低，该脱细胞真皮基质角膜和眼表组织修复材料可广泛应用于感染、外伤或组织病变导致角膜损伤的眼角膜再生性修复中。下面通过附图和实施例，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。附图说明图1为本专利技术的脱细胞真皮基质角膜材料植入实验兔随着时间变化生长情况的显微镜照片图；图2为本专利技术制备的脱细胞真皮基质角膜材料植入动物体后12小时的组织学切片照片图；图3为本专利技术制备的脱细胞真皮基质角膜材料植入动物体后72小时的组织学切片照片图；图4为本专利技术制备的脱细胞真皮基质角膜材料植入动物体后7天时的组织学切片照片图；图5为本专利技术制备的脱细胞真皮基质角膜材料植入动物角膜部位6周时照片图；图6为本专利技术制备的脱细胞真皮基质角膜材料植入动物角膜部位24周时照片图。具体实施方式本专利技术脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料的制备方法，其包括以下步骤：步骤A：选取哺乳动物体或人的真皮组织。哺乳动物体包括猪、牛、等，较佳的，选取人体上的真皮组织，哺乳动物不同部位的真皮的功能存在差异，且不同部位真皮所含基质蛋白及各种因子的类型、数量不同。根据不同部位真皮的组成结构，功能以及各种因子含量的不同，有针对性的选择相应部位的真皮。步骤B：通过对比分析所述真皮组织与角膜组织的结构，确定选取真皮组织结构中与所述角膜组织结构相近且相邻5层的真皮组织β层结构。角膜组织结构基本可以分为5层，分别为上皮层(epittheliallayer)、前弹力层(Bowman'smembrane)、基质层(Stroma)、后弹力层(Descemet'smembrane)和内皮层(Endotheliumlayer)。角膜组织各层的主要成分为功能细胞和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ型胶原蛋白，胶原蛋白分层有序地排列，其中，Ⅵ型胶原蛋白以网状结构存在，对角膜基质的有序排列也起着重要作用。直径统一且排列规则的Ⅰ型胶原蛋白是维持角膜透明的重要因素。本专利技术通过电子显微镜对角膜结构与大量的真皮层结构进行比对、对胶原蛋白类型定性比对，胶原蛋白的排列方向顺序进行比对，在250层真皮组织结构中确定了与角膜组织结构极为相近且相邻的5层结构，本专利技术将该相邻的5层结构命名为真皮组织β层结构。步骤C：去除真皮组织结构中除真皮组织β层结构以外的其他层，获得真皮组织β层初级原料。在对健康真皮进行处理过程中，对真皮组织β层初级原料通过固定液进行固定，对构成框架结构的胶原蛋白和附着的生长因子等进行保护，在去除真皮组织结构中除真皮组织β层结构以外的其他层的过程中，保留神经生长因子(NGFnervegrowthfactor)和巢蛋白-内功素(N-Enidogen-entactin)，制备的脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料植入动物体后，可加速神经纤维的生长，快速恢复被破坏的角膜边缘组织结构，有利于建立细胞的非血管营养模式。步骤D：对所述真皮组织结构中的真皮组织β层初级原料进行脱细胞处理。对真皮组织β层初级原料进行脱细胞处理，采用组织工程学和生物化学方法分离、破坏、移除真皮组织中的表皮细胞和其他成体细胞等具有免疫原性的物质，保留具有天然组织立体框架的胶原蛋白和弹力纤维等物质，并维持真皮组织β层初级原料的脱细胞前结构。具体的，本专利技术利用专利号为CN1130971C中脱细胞技术中的基础制备液，在其中加入特定酶和化学试剂制备成脱细胞及细胞外基质固定制剂，固定剂与真皮组织β层初级原料混置后进行恒温混摇操作，对真皮组织β层初本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤A：选取哺乳动物体或人体的真皮组织；步骤B：通过对比所述真皮组织与角膜组织的结构，确定所述真皮组织结构中与所述角膜组织结构相近且相邻5层的真皮组织β层结构；步骤C：去除所述真皮组织中除真皮组织β层结构以外的其他层，获得真皮组织β层初级原料；步骤D：对所述真皮组织β层初级原料进行脱细胞处理，获得脱细胞真皮组织β层初级原料；步骤E：将经步骤D处理的脱细胞真皮组织β层初级原料在无菌、恒温条件下，于平衡原液中混摇一定时间，复原所述脱细胞真皮组织β层初级原料中胶原蛋白、活性因子的生物性能；步骤 F:将经步骤E中处理后的脱细胞真皮组织β层初级原料，在平衡液中处理，通过改变蛋白质膜的通透性和补充平衡离子的方式，封闭真皮组织β层初级原料的电位点，得到脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料。

【技术特征摘要】
1.一种脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤A：选取哺乳动物体或人体的真皮组织；步骤B：通过对比所述真皮组织与角膜组织的结构，确定所述真皮组织结构中与所述角膜组织结构相近且相邻5层的真皮组织β层结构；步骤C：去除所述真皮组织中除真皮组织β层结构以外的其他层，获得真皮组织β层初级原料；步骤D：对所述真皮组织β层初级原料进行脱细胞处理，获得脱细胞真皮组织β层初级原料；步骤E：将经步骤D处理的脱细胞真皮组织β层初级原料在无菌、恒温条件下，于平衡液中混摇一定时间，复原所述脱细胞真皮组织β层初级原料中胶原蛋白、活性因子的生物性能；步骤F:将经步骤E中处理后的脱细胞真皮组织β层初级原料，在平衡液中处理，通过改变蛋白质膜的通透性和补充平衡离子的方式，封闭真皮组织β层初级原料的电位点，得到脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料；其中，步骤F中，通过组合离子或者单一离子来调平所述脱细胞后的真皮组织β层初级原料的电位差，从而封闭所述脱细胞后的真皮组织β层初级原料中蛋白质的电位点，使得真皮组织β层初级原料中蛋白所有电位点都为0。2.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质角膜及眼表组织修复材料的制备方法，其特征在于，所述步...

【专利技术属性】
技术研发人员：李燕青，李学民，张小明，
申请(专利权)人：北京清源伟业生物组织工程科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11