本发明专利技术公开了一种邻苯二甲酸二甲酯人工包被原制备及其用途；所述人工包被原结构式如下：制备时，4-硝基邻苯二甲酸与甲醇在强酸的催化作用下酯化反应得邻苯二甲酸二甲酯半抗原中间体4-硝基邻苯二甲酸二甲酯；4-硝基邻苯二甲酸二甲酯和锌粉在强酸的作用下发生还原反应得邻苯二甲酸二甲酯半抗原；采用戊二醛法，将所述半抗原与卵清白蛋白偶联反应，即得包被原DMP-OVA。本发明专利技术的包被原可以与被分析物邻苯二甲酸二甲酯形成直接竞争关系，都能特异性识别抗邻苯二甲酸二甲酯的多克隆抗体，为建立免疫检测方法奠定基础。此外，包被原的制备方法简单，稳定性好，成本低，易于工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于小分子有机污染物的免疫化学及生物分析
，设及有机合成、 免疫化学、分子生物学、理化检测等技术，具体设及一种邻苯二甲酸二甲醋人工包被原的制 备方法及用途。
技术介绍
邻苯二甲酸醋类塑化剂（缩写为PAEs)，又称献酸醋类，是一类由邻苯二甲酸与含 有4-15个碳的醇发生费歇尔（Fischer)醋化反应所形成的醋的重要衍生物的统称。运类物 质有特殊性气味，毒性较大，一般情况下状态为粘稠液体；液态条件下溫度范围宽，流动性 大，挥发性低，不溶于水，易溶于大多数有机溶剂。运类物质用途广泛，它不仅可作为食品包 装材料、玩具、农药载体、驱虫剂、润滑剂、乙締地板和壁纸、去泡剂、清洁剂、医用材料（如 人工屯、脏瓣膜等人工器官、血袋、注射器和胶管）和个人护理用品（主要有化妆品、香味品、 指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液）等近千种产品的生产原材料，还常作为塑料增塑剂被 用于改造塑料制品性能。 邻苯二甲酸二甲醋（英文名称：Dimethyl地thalate，简称DMP)，又名献酸二甲 醋、避蚊醋、驱蚊油等，CAS号为131-11-3,分子式为。讯1。〇4,分子量为194. 19,无色透明微 黄色油状液体，稍具芳香味，能与乙醇、乙酸等一般有机溶剂混溶，不溶于水和石油酸；高度 易燃，遇明火、高热、氧化剂有燃烧的危险。该物质微毒，对眼睛粘膜有较强的刺激性；可能 对胎儿造成伤害，对水生生物有极高毒性；有损害生育能力的危险性；吸入、皮肤接触及吞 食有毒；人体组织内可蓄积，从而抑制中枢神经系统。由于其具备良好的塑膜性、粘着性和 防水性，故常被用于制作醋酸纤维素的薄膜、清漆涂料、透明纸和成模塑料粉等；还可用作 驱蚊油、聚氣乙締涂料W及杀虫剂的溶剂3。近些年来，由于频频发现该物质在食品、水体中 的含量过高，因此，该物质含量的检测便备受关注。 目前，关于DMP的研究主要集中在水体、沉积物、大气等环境领域和生物体的毒性 方面，但样品的检测方法方面研究较少。目前对邻苯二甲酸二甲醋的检测手段主要为气相 色谱和高效液相色谱等仪器检测方法，运些方法虽然准确可靠，但对样品的预处理方法和 操作人员的专业性有很高的要求。正因为运些方法的处理复杂、耗时、仪器价格昂贵而不适 合推广使用，也不利于在环境污染事故现场快速检测。为克服运些缺点，寻求一种快速、简 便、灵敏且经济实用的分析方法就成为环境监测领域的主要研究方向。因此，开展研究并建 立有效、可靠的塑化剂的检测方法及标准，并通过相关的法规予W保障，成为一项极为重要 和迫切的工作。 0世纪60年代发展起来的免疫分析（Immunoassay,IA)是基于抗原和抗体的特异 性、可逆性结合反应的分析技术。免疫分析具有常规理化分析技术无可比拟的选择性和高 灵敏性，非常适合复杂介质中痕量组分的分析。因此免疫分析具有的特异性强、灵敏度高、 方法快捷简单、分析通量大、检测成本低等优点，使得该类方法可W满足简单、快速、灵敏地 检测持久性有机污染物的要求。1985年美国Cetus公司的K.B.Mullis和R.K.Saiki等发 明了一种特异性DNA体外扩增技术，成为化lymerase化ainReaction,简称PCR，即聚合酶 链式反应。1992年Sano等将免疫分析技术与PCR技术结合，发展出巧光免疫PCR技术。巧 光免疫PCR技术兼具了免疫分析的特异性强和PCR技术的灵敏度高（检测限高达10 11~ 10i2g/L)的特点，可用于检测环境中痕量污染物。 目前，尚无用巧光免疫PCR技术检测邻苯二甲酸二甲醋的相关报道。而制备合格 的邻苯二甲酸二甲醋人工包被原是建立邻苯二甲酸二甲醋生物免疫分析检测方法的关键， 更是建立DMP免疫检测分析方法的关键，运将具有重要的应用价值和理论研究意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术存在的缺陷，提供一种步骤简单，速度快，产 率高的邻苯二甲酸二甲醋人工包被原值MP-0VA)及其制备和用途；本专利技术制备的塑化剂邻 苯二甲酸二甲醋人工包被原值MP-0VA)为利用包被原、高特异性的多克隆抗体建立巧光免 疫PCR检测分析方法奠定基础。该巧光免疫PCR检测分析方法克服了现有检测方法的缺 点：样品预处理复杂费时，检测仪器昂贵，操作人员操作要求高，方法不易于推广，不能用于 环境污染事故的批量现场检测等。 本专利技术的目的是通过W下技术方案来实现： 第一方面，本专利技术设及一种邻苯二甲酸二甲醋人工包被原，其结构式如下： 第二方面，本专利技术设及一种邻苯二甲酸二甲醋人工包被原的制备方法，所述方法 包括： 采用戊二醒法，将邻苯二甲酸二甲醋半抗原与卵清 白蛋白（OVA)偶联反应，即得所述邻苯二甲酸二甲醋人工包被原值MP-0VA)。 优选的，所述偶联反应是在0~4°C冰浴遮光条件下进行的，反应时间为24~ 30h。所述偶联反应是在非质子性有机溶剂存在的条件下进行的，所述非质子性有机溶剂选 自N，N-二甲基甲酯胺或二甲亚讽。 优选的，所述方法还包括离屯、分离，透析上清液，再次离屯、分离得到所述邻苯二甲 酸二甲醋人工包被原的步骤。 优选的，所述邻苯二甲酸二甲醋半抗原、戊二醒和卵清白蛋白的摩尔比为1:3~ 5:0. 005 ~0. 01。 优选的，所述方法包括将所述邻苯二甲酸二甲醋半抗原溶解于非质子性有机溶剂 中形成半抗原溶液的步骤；所述非质子性有机溶剂选自N，N-二甲基甲酯胺或二甲亚讽。 优选的，所述邻苯二甲酸二甲醋半抗原是通过包括如下步骤的方法制备而得的：[001引 S1、在强酸性介质存在的条件下，4-硝基邻苯二甲酸与 甲醇发生醋化反应，生成4-硝基邻苯二甲酸二甲醋； S2、在非质子性有机溶剂存在的条件下，所述4-硝基邻苯二甲酸二甲醋和锋粉在 强酸的作用下发生还原反应，生成邻苯二甲酸二甲醋半抗原，即DMP半抗原，化学名称为 4-氨基邻苯二甲酸二甲醋，分子式Ci〇HiiN〇4,分子量209. 20。 优选的，步骤S1中，4-硝基邻苯二甲酸、甲醇、强酸性介质的摩尔比为1:5~ 6. 5:0. 5~0. 7 ;所述醋化反应的溫度为80~100°C，醋化反应时间为5~6小时；所述强 酸性介质选自浓盐酸、浓硫酸或浓硝酸。 优选的，步骤S2中，所述4-硝基邻苯二甲酸二甲醋与强酸、非质子性有机溶剂和 锋粉的摩尔比为1:20~22:550~570:20~22 (其中非质子性有机溶剂作为基质溶液并 不参与反应）；所述还原反应的溫度为25~28°C，还原反应时间为12~15小时。所述非 质子性有机溶剂选自苯或甲苯。所述强酸选自浓盐酸、浓硫酸或浓硝酸 优选的，步骤S1还包括醋化反应结束后蒸馈除去未反应的甲醇和生成的水，再趁 热将液体倒入冰水中，析出的固体粗品用10%NazCOs溶液洗涂至水层呈无色，重结晶，得到 纯化后的4-硝基邻苯二甲酸二甲醋的步骤。 优选的，步骤S2还包括还原反应结束后用冰水和强碱W终止反应，苯萃取反应 液，分离、干燥并减压蒸馈去除有机相，得到的粗品再用硅胶柱层析（洗脱剂为体积比为 1:8的乙酸和正己烧的混合液）纯化，得到纯化后的邻苯二甲酸二甲醋半抗原的步骤。有机 相W除去苯，后减压蒸馈， 优选地，所述采用戊二醒法将邻苯二甲酸二甲醋半抗原与蛋白质分子卵清白蛋白 OVA偶联制备人工包被本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种邻苯二甲酸二甲酯人工包被原，其结构式如下：
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：庄惠生，孙瑞艳，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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