本发明专利技术涉及禾本科(Poaceae)(真禾本科(true grasses))第5组变应原的重组变体的制备和使用，其特征在于与已知野生型变应原相比，IgE反应性降低，并同时基本保留与T-淋巴细胞的反应性。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】因脯氨酸残基突变而具有降低变应原性的真禾本科第5组 变应原的变体 本申请是申请日为2010年12月17日，申请号为201080061431. 9,专利技术名称为"因 脯氨酸残基突变而具有降低变应原性的真禾本科第5组变应原的变体"的专利技术专利的分案 申请。 专利
本专利技术涉及禾本科（Z3Oaceae)(真禾本科（true grasses))第5组变应原重组变 体的制备和使用，其特征在于与已知野生型变应原相比，降低IgE反应性，并同时基本保留 与T-淋巴细胞的反应性。 降低IgE反应性主要通过某些脯氨酸残基的取代或缺失来实现，所述脯氨酸残基 在第5组变应原中高度保守。另外，已认识到第211位氨基酸脯氨酸（Phi p 5. 0109编号） 是特异性影响变体在水性制剂中的溶解行为的关键位置。 这些低变应原性的变应原变体可用于患有禾草（grass)花粉变态反应的患者的 特异性免疫治疗（脱敏作用），或用于防止禾草花粉变态反应发展的预防性治疗中。 本专利技术优选实施方案涉及来自梯牧草（Timothy grass) (/5AJeiM?/Traieftse)花粉 的主要变应原Phl p 5的变体。 专利技术背景 1型变态反应具有全球重要性。工业化国家中有多达20%的人口遭受诸如变态反应性 鼻炎、结膜炎或支气管哮喘等疾病。 这些变态反应由各种起源的来源引起，例如树木和禾草（花粉）、真菌（孢子）、螨 (粪便）、猫或狗。变应原来源可直接释放到空气中（花粉、孢子），或可与柴油机灰粒（花 粉）或室内尘埃（螨粪便、皮肤颗粒、毛发）结合而到达空气中。因为变态反应-触发物质 位于空气中，所以亦使用术语空气源性变应原（aeroallergen)。 1型变态反应-触发物质为蛋白质、糖蛋白或多肽。这些变应原经由粘膜摄取后， 在致敏人群中与结合在肥大细胞表面的IgE分子反应。如果这些IgE分子通过变应原相互 交联，其结果是效应细胞分泌介质（例如组胺、前列腺素）和细胞因子，并因此产生相应的 变态反应症状。 多达40%的1型变态反应患者对真禾本科花粉提取物表现出特异IgE反应性 (Burney 等，1997，J. Allergy Clin. Immunol. 99:314-322 ;D'Amato 等，1998， Allergy 53: 567-578 ；Freidhoff 等,1986, J. Allergy Clin Immunology, 78, 1190-2002)。真禾本科（禾本科）包括10000个以上的物种，迄今认为其中超过20种为 变态反应症状的触发物（Andersson 和 Lidholm, 2003，Int. Arch. Allergy Tmmunol. 130:87-107 ；Esch, 2008, Allergy and Allergy Immunotherapy, Clinical Allergy and Immunology Series, 107-126)〇 大多数变态反应-触发性真禾本科属于早熟禾亚科也ae)。除作为野生 形式存在的禾草物种外，例如绒毛草（??/6 1)(绒毛草）、喜湿藹草（/%a Jaris a^/aiica)(金丝雀藹草）、黄花茅（AwiAoxawiA· oobraii/a?)(黄花草）、鸭茅（Zfecijiis ^/oazeraia)(果园草）、牛尾草（/^stoca jOrateasis)(牛尾草）、草地早熟禾（/?? /Traieftsis)(肯塔基蓝草）或多年生黑麦草（ZoJiiM? pereiMe)(黑麦草），栽培谷类植物例 如普通小麦aesiiraffi)(小麦）、黑麦（SecaJe cereaJe)(黑麦）和大麦（/ZorofeiM? n/办are)(大麦）亦是该亚科的已知成员。 关于其变应原研究得最为透彻的早熟禾亚科（/5Ooiofeae)物种之一是梯牧草，梯 牧草作为野生植物在世界范围内广泛分布，作为牧草植物和耐寒性饲用草（hardy feed grass)还有商业作用。 依据人群中单种变应原分子与变态反应患者的IgE抗体反应的相对频率，对主要 和次要变应原作了区分。 梯牧草中以下六种变应原可视为主要变应原：Phl p I (Petersen等，1993，J. Allergy Clin. Tmmunol. 92: 789-796)、Phl p 5 (Matthiesen 和 L5wenstein, 1991， Clin. Exp. Allergy 21: 297-307 ;Petersen 等，1992, Int. Arch. Allergy Tmmunol · 98: 105-109)、Phl p 6 (Petersen 等，1995，Int. Arch. Allergy Tmmunol. 108, 49-54)、Phl p 2/3 (Dolecek 等，1993，FEBS 335 (3) : 299-304)、Phl p 4 (Haavik 等，1985，Int. Arch. Allergy Appl. Tmmunol. 78: 260-268 ;Valenta 等，1992， Int. Arch. Allergy Immunol. 97: 287-294 ；Nandy 等,Biochem. Biophys. Res. Commun·，2005，337(2): 563-70)和 Phl p 13 (Suck 等，2000，Clin. Exp. Allergy 30: 1395-1402)。 梯牧草中占优势的主要变应原为Phl p I和Phl p 5 (Andersson和Lidholm, 2003, Int. Arch. Allergy Tmmunol. 130:87-107)，其中 Phl p 5 以两种形式存在，即 5a和5b，其由独立的基因编码，在分子量上有差别。按照变应原的正式命名法，将Phl p 5a称为Phl p 5. 01而将Phl p 5b称为Phl p 5.02 (WH0/IUIS变应原命名小组委员会， WWW. allergen, org)。Phl p 5a和Phl p 5b二者的氨基酸序列都来源于克隆的cDNA序 列。已鉴定两种同工型的天然变体，两者通过点突变区别于彼此，对应于不同的等位基因 形式（Vrtala 等，1993，J. Immunol·, 151: 4773-4781 ;Gelhar 等，1997，Eur. J. Biochem·, 247: 217-23)。这些变体在 WH0/IUIS 数据库中记录为 Phl p 5. Olxx 和 Phl p 5· 02xx〇 天然Phl p 5a (nPhl p 5a)为约32 kDa的蛋白质，与85-90%的禾草花粉变态反 应患者的 IgE 抗体反应（Rossi 等，2000，Allergy Int.，49: 93-97)〇 来自禾本科特别是早熟禾亚科的亲缘真禾本科物种（例如多年生黑麦草和草地 早熟禾）的花粉，含有与Phl p 5同源的变应原，将其和Phl p 5-起称作第5组变应原。这 些第5组变应原的高度结构同源性相应地导致分子与IgE抗体的高度交叉反应性（Lorenz 等，200本文档来自技高网...
【技术保护点】
Phl p 5、Lol p 5、Poa p 5、Hol l 5、Dac g 5、Pha a 5、Ant o 5、Fes p 5、Hor v 5、Sec c 5或Tri a 5的低变应原性变体，其中将在比对中对应于野生型Phl p 5.0109氨基酸序列的第57、58、117、146、155、180、211、229位脯氨酸的脯氨酸通过缺失和氨基酸取代而突变，其特征在于所述缺失和氨基酸取代选自：a. 选自P57、P58、P117、P146、P155、P211和P229的单个脯氨酸缺失，b. 选自P57、P58、P117、P146、P155、P180、P211和P229的脯氨酸缺失的组合，c. 选自P117、P146、P155和P229的单个脯氨酸取代，d. 选自P57、P58、P117、P146、P155、P180、P211和P229的脯氨酸取代的组合，e. 选自P57、P58、P117、P146、P155、P180、P211和P229的脯氨酸缺失和取代的组合。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：M瓦尔德，A南迪，H菲比希，B韦伯，H卡勒特，G雷泽，O克伦威尔，
申请(专利权)人：默克专利股份公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE
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