本发明专利技术涉及高产氨和吲哚乙酸的巴西固氮螺菌R发酵培养基及其应用，可有效解决在同一培养基上既高产氨又高产吲哚乙酸的问题，方法是，由以下重量百分比计的：酵母粉0.25～1%、豆粕粉0.5～2%、NaCL 0.1～1.0%、CuSO4 0.001～0.005%、色氨酸0.01%～0.15%和余量为水制成，先将色氨酸用0.01M NaOH溶液溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液；再将酵母粉、豆粕粉、NaCL、CuSO4和水混合均匀，121℃灭菌30min，冷却至室温，然后加入色氨酸溶液混匀，用盐酸或NaOH调pH为7.0～9.0；本发明专利技术提供发酵培养基及培养条件简单，操作方便，生产成本低，氨和吲哚乙酸产量高，易于工业化生产，节能环保，经济和社会效益巨大。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物，特别是一种高产氨和吲哚乙酸的巴西固氮螺菌R发酵培养基及其应用。
技术介绍
近年来，固氮菌作为一种优良的生物固氮资源，国内外对其进行了大量研宄。有研宄表明:固氮菌可以将分子态氮还原为氨，自生固氮体系所固定的氮大部分用于构成菌体自身，在固氮过程中不会在细胞中积累氨，也很少有氨分泌到菌体外.只有在菌体死亡后才释放出来。而共生固氮体系则能把大部分同化的氨直接分泌出来，供宿主吸收利用。联合固氮体系是介于自生与共生之间的类型，但不论那个体系的固氮作用，均有受氨的抑制效应问题。因此，使固氮微生物能在结合态氮存在下继续发挥固氮作用，并把所有固定的氮分泌出来为植株所直接利用，是今后研宄的重点和热点。巴西固氮螺菌{Azospirillum brasilense)是一种行自由生活、好氧的固氮微生物，广泛存在于禾木科植物的根际土壤中，可与这些禾本科植物在微好氧的条件下进行联合固氮作用，具有作为生物肥料的潜能。巴西固氮螺菌的促生长作用不仅在于其具有较强固氮能力，而且在于其能够合成植物生长素吲哚乙酸，吲哚乙酸是吲哚乙酸属吲哚类化合物，是植物体内普遍存在的内源生长素，又名茁长素、生长素。吲哚乙酸能诱导番茄单性结实和坐果，增加甜菜块根产量和含糖量等，在农业生产中被广泛使用。另外，巴西固氮螺菌除在根际土壤中生长外，还可定殖在植物根部表皮、粘质鞘套或皮层细胞之间，表现出较强的固氮活力。但其细胞膜上的铵载体影响了氮素由固氮菌向植物的转运，其固定的氮难以被植物体吸收利用，但作为固氮菌，只有具有泌氨能力的巴西固氮螺菌才能在其生长过程中，源源不断地为植物输送可吸收利用的铵离子，为作物提供生长所需的氮源，从而减少氮肥的用量。但是目前巴西固氮螺菌作为微生物菌剂尚未规模化使用，其原因主要是:(1)发酵单位活菌数较低，一般仅有30-50亿/ml ; (2)保存时间较短，液体菌剂在室温下保存仅3个月；(3)发酵成本高。因此，巴西固氮螺菌规模化应用首要要解决的问题是其发酵水平和成本，发酵水平的提高不仅可降低发酵成本、增加活菌数，而且还能提高其代谢产物的产量，保证产品质量，有益于应用效果的体现和该类菌剂及其代谢产物的商品化。但是本专利技术人经研宄发现，增加活菌数并不能有效地延长菌剂的保存时间，而问题关键在于如何增加代谢产物含量和降低发酵成本，但目前未见有公开报导。目前，国内外对固氮菌的研宄主要集中在其固氮能力和产植物生长素方面，而在有结合氮源存在的情况下对其泌氨能力研宄还不多见，有学者曾报道过水稻根系分离菌泌氨菌株的筛选试验，供试菌株中大部分没有泌氨作用，只能消耗培养基中的氮源，只有维涅兰德固氮菌230 ( Azotobacter vineIandii )菌株在以含氮较低的每升加1.0克酵母膏的慢型快长培养基中其泌氨量为固氮量的2.05%，泌氨作用较强。本专利技术人曾公开过一株高泌氨高产吲哚乙酸的巴西固氮螺菌R7，但是菌株R7只有在无氮源的甘油半固体培养基上能分泌约14 mmol / L的氨，而在添加了色氨酸的LB培养基中能够合成58.8 ug/mL的吲哚乙酸(IAA)，并不是在同一种培养基上既泌氨又产吲哚乙酸；那么能否在同一培养基上能大量产氨和吲哚乙酸，尚未见到有“高产氨和吲哚乙酸巴西固氮螺菌的发酵培养基”的公开报道。
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种高产氨和吲哚乙酸的巴西固氮螺菌R发酵培养基及其应用，可有效解决在同一培养基上既高产氨又高产吲哚乙酸的问题。本专利技术解决的技术方案是，所述的巴西固氮螺菌R，分类命名为巴西固氮螺菌{Az ο spirillum2012年4月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为:CGMCC NO 6029，地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，高产氨和吲哚乙酸的巴西固氮螺菌R发酵培养基由以下重量百分比计的:酵母粉0.25?1%、豆柏粉 0.5 ?2%、NaCL 0.1 ?1.0%、CuSO4 0.001 ?0.005%、色氨酸 0.01% ?0.15% 和余量为水制成，其中，先将色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μ m滤膜过滤除菌，成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液；再将酵母粉、豆柏粉、NaCL, CuSOjP水混合均匀，121°C灭菌30min，冷却至室温，然后加入色氨酸溶液混匀，用盐酸或NaOH调pH为7.0?9.0 ; 所述的豆柏粉为大豆榨油后的一级压榨豆柏粉，为巴西固氮螺菌R的生长提供氮源，能提尚卩引噪乙酸的广量； 所述的水为蒸馏水或纯净水； 酵母粉主要为巴西固氮螺菌R的生长提供碳源和能量，能促进氨的分泌；NaCL和CuSO4为巴西固氮螺菌R的生长提供无机盐离子，有利于吲哚乙酸的合成。该发酵培养基在作为高产氨和吲哚乙酸的巴西固氮螺菌R发酵培养基中的应用。本专利技术提供发酵培养基及培养条件简单，操作方便，生产成本低，氨和吲哚乙酸产量高，易于工业化生产，节能环保，经济和社会效益巨大。【具体实施方式】以下结合实施例和具体情况对本专利技术的【具体实施方式】作详细说明。本专利技术在具体实施中，可由以下实施例给出。实施例1 本专利技术在具体实施中，由以下重量百分比计的:酵母粉0.5?0.8%、豆柏粉0.9-1.6%、NaCL 0.3-0.5%,CuSO4 0.002?0.004%、色氨酸0.06%?0.1%和余量为水制成，其中，先将色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μ m滤膜过滤除菌，成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液；再将酵母粉、豆柏粉、NaCL, CuSOjP水混合均匀，121°C灭菌30min，冷却至室温，然后加入色氨酸溶液混匀，用盐酸或NaOH调pH为7.0?9.0。实施例2 本专利技术在具体实施中，还可由以下重量百分比计的:酵母粉0.6%、豆柏粉1.25%、NaCL0.55%、CuSO4 0.003%、色氨酸0.08%和余量为水制成，其中，先将色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌，成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液；再将酵母粉、豆柏粉、NaCL、CuStVfP水混合均匀，121°C灭菌30min，冷却至室温，然后加入色氨酸溶液混匀，用盐酸或NaOH调pH为8.0。实施例3 本专利技术在具体实施中，由以下重量百分比计的:酵母粉0.3%、豆柏粉1.9%, NaCL 0.2%、CuSO4 0.004%、色氨酸0.02%和余量为水制成，其中，先将色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μ m滤膜过滤除菌，成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液；再将酵母粉、豆柏粉、NaCL,CuSCVFP水混合均匀，121°C灭菌30min，冷却至室温，然后加入色氨酸溶液混匀，用盐酸或NaOH 调 pH 为 7.5。实施例4 本专利技术在具体实施中，由以下重量百分比计的:酵母粉0.9%、豆柏粉0.6%, NaCL 0.9%、CuSO4 0.002%、色氨酸0.14%和余量为水制成，其中，先将色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μ m滤膜过滤除菌，成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液；再将酵母粉、豆柏粉、NaCL,CuSCVFP水混合均匀，121°C灭菌30min，冷却至室温，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高产氨和吲哚乙酸的巴西固氮螺菌R发酵培养基，其特征在于，由以下重量百分比计的：酵母粉0.25～1%、豆粕粉0.5～2%、NaCL 0.1～1.0%、CuSO4 0.001～0.005%、色氨酸0.01%～0.15%和余量为水制成，其中，先将色氨酸用0.01M NaOH溶液溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液；再将酵母粉、豆粕粉、NaCL、CuSO4和水混合均匀，121℃灭菌30min，冷却至室温，然后加入色氨酸溶液混匀，用盐酸或NaOH调pH为7.0～9.0；所述的巴西固氮螺菌R，分类命名为巴西固氮螺菌（Azospirillum brasilense），2012年4月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO 6029，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王继雯，岳丹丹，刘莉，赵俊杰，李冠杰，陈国参，慕琦，胡宜亮，巩涛，杨文玲，甄静，
申请(专利权)人：河南省科学院生物研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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