一种抗病毒杜仲提取物制造技术

本发明专利技术公开了一种抗病毒杜仲提取物，属于中药领域，具体涉及一种杜仲提取物及含有该提取物的药物制剂。该杜仲提取物具有抑制SAH水解酶的作用，可以用来开发制备成抗病毒药物。本发明专利技术提供的液相分析方法可以用于建立该杜仲提取物的指纹图谱，用于控制不同产地、批次药材制备的提取物的批间差异性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药领域，具体涉及一种杜仲提取物及含有该提取物的药物制剂，该杜仲提取物可以用来制备抗病毒药物。
技术介绍
故俠Eucommia uImoides Oliv.属被子植物门，杜仲科，杜仲属，落叶乔木，高达20m，树皮灰褐色，连同枝、叶、根均含胶，折断有银白色细丝。叶椭圆或椭圆伏卵型，长6?18cm，边缘有锯齿，下边脉上有毛，叶柄长I?2cm，果为翅果扁平而薄，内含一种子。杜仲作为中药在我国已有2000多年的药用历史，《神农本草经》和《本草纲目》均将其列为上品，其具有多种功效，主要用于治疗肾虚腰痛，筋骨无力，妊娠漏血，胎动不安，高血压症。近年来，各国学者对杜仲化学成分进行了大量研宄，目前分离得到并经鉴定的有机化合物有70种以上，无机矿物元素不少于15种。研宄发现，杜仲皮、花、叶和枝条等各部分中含有相似的化学成分，主要包括木脂素类、环烯醚萜类、黄酮类和留体类等有机化合物。现代药理学证明，杜仲具有多种功能活性，如降血压、抗衰老、抗癌、抗菌、镇痛、消炎，利尿、镇静、安神，抗病毒作用，增强机体非特异免疫力，并能对细胞免疫进行双相调节等功效，另外对神经中枢也有一定作用。杜仲也因其显著的生理活性得到了众多学者的关注。现代研宄表明，有些植物不但具有调节机体的免疫功能，还具有非特异性的抗病毒功能。S-腺苷-L-高半脱氨酸水解酶(S-Adenosyl-L-homocysteine hydrolase, SAH 水解酶)是一类具有独特广谱抗病毒活性的腺苷衍生物的作用靶，尤其是抗出血热病毒抑制剂的目的靶，广泛存在于脊椎动物(如人、牛、狗、兔、大鼠、小鼠)、植物、真菌及其他微生物细胞内，具有重要的生理功能。SAH水解酶与转甲基作用密切相关，真核细胞及病毒mRNA5’-末端必须具有甲基化的帽状结构，才能进行翻译。mRNA 5’-末端甲基化依赖于腺苷甲硫氨酸的多种甲基转移酶催化，SAH是酶反应产物，亦是该酶的竞争性反馈抑制剂。SAH水解酶可将SAH水解成腺苷及L-高半胱氨酸，该反应是可逆的，体外趋向合成，体内趋向水解。体内转甲基化产生的SAH被SAH水解酶不断水解，使转甲基反应继续进行，无SAH的累积。如SAH水解酶被抑制，细胞内SAH积累，抑制转甲基酶，进而影响mRNA功能，病毒蛋白不能合成，也就不能生成子代病毒，病毒复制受到抑制。大多数病毒mRNA需甲基化的帽状结构，且对转甲基酶的抑制比细胞mRNA敏感，细胞内SAH浓度稍有增加，便首先受到波及，此特点赋于SAH水解酶抑制剂有选择性。因此，SAH水解酶在国际上被用于作为筛选抗出血热病毒抑制剂的体外筛选模型。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种杜仲提取物，该提取物的制备方法和液相分析方法，含有该提取物的药物制剂及利用该提取物制备抗病毒药物的用途。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的: 一种杜仲提取物，该提取物由以下方法制备: 步骤一:杜仲药材粉碎，水蒸汽蒸透，烘干； 步骤二:用85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液； 步骤三:对步骤二浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； 步骤四:正丁醇萃取物用AB-8大孔树脂富集，先用15%乙醇冲洗7个柱体积除去多糖，再用60%乙醇洗脱8个柱体积，收集60%洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。进一步地，步骤一中蒸制方法为:高压灭菌锅120°C蒸制4小时。为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同产地、批次药材制备的杜仲提取物批间差异，所述提取物的液相分析方法为: 色谱柱:Agilent Zorbax SB-C18 柱(4.6mmX 250mm，5 μ m); 流动相:A为乙腈，B为0.4%磷酸溶液； 梯度洗脱程序:0.0l-lOmin, A 10% — 15% ；10~30min, A 15% — 48% ；30~55min, A48% — 78% ；55~65min, A 78% — 10% ； 流动相流速:1.0mL.mirT1; 检测波长:360nm ;柱温:30°C ； 进样量:10 μ L。药物制剂，含有治疗有效量的所述杜仲提取物和药学上可接受的载体。所述的杜仲提取物在制备抗病毒药物中的应用。所述的药物制剂在制备抗病毒药物中的应用。本专利技术提取物用作药物时，可以直接使用，或者以药物制剂的形式使用。所述药物制剂含有治疗有效量的本专利技术杜仲提取物，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本专利技术的药物制剂以单位体重服用量的形式使用。本专利技术提取物可通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。【附图说明】图1为杜仲提取物HPLC分析图谱； 图2为空白对照曲线及SAH水解酶活性测定结果； 图3为杜仲提取物对SAH水解酶的抑制作用。【具体实施方式】下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容，但并不以此限定本专利技术保护范围。尽管参照较佳实施例对本专利技术作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本专利技术的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的实质和范围。主要试剂和材料:杜仲药材购自安徽亳州中药材市场；食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；医药级AB-8大孔树脂购自天津波鸿树脂有限公司；乙腈为HPLC级，购于TEDIA ;85%磷酸为HPLC级，购于TEDIA ;色谱用纯净水为哇哈哈纯净水。wistar大鼠，哈尔滨医科大学实验动物中心。实施例1:杜仲提取物制备 取杜仲药材5kg粉碎，用纱布包裹，置于高压灭菌锅中蒸制4小时，温度120°C，取出置烘干箱中烘干；烘干药材用85%乙醇热回流提取三次，每次提取2小时，每次用85%乙醇15L，合并提取液，浓缩至无醇味(3L);浓缩液依次用石油醚(3L X 3次)、乙酸乙酯(3L X 3次)和水饱和的正丁醇(3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；正丁醇萃取物用AB-8大孔树脂富集，先用15%乙醇冲洗7个柱体积出去多糖，再用60%乙醇洗脱8个柱体积，收集60%洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥(625g)。实施例2:液相色谱分析 供试品溶液配制:取实施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加30mL10%乙腈水溶液超声溶解，冷却至室温后，继续加10%乙腈水溶液定容。分析方法: 高效液相色谱仪:Agilent 1260，当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杜仲提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制备：步骤一：杜仲药材粉碎，水蒸汽蒸透，烘干；步骤二：用85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液；步骤三：对步骤二浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；步骤四：正丁醇萃取物用AB‑8大孔树脂富集，先用15%乙醇冲洗7个柱体积除去多糖，再用60%乙醇洗脱8个柱体积，收集60%洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐蒙蒙，
申请(专利权)人：徐蒙蒙，
类型：发明
国别省市：浙江;33