酶的自然变异体的获取方法及超耐热性纤维二糖水解酶技术

一种有选择性地获取具有活性的酶的自然变异体的方法，包括1)从由环境微生物菌丛宏基因组DNA碱基序列组成的基因组数据库中，检测具有酶活性的蛋白质ORF序列；2)使用基于该ORF序列而设计的引物，对至少一个环境微生物菌丛宏基因组DNA进行PCR克隆，获得至少一个由该ORF序列的全长、该ORF序列的部分序列、或编码该ORF序列所编码的氨基酸序列中至少缺失、取代或添加了一个氨基酸残基的氨基酸序列的碱基序列所组成的PCR克隆；3)对在工序2)中得到的各PCR克隆，确定碱基序列及该碱基序列所编码的氨基酸序列；4)测定在工序2)中得到的各PCR克隆所编码的蛋白质的酶活性，选择具有活性的酶的自然变异体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种酶的自然变异体的获取方法，以及通过该方法获得的超耐热性纤 维二糖水解酶（celIobiohydrolase)。 本申请要求2014年3月13日在日本提出的特愿2014-050083号申请的优先权， 并将其内容引用在本申请中。
技术介绍
在地球上存在有丰富的木质纤维素生物质，人们期待以将其作为原料的乙醇等生 物燃料来替代化石燃料成为运输用能源。将木质纤维素转变成乙醇，需要纤维素、半纤维素 的糖化。在纤维素糖化中，有硫酸糖化和酶糖化两种方法。通常，基于统称为纤维素酶的糖 苷水解酶的糖化与硫酸糖化相比，具有不产生硫酸淤渣、能源投入量少以及不会引起过分 解、收率高等优点。 另一方面，构成植物细胞壁的纤维素，其具有相互由坚固的氢键连接的结晶结构， 因此几乎不溶于水，基于酶的纤维素水解为固液反应。固液反应是在固体表面上进行结晶 性纤维素的水解，因此，基于酶的糖化效率非常低。例如，作为主要的纤维素水解酶的纤维 二糖水解酶（CBH)与其它多糖类分解酶相比，水解速度要慢一位数至两位数左右，因此，纤 维素生物质的糖化需要大量的酶，这形成纤维素类生物燃料的主要的成本因素。为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种选择性地获取具有活性的酶的自然变异体的方法，其特征在于，该方法包括以下工序：(1)从由环境微生物菌丛宏基因组DNA的碱基序列组成的基因组数据库中，检测具有酶活性的蛋白质ORF序列的工序；(2)使用基于所述ORF序列而设计的引物，对至少一个环境微生物菌丛宏基因组DNA进行PCR克隆，获得至少一个由所述ORF序列的全长、所述ORF序列的部分序列、或编码所述ORF序列所编码的氨基酸序列中至少缺失、取代或添加了一个氨基酸残基的氨基酸序列的碱基序列所组成的PCR克隆的工序；(3)对在所述工序(2)中得到的各PCR克隆，确定碱基序列及该碱基序列所编码的氨基酸序列的工序；(4)测定在所述工序(2)中得到...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：须田汀，大熊二郎，山口明日香，广濑佳嗣，近藤康弘，
申请(专利权)人：本田技研工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP