用于制备基于乳的蛋白质水解产物的方法技术

本发明专利技术涉及用于制备基于乳的蛋白质水解产物的方法，具体地涉及一种用于制备基于乳的蛋白质水解产物的酶促方法及此类水解产物的用途，例如在婴儿配方组合物中。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术申请是基于申请日为2010年3月31日、申请号为“201080014596.0”(国际申请号为PCT/EP2010/054290)，名称为“用于制备基于乳的蛋白质水解产物的方法”的专利技术专利申请的分案申请。关于序列表本申请包括计算机可读形式的序列表。通过述及将该计算机可读形式收入本文。专利
本专利技术涉及一种用于制备基于乳的蛋白质水解产物的酶促方法及此类水解产物的用途，例如在婴儿配方组合物中。专利技术背景已经开发了婴儿配方，其容许取代母乳喂养婴儿。此类婴儿配方应当完全满足婴儿的营养要求，直到引入适宜的补充喂食。另外，味道是重要的，因为至少家长更喜欢没有苦味的婴儿配方。代替普通牛奶，包含水解的乳蛋白质(例如部分水解的乳清蛋白质或广泛水解的酪蛋白)的婴儿配方常常用作此类配方，变应原性较低且仍具有可接受的味道。文献中记载的用于制备部分水解产物的方法常常包括使用胰酶，诸如通过对猪胰组织的提取生产的胰蛋白酶制备物(参见例如WO9304593A1，US5039532A)。记载的一些方法包括使用胰蛋白酶和糜蛋白酶的混合物。例如EP0353122A披露了一种使用胰蛋白酶和糜蛋白酶的混合物来制备低变应原性乳清蛋白质水解产物的方法，其中糜蛋白酶/胰蛋白酶活性的比例为1.5-3.0。在EP0631731A1中，以USP单位计，具有1.3至18、更优选4至6的胰蛋白酶对糜蛋白酶比例的胰蛋白酶和糜蛋白酶混合物据说通常产生具有期望特性的水解产物。出于几个原因，使用自微生物生成的蛋白水解酶可赋予益处。例如，自微生物生产酶高效且易于控制。因此，可大量地且高纯度地生产此类酶。还有，使用微生物酶会有助于克服在自动物来源提取酶方面与QA升高有关的困难。本专利技术的专利技术人的一个目标是开发一种用由微生物生成的酶来制备如下的基于乳的蛋白质水解产物的方法，该基于乳的蛋白质水解产物具有低变应原性。另一个目标是开发一种用由微生物生成的酶来制备如下的基于乳的蛋白质水解产物的方法，该基于乳的蛋白质水解产物具有与用包含胰蛋白酶和糜蛋白酶的提取制备物制备的水解产物的蛋白质片段谱相似的蛋白质片段谱。另一个目标是开发一种用由微生物生成的酶来制备如下的基于乳的蛋白质水解产物的方法，该基于乳的蛋白质水解产物具有可接受的味道。特别地，非常希望获得如下的部分乳清蛋白质水解产物，其具有低变应原性，具有与用包含胰蛋白酶和糜蛋白酶的提取制备物制备的水解产物的蛋白质片段谱相似的蛋白质片段谱，和/或具有可接受的味道，特别是在苦味方面。专利技术概述本专利技术的专利技术人令人惊讶地发现由微生物生成的酶可用于生产基于乳的蛋白质水解产物，例如供包括在婴儿配方中。因此，本专利技术涉及一种用于制备基于乳的蛋白质水解产物的方法，其包括用a)自微生物生成的胰蛋白酶样内肽酶和b)至少一种自微生物生成的其它内肽酶处理基于乳的蛋白质材料(proteinaceousmaterial)的溶液。具体地，本专利技术涉及如下各项：1.一种用于制备基于乳的蛋白质水解产物的方法，其包括用a)自微生物生成的胰蛋白酶样内肽酶和b)至少一种自微生物生成的其它内肽酶处理基于乳的蛋白质材料的溶液。2.依照项1的方法，其中该胰蛋白酶样内肽酶源自镰孢属(Fusarium)的菌株。3.依照前述项任一项的方法，其中该胰蛋白酶样内肽酶选自下组：i)包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQIDNO:2、4或6任一的成熟多肽具有至少60％同一性；ii)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在至少低严格条件下与下述杂交：(i)SEQIDNO:1、3或5任一的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQIDNO:1、3或5任一的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；iii)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含与SEQIDNO:1、3或5任一的成熟多肽编码序列具有至少60％同一性的核苷酸序列；和iv)SEQIDNO:2、4或6任一的成熟多肽的包含一个或多个(几个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入的变体。4.依照前述项任一项的方法，其中胰蛋白酶样内肽酶对基于乳的蛋白质的比例为0.01-10％重量/重量、优选0.01-5％、更优选0.05-2.5％、甚至更优选0.5-1％。5.依照前述项任一项的方法，其中该至少一种其它内肽酶对在酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸和组氨酸的羧基末端侧处的切割具有比在精氨酸和赖氨酸的羧基末端侧上的切割更高的特异性。6.依照前述项任一项的方法，其中该至少一种其它内肽酶具有至少3的糜蛋白酶比例。7.依照前述项任一项的方法，其中该至少一种其它内肽酶是源自拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)、绿僵菌属(Metarhizium)或小枝孢属(Brachysporiella)的菌株。8.依照前述项任一项的方法，其中该至少一种其它内肽酶选自下组：i)包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQIDNO:8、10或12任一的成熟多肽具有至少60％同一性；ii)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在至少低严格条件下与下述杂交：(i)SEQIDNO:7、9或11任一的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQIDNO:7、9或11任一的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；iii)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含与SEQIDNO:7、9或11任一的成熟多肽编码序列具有至少60％同一性的核苷酸序列；和iv)SEQIDNO:8、10或12任一的成熟多肽的包含一个或多个(几个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入的变体。9.依照前述项任一项的方法，其中至少一种其它内肽酶对基于乳的蛋白质的比例为0.001-1％重量/重量、优选0.001-0.5％、更优选0.005-0.25％、甚至更优选0.02-0.1％。10.依照前述项任一项的方法，其中基于内肽酶的重量，以胰蛋白酶样内肽酶添加浓度的2％-50％的浓度添加该至少一种其它内肽酶。11.依照前述项任一项的方法，其中在约40℃至60℃的温度，在范围6.5至8.5的pH值在1至6小时的过程中进行水解。12.依照前述项任一项的方法，其中获得的蛋白质水解产物具有5-30％、优选10-25％和更优选12-20％的水解程度。13.依照前述项任一项的方法，其中获得的蛋白质水解产物由肽构成，其中以重本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于制备基于乳的蛋白质水解产物的方法，其包括用a)自微生物生成的胰蛋白酶样内肽酶和b)至少一种自微生物生成的其它内肽酶处理基于乳的蛋白质材料的溶液。

【技术特征摘要】
2009.04.02 EP 09157185.11.一种用于制备基于乳的蛋白质水解产物的方法，其包括用a)自微生物
生成的胰蛋白酶样内肽酶和b)至少一种自微生物生成的其它内肽酶处理基
于乳的蛋白质材料的溶液。
2.依照权利要求1的方法，其中该胰蛋白酶样内肽酶源自镰孢属
(Fusarium)的菌株。
3.依照前述权利要求任一项的方法，其中该胰蛋白酶样内肽酶选自下组：
i)包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQIDNO:2、4或6任一
的成熟多肽具有至少60％同一性；
ii)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在至少低严格条件下与下述
杂交：(i)SEQIDNO:1、3或5任一的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQIDNO:
1、3或5任一的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长
互补链；
iii)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含与SEQIDNO:1、3或5
任一的成熟多肽编码序列具有至少60％同一性的核苷酸序列；和
iv)SEQIDNO:2、4或6任一的成熟多肽的包含一个或多个(几个)氨基酸
的取代、缺失、和/或插入的变体。
4.依照前述权利要求任一项的方法，其中胰蛋白酶样内肽酶对基于乳的
蛋白质的比例为0.01-10％重量/重量、优选0.01-5％、更优选0.05-2.5％、甚至
更优选0.5-1％。
5.依照前述权利要求任一项的方法，其中该至少一种其它内肽酶对在酪
氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸和组氨酸的羧基末端侧处的切
割具有比在精氨酸和赖氨酸的羧基末端侧上的切割更高的特异性。
6.依照前述权利要求任一项的方法，其中该至少一种其它内肽酶具有至
少3的糜蛋白酶比例。
7.依照前述权利要求任一项的方法，其中该至少一种其它内肽酶是源自
拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)、绿僵菌属(Metarhizium)或小枝孢属
(Brachysporiella)的菌株。
8.依照前述权利要求任一项的方法，其中该至少一种其它内肽酶选自下
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【专利技术属性】
技术研发人员：PR奥斯特加德，S厄恩斯特，GB林格莱夫，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK