用于调节FGFR3的表达的组合物和方法技术

本文公开了靶向并与编码FGFR3的核酸分子杂交导致FGFR3的表达减少的寡核苷酸。FGFR3异常表达的减少对于治疗一些医学病症，如软骨发育不全是有益的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于调节FGFR3的表达的组合物和方法领域本申请涉及靶向并与编码3型成纤维细胞生长因子受体(fibroblastgrowthfactorreceptortype3，FGFR3)的核酸杂交的寡核苷酸和相关的药物组合物，并且涉及使用所述寡核苷酸调节FGFR3的表达的方法。具体地，特定的实施方案涉及与编码FGFR3的核酸(如mRNA)杂交的反义寡核苷酸，并且涉及使用所述反义寡核苷酸调节FGFR3的表达的方法。FGFR3的表达的减少对于一定范围的医学病症(如软骨发育不全(achondroplasia))是有益的。背景成纤维细胞生长因子受体(FGFR)是针对成纤维细胞生长因子的高亲和力受体。这些因子在细胞生长、分化和其他生物学过程中具有多样性的作用，其准确的功能依赖于靶细胞和发育阶段。已经发现FGFR基因的突变引起多种病症。例如，在颅缝早闭(craniosynostoses)中发生FGFR1和FGFR2突变，并且FGFR3中的突变已经参与骨骼发育不良，如软骨发育不全，软骨发育不良(hypochondroplasia)和致死性发育不全(thanatophoricdysplasia)(I和II型)。目前用于治疗发育不良(诸如软骨发育不全)的疗法包括整形外科手术，如人工髋关节替换或腿拉长和生长激素疗法。腿拉长包括在十岁以上的年龄削骨，并且用专用的腿拉长装置在约六个月的数个疗程中逐渐增加身高。然而，这种方法给患者造成巨大的疼痛。生长激素疗法通过从儿童期开始的周期性生长激素注射而增加身高。然而，当停止注射时，生长停止。前述疗法无一是治愈性的，从患者生活质量的观点来看，也无一被认为是理想的。需要进一步的开发来鉴定用于治疗软骨发育不全的新疗法，诸如作为治愈或者至少改善与人中软骨发育不全相关的存活和发病率的方式的调节FGFR3的表达的治疗。概述本申请提供可用于治疗与异常的FGFR3表达相关的疾病(例如，发育不良，如软骨发育不全)的新型寡核苷酸，特别是锁定核酸(LNA)反义寡核苷酸，和治疗干预。本文公开的本专利技术涉及发现用本专利技术的寡核苷酸接触异常表达FGFR3的细胞或组织调节FGFR3(并且，特别是FGFR3的突变的或天然存在的变体)的表达。在具体的实施方案中，例如，调节FGFR3的表达恢复正常的软骨细胞功能。本专利技术的寡核苷酸和使用所述寡核苷酸来调节异常的FGFR3表达的方法提供一种改善或者甚至治愈与FGFR3的异常表达相关的(诸如，例如，软骨发育不全)存活和发病率的方式。在一个方面中，本专利技术涉及长度约为8至约50个核苷酸的寡核苷酸，其与FGFR3靶序列，例如，哺乳动物FGFR3基因或mRNA序列(例如，天然存在的FGFR3基因或mRNA)杂交。在某些方面中，所述寡核苷酸以充分的稳定性(例如，具有充分的杂交强度，并且持续充分的时间)与FGFR3靶序列杂交，以抑制FGFR3基因产物(例如，FGFR3蛋白)的表达。本文描述了特别适于这一目的及其他的寡核苷酸。术语杂交用作本文中应该理解为能够杂交。在一个方面中，本专利技术提供长度约为8至约50个核苷酸(例如，长度约为8-30，8-20，12-18，或14-16个核苷酸)的寡核苷酸，其包含与对应于哺乳动物FGFR3基因的编码区的反向互补物或编码FGFR3的mRNA的互补物的区域具有至少80％同一性(例如，至少约85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或100％同一性)的约8至约30个核苷酸(例如，长度约为8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29或30个核苷酸)的连续的核苷酸序列(第一区域)。例如，本专利技术的寡核苷酸可以包含与编码FGFR3的核酸序列(例如，例如，FGFR3DNA，前-mRNA或mRNA)的一部分至少80％互补的连续的核苷酸序列。本文公开的寡核苷酸可以包含与突变的FGFR3基因的区域或与对应的mRNA互补的核酸序列。类似地，本文公开的寡核苷酸可以包含与FGFR3基因的基因产物(例如，由FGFR3基因编码的mRNA)或其多形体或天然存在的变体互补的序列，所述多形体或天然存在的变体编码诸如在FGFR3基因产物的位置380的甘氨酸到精氨酸置换的突变(本文中称为G380R)，例如，由SEQIDNO：4编码，或其天然存在的变体(例如，SNPID’srs28931614，rs11943863或rs17881656)。具体地，本文所述的寡核苷酸可以与编码FGFR3基因或mRNA的突变区域的核酸序列具有至少80％互补性(例如，至少85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％以上的互补性)，所述突变区域诸如编码G380R突变的区域和紧接在编码G380R突变的区域的上游和/或下游的区域(例如，在G380R突变位置的上游和/或下游约2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，25，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，125，150，175，200，225，250以上的核苷酸)。在另一个方面中，本专利技术提供包含约8至约20个核苷酸的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸与编码FGFR3的核酸(例如，FGFR3mRNA)的至少8个核碱基的部分杂交。例如，在一些实施方案中，本专利技术的寡核苷酸与编码G380R突变的核酸(即，mRNA)杂交，或与直接围绕和/或邻近编码密码子380的位置1138处的FGFR3G380R突变的核酸的区域杂交。在一些实施方案中，所述寡核苷酸与编码FGFR3的单链核酸分子的区域互补，诸如，例如，具有SEQIDNO：4的一部分的序列的核酸分子或其天然存在的变体(例如，SNPID’srs28931614，rs11943863或rs17881656)的区域。在一些实施方案中，所要求的寡核苷酸包含与编码FGFR3mRNA的DNA序列与其部分互补的序列，或者，备选地，所要求的寡核苷酸与RNA序列(例如，前-mRNA或mRNA)或由其编码的部分杂交。当与靶细胞或组织(例如，在受软骨发育不全影响或折磨的患者的长骨生长板中的软骨细胞)接触时，本文公开的寡核苷酸可以选择性地减少FGFR3(并且特别是突变的或异常表达的FGFR3)的表达，由此恢复正常的软骨细胞功能。例如，本专利技术的寡核苷酸可以靶向编码突变的或异常表达的FGFR3的核酸(例如，mRNA)，诸如，例如，包含或由SEQIDNO：15，SEQIDNO：16，SEQIDNO：17，SEQIDNO：18，SEQIDNO：19和/或SEQIDNO：20编码的mRNA，或前述任一种的特定部分或区域(例如，编码G380R突变的区域)，并且由此调节FGFR3的表达，以使表达减少和/或被抑制至少约10％，20％，25％，35％，40％，50％，或优选至少60％，65％，70％，75％，85％，90％，95％，99％或100％。在另一方面中，本专利技术提供包含诸如本文所述的那些的寡核苷酸的组合物。在一些实施方案中，所述组合物可以包括药物组合物，其包含一种或多种本文所述的寡核苷酸连同一种或多种药用赋形剂、辅药、或其他促进或改善所述组合物的递送或稳定性的分子本文档来自技高网...

【技术保护点】
长度为8‑25个核苷酸的包含一个或多个核苷酸类似物的反义寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够与包含SEQ ID NO：4的核苷酸位置1394的SEQ ID NO：4的区域杂交。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.11.26 US 61/729,9221.靶向FGFR3G380R突变的反义寡核苷酸，其中所述寡核苷酸选自由下述组成的组：SEQIDNO：21，SEQIDNO：22，SEQIDNO：23，SEQIDNO：24和SEQIDNO：25。2.权利要求1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是5′-mCsTsGstsasgscstsgsasgsgsasTsGsmC-3′，其中大写字母是β-D-氧基LNA，小写字母是脱氧核糖核苷，s是磷酸二酯键，上标m是C5-甲基胞嘧啶。3.权利要求1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是5′-GAsAsgsscscscsascscscstsGsTsA-3′，其中大写字母是β-D-氧基LNA，小写字母是脱氧核糖核苷，和s是硫代磷酸酯键。4.权利要求1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是5′-GsAsAsgsasasgscscscsascscsmCsTsG-3′，其中大写字母是β-D-氧基LNA，小写字母是脱...

【专利技术属性】
技术研发人员：马伊·黑特耶恩，瑟伦·奥托松，
申请(专利权)人：罗氏创新中心哥本哈根有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK