染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法技术

本发明专利技术公开染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法，包括如下步骤：(1)样品萃取：取剪碎的心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样品，采用液液萃取，将心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样品中的唑吡坦萃取出来；(2)仪器检测：利用GC/NPD仪、GC/MS仪或LC-MS/MS仪对萃取物进行定性和定量检测，确定心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样品中唑吡坦的含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及刑侦领域的毒物检测方法，特别涉及染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法。
技术介绍
唑吡坦(Zolpidem)：商品名思诺思，为咪唑并吡啶类催眠药。化学名N，N，6-三甲基-2-(4-甲苯基)咪唑并[1，2-a]-吡啶-3-乙酰胺，化学结构如下：一般将唑吡坦制成酒石酸盐，为无色无臭黄白色结晶性固体，微溶于水、乙醇和丙二醇，呈弱碱性，pKa值为6.2。口服吸收迅速，具有很高的血浆蛋白结合率(92.5％)，可通过血脑屏障，脑脊液浓度为血浓度的30～50％，其代谢产物无药理活性，只有不到1％的原药从尿中排出。与苯二氮卓类催眠药相比,对受体结合部位有高度选择性,服药后产生明显的催眠镇静作用,而副作用和不良反应则小的多。虽然唑吡坦安全范围较大，但大剂量服用也致中毒。中毒表现为不同程度的嗜睡、头昏、乏力，共济失调，恶心，呕吐，个别表现为兴奋，多语。严重者可引起昏迷，血压下降，休克，呼吸循环抑制，死亡等。口服大量唑吡坦急性中毒死亡的，往往可同时检出其它镇静安眠药或抗抑郁药物或乙醇。因此不能确定此类药物确切的中毒量和致死量数据。近年来在毒物分析鉴定中出现一些利用唑吡坦实施自杀、麻醉抢劫、麻醉凶杀、麻醉强奸的刑事案件。由于该药起效快消除快的代谢特点，给痕量检测提出了较高的要求。但是，目前尚无人体或其它动物体内唑吡坦的染毒分布数据，特别是固体组织(如心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织)中的染毒分布数据，急需建立动物体(包括人体)内唑吡坦的染毒分布数据，唑吡坦的刑侦技术检测提供参考。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术在于提供一种染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法，建立动染毒大鼠固体组织，尤其是心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织中唑吡坦的染毒分布数据，为唑吡坦的刑侦技术检测提供参考。本专利技术是通过如下技术方案实现的：染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法，包括如下步骤：(1)样品萃取：取剪碎的心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样品，采用液液萃取，将心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样品中的唑吡坦萃取出来；(2)仪器检测：利用GC/NPD仪、GC/MS仪或LC-MS/MS仪对萃取物进行定性和定量检测，确定心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样品中唑吡坦的含量。上述染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法，在步骤(1)中的液液萃取包括如下步骤：加入有机溶剂和缓冲溶液，振荡混匀，分离有机相，再加入有机相进行第二次提取，合并两次有机相，置于50℃浓缩仪上挥干；残渣用甲醇定容，转移至进样瓶内，供气相色谱或气相色谱-质谱仪分析；若供液相色谱-串联质谱仪分析，则残渣用甲醇定容，用微孔有机滤膜过滤并转移至进样瓶内，供液相色谱-串联质谱仪分析检测。上述染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法，在步骤(1)中的液液萃取包括如下步骤：向心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样品中加入甲醇，每克固体组织中加入0.2mL甲醇,混旋，再加入硼砂-氢氧化钠缓冲液或氢氧化钠溶液调节pH为9～10，振荡混匀；每1克固体组织样品加入5mL～10mL的有机溶剂，振荡10min，8000rpm离心10min；分离有机相后，再加入5mL～10mL的有机溶剂进行第二次提取，分离，合并两次有机相；残渣加入50μL～100μL甲醇定容，转移至进样瓶内，供气相色谱和气相色谱-质谱仪分析；若供液相色谱-串联质谱仪分析，则残渣用200μL～1000μL甲醇定容，用微孔有机滤膜过滤并转移至进样瓶内，供供液相色谱-串联质谱仪分析检测。上述染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法，所述有机溶剂为二氯甲烷；或乙酸乙酯；或者二氯甲烷和乙酸乙酯的混合溶液，二氯甲烷和乙酸乙酯的体积比为1：4；或乙酸乙酯、乙基甲基酮和丁基乙烯基醚的混合溶液，乙酸乙酯、乙基甲基酮和丁基乙烯基醚体积比为2:1:1；或二氯甲烷、乙酸乙酯、乙基甲基酮和丁基乙烯基醚的混合溶液，二氯甲烷、乙酸乙酯、乙基甲基酮和丁基乙烯基醚的体积比为1:2:1:1。上述染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法，在步骤(2)中，GC/NPD仪条件：a)色谱柱：DB-1柱，30m×0.32mm×0.25μm；b)色谱柱温程：200℃保持1min，以10℃/min速率升温至280℃，保持10min；c)进样口温度：280℃；d)检测器温度：300℃；e)载气：氮气，纯度﹥99.999％；f)分流比：5:1～50:1；g)柱流量：1.0mL/min～2.0mL/min。上述染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法，在步骤(2)中，GC/MS仪条件：a)色谱柱：DB-1MS柱，30m×0.32mm×0.25μm；b)色谱柱温程：100℃保持2min，以15℃/min速率升温至280℃，保持17min；c)进样口温度：280℃；d)传输线温度：230℃；e)离子源温度：200℃；f)载气：高纯氦气,纯度﹥99.999％；g)柱流量：1mL/min～2mL/min；h)分流比：5:1～50:1；i)质量扫描范围：40amu～450amu；j)扫描方式：全扫描SCAN。上述染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法，在步骤(2)中：液相色谱-串联质谱仪配有电喷雾离子源(ESI)和三重四极杆质量分析器，扫描方式：正离子扫描ESI+；检测方式：多反应监测MRM；电喷雾电压：5500KV；离子源温度：650℃；雾化气压力：55psi；气帘气压力：30psi；辅助气压力：50psi；色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18，2.1mm×100mm，1.8μm；流动相A为含0.1％甲酸的5mM醋酸铵，流动相B为乙腈；以流动相B的比例进行说明梯度洗脱条件如下：初始体积10％保持0.1min后，1.0min增至60％保持1.0min，2.1min下降至10％并保持1.9min。本专利技术的有益效果是：本专利技术染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法，建立动染毒大鼠固体组织，尤其是心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织中唑吡坦的染毒分布数据，可以为唑吡坦的刑侦技术检测提供参考。附图说明图1灌注唑吡坦大鼠的实验设计图；图2血样中唑吡坦色谱图；图3肝组织中唑吡坦色谱图；图4血添加工作曲线；图5肝添加工作曲线；图60.5h急性染毒大鼠体内各组织及血液中唑吡坦含量；本文档来自技高网...

【技术保护点】
染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品萃取：取剪碎的心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样品，采用液液萃取，将心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样品中的唑吡坦萃取出来；(2)仪器检测：利用GC/NPD仪、GC/MS仪或LC‑MS/MS仪对萃取物进行定性和定量检测，确定心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样品中唑吡坦的含量。

【技术特征摘要】
1.染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量的检测方法，其特征在
于，包括如下步骤：
(1)样品萃取：取剪碎的心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样
品，采用液液萃取，将心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样品中的
唑吡坦萃取出来；
(2)仪器检测：利用GC/NPD仪、GC/MS仪或LC-MS/MS仪对萃取
物进行定性和定量检测，确定心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样
品中唑吡坦的含量。
2.根据权利要求1所述的染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量
的检测方法，其特征在于，在步骤(1)中的液液萃取包括如下步骤：
加入有机溶剂和缓冲溶液，振荡混匀，分离有机相，再加入有机相进
行第二次提取，合并两次有机相，置于50℃浓缩仪上挥干；残渣用甲
醇定容，转移至进样瓶内，供气相色谱或气相色谱-质谱仪分析；若供
液相色谱-串联质谱仪分析，则残渣用甲醇定容，用微孔有机滤膜过滤
并转移至进样瓶内，供液相色谱-串联质谱仪分析检测。
3.根据权利要求2所述的染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量
的检测方法，其特征在于，在步骤(1)中的液液萃取包括如下步骤：
向心、肝、肾、脾、肺、脑或肌肉组织样品中加入甲醇，每克固
体组织中加入0.2mL甲醇,混旋，再加入硼砂-氢氧化钠缓冲液或氢氧
化钠溶液调节pH为9～10，振荡混匀；每1克固体组织样品加入5mL～
10mL的有机溶剂，振荡10min，8000rpm离心10min；分离有机相后，
再加入5mL～10mL的有机溶剂进行第二次提取，分离，合并两次有机
相；残渣加入50μL～100μL甲醇定容，转移至进样瓶内，供气相色谱
和气相色谱-质谱仪分析；若供液相色谱-串联质谱仪分析，则残渣用
200μL～1000μL甲醇定容，用微孔有机滤膜过滤并转移至进样瓶内，
供供液相色谱-串联质谱仪分析检测。
4.根据权利要求3所述的染毒大鼠体内固体组织中唑吡坦含量
的检测方法，其特征在于，所述有机溶剂为二氯甲烷；或乙酸乙酯；
或者二氯甲烷和乙酸乙酯的混合溶液，二氯甲烷和乙酸乙酯的体积比

\t为1：4；或乙酸乙酯、乙基甲基酮和丁基乙烯基醚的混合溶液，乙酸
乙酯、乙基甲基酮和丁基乙烯基醚体积比为2:1:1；或...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蕾萍，栾玉静，杜鸿雁，董颖，张云峰，崔冠峰，何毅，于忠山，
申请(专利权)人：公安部物证鉴定中心，
类型：发明
国别省市：北京;11