高通量的多年生黑麦草农杆菌转化体系及其专用试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种高通量的多年生黑麦草(Lolium perenne L.)农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)转化体系，包括其专用试剂盒和转化方法。专用试剂盒包括发芽培养基、诱导培养基I、II、分化培养基、保持培养基、侵染液、共培养基、筛选培养基I、II、再生培养基和生根培养基。转化方法包括利用黑麦草丛生芽分生组织诱导的胚性愈伤作为外植体，经过农杆菌转化、筛选、再生和生根培养获得多年生黑麦草的转基因植株，本发明专利技术平均转化效率为8.5％，PCR阳性率超过90％。且本发明专利技术可持续、稳定、高通量的提供外植体，为黑麦草遗传改良的产业化进行提供了可行途径，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种高通量获得多年生黑麦草农杆菌转化的 试剂盒和转化方法。
技术介绍
多年生黑麦草（Lolium perenne L.)是世界上最重要的温带牧草之一（Jauhar 1993)，仅新西兰的种植面积就已超过700多万公顷（Siegal et al. 1985)。同时多年生黑 麦草又是一种异型杂交、风媒和高度自交不亲和的物种（Thorogood et al. 2002)。因其高 度自交不亲和性使得传统杂交育种在黑麦草优良品种的培育面前显得无计可施。而迅速崛 起的生物技术育种度身定造般的弥补了此类空缺。通过高通量的农杆菌介导技术获得多年 生黑麦草优良品种，对于改善动物的营养均衡、提高牛奶的产量和品质、增大乳品行业的利 益，乃至改良人工草坪、防风固沙、保持水土、改善人类生存环境等都具有举足轻重的作用。 与其他单子叶植物相似，黑麦草属不是农杆菌的天然宿主。而农杆菌介导法比其 他物理轰击法能更高效地获得了具备低拷贝、完整引入、稳定表达特性的转基因植株（Luo et al. 2003 ;Han et al. 2005)。到目前为止有关农杆菌转化多年生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于多年生黑麦草农杆菌转化的专用试剂盒，其特征在于，包括发芽培养基、诱导培养基I、诱导培养基II、分化培养基、保持培养基、侵染液、共培养基、筛选培养基I、筛选培养基II、再生培养基和生根培养基；所述发芽培养基为MS基本培养基，并在所述MS基本培养基中添加最终浓度为30g/L的蔗糖和3g/L凝固剂；所述诱导培养基I为MS基本培养基，并在所述MS基本培养基中添加最终浓度为22.6μM的2,4‑二氯苯氧乙酸、30g/L的蔗糖和3g/L的凝固剂；所述诱导培养基II为MS基本培养基，并在所述MS基本培养基中添加最终浓度为9μM的2,4‑二氯苯氧乙酸、0.44μM的6‑苄氨基腺嘌呤、30g/L蔗糖和3...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高崑，张康，
申请(专利权)人：北京吉诺沃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11