本发明专利技术表征式(I)的阳离子脂质、包含式I的阳离子脂质的改进的脂质制剂和相应的使用方法，其中式I为还公开了靶向脂质和包含此类靶向脂质的特定脂质制剂。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 本申请是申请日为2010年6月10日、题为《改进的脂质制剂》的中国专利技术专利申 请201080026228. 8的分案申请。 优先权要求 本申请要求于2009年6月10提交的美国第61/185, 800号申请和2009年9月22 日提交的美国第61/244, 834号申请的优先权，其中每个专利申请的内容通过引用整体并 入本文。
本专利技术涉及利用脂质颗粒递送治疗剂的领域。具体地，本专利技术提供了有利于核酸 的体内递送的阳离子脂质和含有此类脂质的脂质颗粒，以及适合用于体内治疗用途的核 酸-脂质颗粒组合物。此外，本专利技术提供了制备此类组合物的方法以及利用此类组合物将 核酸引入细胞的方法，例如用于多种疾病症状的治疗。
技术介绍
治疗性核酸包括例如小干扰RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)、反义寡核苷酸、核酶、质 粒和免疫刺激性核酸。此类核酸通过多种机制起作用。对于siRNA或miRNA，此类核酸可 通过称为RNA干扰（RNAi)的过程下调特定蛋白质的细胞内水平。在将siRNA或miRNA引 入细胞质后，此类双链RNA构建体可结合称为RISC的蛋白质。siRNA或miRNA的有义链在 RISC复合物中被取代，从而在RISC内提供了可识别和结合具有与所结合的siRNA或miRNA 的序列互补的序列的mRM的模板。在结合互补mRNA后，RISC复合物切割mRNA并且释放 切割的链。RNAi可通过编码蛋白质合成的相应mRNA的革巴向特异性破坏来提供特定蛋白质 的下调。 RNAi的治疗性应用极其广泛，因为SiRNA和miRNA构建体可用针对靶蛋白质的任 何核酸序列合成。迄今为止，siRNA构建体在体外和体内模型中都已显示出特异性下调靶 蛋白质的能力。此外，目前正在临床研宄中评估siRNA构建体。 然而，目前SiRNA或miRNA构建体面临的两个问题是：首先，它们在血浆中对核酸 酶消解的易感性，其次，它们有限的进入细胞内区室（当以游离siRNA或miRNA形式全身性 施用时它们可在所述区室中结合RISC)的能力。这些双链构建体可通过将化学修饰的核苷 酸连接子例如硫代磷酸酯基团掺入分子内来进行稳定。然而，这些化学修饰只提供有限的 免受核酸酶消解的保护作用并且可降低构建体的活性。siRNA或miRNA的细胞内递送可通 过使用载体系统（例如聚合物、阳离子脂质）或通过化学修饰构建体（例如通过胆固醇分 子的共价结合）来进行促进。然而，需要改进的递送系统来增加 siRNA和miRNA分子的效 能并且减少或消除对化学修饰的需要。 反义寡核苷酸和核酶也可抑制mRNA翻译成蛋白质。对于反义构建体，这些单链 脱氧核酸具有与靶蛋白质mRNA的序列互补的序列并且可按照沃森-克里克碱基配对结合 mRNA。该结合阻止靶mRNA的翻译和/或触发mRNA转录体的RNA酶H降解。结果，反义寡 核苷酸具有作用特异性（即，特定疾病相关蛋白的下调）的巨大潜力。迄今为止，此类化 合物已表明在几种体外和体内模型（包括炎性疾病、癌症和HIV的模型）中具有希望（于 Agrawal，Trends in Biotech. 14:376-387(1996)中介绍）。反义链也可通过与染色体 DNA 的特异性杂交影响细胞活性。目前正在进行几种反义药物的人晚期临床评估。此类药物的 靶点包括bcl2和载脂蛋白B基因以及mRNA产物。 免疫刺激性核酸包括脱氧核糖核酸和核糖核酸。对于脱氧核糖核酸，已显示某些 序列或基序引发哺乳动物的免疫刺激。此类序列或基序包括CpG基序、富含嘧啶的序列和 回文序列。脱氧核糖核酸中的CpG基序相信可被内体受体、即toll-样受体9(TLR-9)特异 性识别，所述受体随后触发先天性和获得性免疫刺激途径。还报导了某些免疫刺激核糖核 酸序列。此类RNA序列据认为通过结合toll-样受体6和7 (TLR-6和TLR-7)触发免疫活 化。此外，还报导了双链RNA具有免疫刺激性并且据认为通过结合TLR-3而活化。关于治疗 性核酸的用途的一个公知的问题涉及磷酸二酯核苷酸间键合的稳定性和该连接子对核酸 酶的易感性。血清中外切核酸酶和内切核酸酶的存在导致具有磷酸二酯连接子的核酸的快 速降解，从而，治疗性核酸在血清存在的情况下或在细胞内具有极短的半衰期。（Zelphati， 0·等人，Antisense. Res. Dev. 3:323-338(1993);和Thierry，A.R.等人，第147-161 页，Gene Regulation :Biology of Antisense RNA and DNA (编辑 Ericksoruiyi^PIzantJGiRaven PreSS，NY(1992))。由于这些和其他已知的问题，目前正在开发的治疗性核酸不使用在天然 核酸中发现的基本磷酸二酯化学物质。 该问题已通过减少血清或细胞内降解的化学修饰得到部分克服。已测试核苷酸间 磷酸二酯桥上（例如，使用硫代磷酸酯、甲基膦酸酯或氨基磷酸酯键合）、核苷酸碱基上（例 如，5-丙炔基-喃啶）或糖上（例如，2'-修饰的糖）的修饰（Uhlmann E.等人Antisense : Chemical Modifications. Encyclopedia of Cancer，第 X 卷，pp 64-81Academic Press Inc. (1997))。其他研宄人员已试图利用2'-5'糖键合提高稳定性（参见，例如美国专利 No. 5, 532, 130)。已尝试其他改变。然而，这些解决方法中没有一个已证明完全令人满意， 并且体内游离治疗性核酸仍然只具有有限的功效。 此外，如上文中关于siRNA和miRNA所指出的，问题仍然在于有治疗性核酸穿过细 胞膜的有限能力（参见，Vlassov 等人，Biochim. Biophys. Actal 197:95-1082 (1994))和在 于与全身性毒性例如补体介导的过敏反应、改变的凝血性质和血细胞减少（Galbraith等 人，Antisense Nucl. Acid Drug Des. 4:201-206(1994))相关的问题。 为了尝试提高功效，研宄者也已利用基于脂质的载体系统递送化学修饰的或未修 饰的治疗性核酸。在 Zelphati，0 和 Szoka，F. C.，J. Contr. Rel. 41:99-119(1996)中，作者 提及阴离子（常规的）脂质体、PH敏感性脂质体、免疫脂质体、膜融合脂质体（fusogenic liposome)和阳离子脂当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
式I的阳离子脂质：或其药学上可接受的盐。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：埃金·安金科，约瑟夫·R·多尔金，秦晓君，威廉·坎特里，穆希亚·曼努哈兰，卡兰特赫塔西尔·G·拉吉夫，杰雅帕卡什·K·娜瑞安纳尔，穆图萨米·贾亚拉曼，陈建新，史蒂芬·安塞尔，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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