本发明专利技术提供了牦牛乳乳清蛋白具有抗氧化活性的三肽及其应用和组合物，所述抗氧化三肽的氨基酸序列为GTW、CQC、LFC和QKW。所述的牦牛乳乳清蛋白抗氧化三肽在体外表现出很高的抗氧化活性，其铁离子还原抗氧化能力均大于0.10 mol Fe3+/mol肽，最高达0.68 mol Fe3+/mol肽，在本发明专利技术测定条件下活性高于谷胱甘肽活性（0.27 mol Fe3+/mol肽）的两倍；由于本发明专利技术提供的三肽为小分子肽，能够经过吸收直接进入血液循环，从而起到抗氧化活性的作用，能够应用于抗氧化活性的功能食品、保健品或药物中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及功能乳品
，尤其涉及牦牛乳乳清蛋白具有抗氧化活性的三肽 及其应用和组合物。
技术介绍
随着年龄的增长，机体正常的氧化还原平衡被破坏，产生越来越多的活性氧 (R0S),脂类、蛋白质和DNA就会发生氧化反应导致机体的损伤进而加速衰老、引起如糖尿 病、关节炎、动脉粥样硬化等多种疾病的发生。近年来，这些疾病的发病率呈现出不断上升 的趋势。研究发现，通过膳食供应来提高机体的抗氧化能力是降低机体氧化应激水平的一 种现实可行的方法，可以消除一些衰老所带来的负面影响。相较于合成的抗氧化剂，如BHT、 BHA、没食子酸丙酯等，抗氧化肽安全性高，毒副作用小，有些还具有多重生物活性，增强其 生理功能，更进一步降低疾病发生、发展的危险。抗氧化肽是一类具有抗氧化活性的多肽物 质，通常2-20个氨基酸。这些多肽的氨基酸序列和长度各不相同，但是具有类似的活性，大 多通过减缓或者终止氧化过程中的链式反应来发挥作用。 近年来，抗氧化肽越来越受到关注，目前已从乳蛋白、大豆蛋白和海洋生物等不同 来源的食源性蛋白质水解分离得到具有良好抗氧化活性的肽段。其中，一些从乳清蛋白水 解得到的肽段在体外实验中活性可以达到甚至超过了合成抗氧化剂BHT、BHA，是良好的抗 氧化肽的来源(刘志东，郭本恒，王荫榆，蒋士龙，李云飞.乳源抗氧化肽的研究进展 ?食品科学，2009, 30(01) : 282-286.)。 乳清蛋白是乳沉淀酪蛋白后分离出来的蛋白质，它具有很高的生物利用价值，富 含多种必需氨基酸，是国际上公认优质的人体蛋白质补充剂之一。乳清蛋白主要存在于乳 清中，是利用牦牛乳生产曲拉及干酪素过程中的副产物。如果可以将其有效利用，既可以解 决乳清对环境的污染又能够使其中营养物质得到充分的利用。利用我国特有的牦牛乳蛋白 资源，研究及开发具有抗氧化生物活性肽，对拓展乳功能性食品及新药开发领域，增进乳的 开发与利用价值，有一定的理论指导意义，对人类健康事业的发展具有较大的促进作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供具有抗氧化活性的三肽及其多肽衍生物，该三肽具有较高的 抗氧化活性并能应用于抗氧化功能食品、保健品及药品中。 本专利技术的专利技术人对牦牛乳乳清蛋白活性肽进行了长期系统性研究，发现源自乳源 蛋白的某些未报道具有抗氧化活性的三肽有与谷胱甘肽相近的抗氧化活性，由此完成了本 专利技术。 本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的： 本专利技术提供的具有抗氧化活性的三肽氨基酸序列为GTW、CQC、LFC、或QKW。 优选地，本专利技术提供的三肽氨基酸序列为GTW或CQC。 进一步的，所述的牦牛乳乳清蛋白抗氧化三肽的多肽衍生物，所述多肽衍生物为 所述抗氧化三肽的氨基酸被氨基化、或环化、或L-型氨基酸变为D-型氨基酸。 一种牦牛乳乳清蛋白抗氧化肽组合物，所述抗氧化肽组合物为抗氧化三肽GTW、 CQC、LFC和QKW中两种或几种的混合物。 所述的牦牛乳乳清蛋白抗氧化三肽的制备方法，从天然牦牛乳乳清蛋白酶解物中 分离纯化，或人工合成方法得到。 进一步的，所述从天然牦牛乳乳清蛋白酶解物中分离纯化的方法包括以下步骤： 牦牛乳经过脱脂、酸凝沉淀得到上清，将上清液用1M NaOH调节pH值5. 2,加热温度达 80-90°C，得到沉淀即为乳清蛋白。 步骤1 :将新鲜的牦牛乳高速离心，6000rpm 20min，除去脂肪，得到脱脂乳。 步骤2 :将所得脱脂乳在35-50°C范围内的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热 搅拌器进行搅拌，边搅拌边滴加1M HC1溶液，使脱脂乳溶液的pH达到4. 6,使酪蛋白进行沉 淀，6000 rpm离心20 min后，得到上清液。 步骤3 :将上清液用采用磁力搅拌器进行搅拌，边搅拌边滴加1M NaOH调节pH值 5. 2,再加热至80-90 °C，使乳清蛋白沉淀，6000 rpm离心20 min后，得沉淀的乳清蛋白，将 其冷冻干燥24 h后得到牦牛乳乳清蛋白的冻干粉。 步骤4 :将上述步骤所得乳清蛋白冻干粉溶于0. 05mol/L NaOH溶液中制成质量浓 度为5 %的乳清蛋白溶液，用中性蛋白酶进行水解反应，酶与乳清蛋白的比为1800 U/g，用 恒温水浴箱及1 M NaOH溶液分别调整酶解温度为45 °C和pH值为7. 0,水解3h。步骤5:将步骤4所得酶解液调节其pH值至4. 2,4200 rpm条件下离心20 min，取 上清液调节pH值至7.0。 步骤6 :对步骤5所述酶解产物进行二级超滤。采用超滤杯设备，板式膜组件，先后 采用分子截留量分别为l〇KDa、6KDa亲水性聚醚砜膜，进行二级超滤：乳清蛋白降血压多肽 浓度5 %，溶液pH 7.0,操作压力0.15 MPa，温度45°C。初步得到具有抗氧化活性的滤液。 步骤7 :将步骤6所述超滤膜滤过液的多肽组分进一步分离分析其活性功能组分， 样品经S印hadexG-25凝胶层析柱分离，多肽中的组分按分子量大小依次分离，按分离峰的 时间范围收集洗脱液，并分别冷冻干燥保存。 步骤8 :将步骤7所述各组分配置成0. 5 mg/mL的多肽溶液，测定ACE抑制活性值， 最高为77. 47±1. 12 %。将所得抑制活性高的组分采用半制备反相液相色谱柱进一步分离。 多次重复操作，收集洗脱液，将有机溶剂挥发后冷冻干燥。 步骤9 :将步骤8中得到的各组分配置相同浓度的溶液测定其ACE抑制率。将ACE 抑制率均大于70 %的组分进行液质分析，然后利用串联质谱对一级质谱中的肽段氨基酸序 列进行了分析，得到以上三条多肽序列。 进一步的，所述牦牛乳乳清蛋白抗氧化三肽的人工合成方法包括以下步骤： (1) Fmoc固相合成过程 采用Fmoc固相合成法的原理、步骤和操作条件，依次合成GTW、CQC、LFC、或QKW ; (2) 三肽的纯化 采用半制备型反相高效液相色谱在以下条件下纯化步骤（1)中合成的三肽；用岛津 (LC-10A)液相色谱仪，采用BECKMAN C18制备柱，流动相A :0. 1%三氟乙酸（TFA)/超纯水； 流动相B :0. 1%TFA/乙腈；梯度程序：5%_50%B 30min，流速5mL/min，上样量3mL，采用230nm 波长检出流出峰并收集，真空冷冻干燥当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种牦牛乳乳清蛋白抗氧化三肽，其特征在于，所述抗氧化三肽的氨基酸序列为GTW、CQC、LFC和QKW。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：任发政，田劢，赵亮，郭慧媛，张昊，
申请(专利权)人：任发政，
类型：发明
国别省市：北京;11
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