本发明专利技术提供一种尿液凝血酶原蛋白(prothrombin)的应用，具体为尿液凝血酶原蛋白在制备用于诊断或检测2型糖尿病合并冠心病的制剂中的应用。本发明专利技术通过研究证实与正常对照和单纯2型糖尿病组相比，凝血酶原蛋白在2型糖尿病合并冠心病组患者的尿液中特异表达上调，从而能够用于2型糖尿病合并冠心病的诊治。本发明专利技术发挥尿液标本获取无创、可大规模重复取样、保存方便的优势，利用随机尿标本检测凝血酶原蛋白。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及尿液凝血酶原蛋白的新用途，具体涉及尿液凝血酶原蛋白在2型糖尿 病合并冠心病诊治中的应用。
技术介绍
2型糖尿病（diabetesmellitustype2)是全球重要的公共卫生问题之一，近二十 年来，随着中国经济的发展，人们的生活方式发生了显著的改变，2型糖尿病的患病人数呈 急剧增加趋势。由于中国人口老龄化的趋势，60岁以上的2型糖尿病患者已接近50%，并 以每年0. 1 %的速度递增。2型糖尿病已成为威胁中国居民生命和健康的重要疾病之一，是 亟待解决的重大公共卫生问题。 2型糖尿病主要是由于胰岛素分泌和（或）作用缺陷引起的慢性血糖增高，涉及全 身性的糖类、脂类和蛋白质代谢紊乱。由于血糖浓度容易受多种因素（例如兴奋、劳累、感 冒、发烧和感染）的影响而产生波动，所以2型糖尿病患者需要不断的监测血糖变化，以相 应的调整药物剂量。血糖控制不佳以及脂肪、蛋白质代谢紊乱可导致眼、肾、心脏、血管等组 织器官及神经系统的慢性进行性病变、功能减退及衰竭。据统计，在全球的死亡率里，2型糖 尿病占了大约5. 2%，而死于合并心脏病的又占了其中的68%。因此需要对2型糖尿病合 并冠心病的高危人群进行早期筛查和早期诊断，以便进行早期治疗，提高患者的生存质量。 凝血酶原（Prothrombin)是由肝脏合成的维生素K依赖性的凝血因子之一，其编 码基因位于11号染色体，基因全长为21kb，有14个外显子和13个内含子，mRNA为2kb，合 成622个氨基酸组成的肽链，分子量为72KD，等电点为pH= 4. 2,血浆中含量为10~15mg/ dl。凝血酶原在凝血机制中起着中心作用，在激活的因子V和由血小板或其他细胞提供的 磷脂存在的条件下，被激活的因子X激活凝血酶原形成凝血酶，使纤维蛋白原转变成纤维 蛋白。凝血酶是一种蛋白水解酶，对多种凝血因子具有水解作用，另外还具有：（1)诱导血 小板聚集；（2)激活XIII因子；（3)使纤溶酶原转变成纤溶酶，从而激活纤溶系统；(4)激活 由凝血酶激活的纤溶抑制物；（5)激活因子￥、爾、)(1，生成更多的凝血酶 ；（6)激活蛋白(：系 统；（7)刺激伤口愈合等作用。当2型糖尿病患者同时存在脂代谢异常时，脂质合成增加进 一步刺激动脉内膜平滑肌细胞增殖，从而导致血管基底膜增厚，最终造成微循环障碍，容易 导致组织缺血、缺氧，使局部产生大量活性氧，损伤血管内膜，使2型糖尿病患者处于病理 性凝血和纤溶状态，尿液中凝血酶原蛋白水平增高可预示糖尿病患者发生血管并发症的危 险性。 为了 了解疾病进展，及时预防及治疗并发症，2型糖尿病患者需要监测血糖控制病 情。在现有的临床检查中，采集末梢血或静脉血作为血糖监测的最佳标本，但血液标本的获 取有创，乳糜血或溶血会影响血糖检测的准确性，并且频繁采血会对患者造成心理负担，尤 其是老年人和肥胖人群。因此，如果能建立一种对2型糖尿病患者进行筛查、监测的无创性 检查方法，对2型糖尿病及其合并症或合并症的早期筛查、诊断、预防及治疗均具有极其重 要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种尿液凝血酶原蛋白在制备用于诊断或检测2型糖尿 病合并冠心病的制剂中的应用。 优选地，所述尿液凝血酶原蛋白的氨基酸序列如SEQIDN0 :1所示（MAHVRGLQLP GCLALAALCSLVHSQHVFLAPQQARSLLQRVRRANTFLEEVRKGNLERECVEETCSYEEAFEALESSTAT DVFWAKYTACETARTPRDKLAACLEGNCAEGLGTNYRGHVNITRSGIECQLWRSRYPHKPEINSTTHPGA DLQENFCRNPDSSTTGPWCYTTDPTVRRQECSIPVCGQDQVTVAMTPRSEGSSVNLSPPLEQCVPDRGQQ YQGRLAVTTHGLPCLAWASAQAKALSKHQDFNSAVQLVENFCRNPD⑶EEGVWCYVAGKP⑶FGYCDLNY CEEAVEEETGDGLDEDSDRAIEGRTATSEYQTFFNPRTFGSGEADCGLRPLFEKKSLEDKTERELLESYI DGRIVEGSDAEIGMSPWQVMLFRKSPQELLCGASLISDRffVLTAAHCLLYPPWDKNFTENDLLVRIGKHS RTRYERNIEKISMLEKIYIHPRYNWRENLDRDIALMKLKKPVAFSDYIHPVCLPDRETAASLLQAGYKGR VTGWGNLKETWTANVGKGQPSVLQVVNLPIVERPVCKDSTRIRITDNMFCAGYKPDEGKRGDACE⑶SGG PFVMKSPFNNRWYQMGIVSWGEGCDRDGKYGFYTHVFRLKKWIQKVIDQFGE)。 优选地，所述制剂为2型糖尿病合并冠心病患者尿液凝血酶原蛋白检测试剂盒。 所述试剂盒包括盒体以及设置在盒体内的酶标板和试剂。 优选地，所述酶标板由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组 成，每个可拆装酶标反应微孔条有8个反应孔。 优选地，每个反应孔预包被兔抗人凝血酶原蛋白多克隆抗体。 优选地，所述试剂为凝血酶原蛋白标准品溶液、抗体浓缩液、酶标二抗、显色液A、 显色液B、终止液和浓缩洗涤液。 优选地，所述试剂盒还包括盖板膜、放置试剂的下凹瓶位以及自封袋。 优选地，所述下凹瓶位共13个，由塑料泡沫制成。 优选地，所述酶标板由聚苯乙烯制成。 专利技术人首先收集了 2型糖尿病合并冠心病患者、无并发症和合并症的2型糖尿病 患者及正常对照的随机尿液标本，离心后取上清，利用弱阳离子交换磁珠纯化和分离尿液 标本。将1y1标本与10y1基质（0. 3%的a-氰基-4-羟基肉桂酸，HCCA)混匀后，取 ly1 点在Anchorchip(AutoflexMALDITOF，Bruker-Dalton)祀板上，标本离子化后进行 质谱分析，采集l〇〇〇-l〇〇〇〇Da范围内的数据，获得由不同质荷比的蛋白峰构成的质谱多肽 图。应用ClinProTools2. 1分析软件对2型糖尿病合并冠心病组、无并发症和合并症的2型 糖尿病组及正常对照组的所有质谱图进行分析，筛选差异性多肽。然后专利技术人对具有统计 学意义的差异性多肽进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix-assistedlaser desorptionionizationtimeofflightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定，在 InternationalProteinIndex(IPIhumanV3.45fastawith71983entries)数据库检索得 到2型糖尿病合并冠心病组与正常对照及无并发症和合并症的2型糖尿病组间差异表达的 凝血酶原蛋白（prothrombin,蛋白号：IPI00019568，m/z:3223. 2)蛋白，并且与正常对照和 无并发症及合并症的2型糖尿病组相比，凝血酶原蛋白在2型糖尿病合并冠心病患者的尿 液中呈高表达。 本专利技术通过研究证实与正常对照和无并发症及合并症的2型糖尿病组相比，凝血 酶原蛋白在2型糖尿病合并冠心病组患者的尿液中特异表达上调，从而提出检测尿液凝血本文档来自技高网...
【技术保护点】
尿液凝血酶原蛋白在制备用于诊断或检测2型糖尿病合并冠心病的制剂中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张曼，付广真，雷婷，
申请(专利权)人：张曼，
类型：发明
国别省市：北京;11
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