尿液免疫球蛋白制造技术

本发明专利技术提供一种尿液免疫球蛋白

【技术实现步骤摘要】
RGEC ）；或由
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列衍生的，且与
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列
。
[0006]优选地，所述制剂为
SLE
患者尿液免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段检测试剂盒
。
[0007]优选地，所述试剂盒包括抗原抗体反应的免疫方法及其试剂盒如能够特异性结合免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段的适配体抗体或抗体片段中的一种或多种
。
[0008]优选地，所述检测方法包括直接检测免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段的质谱等方法及其相关试剂盒
。
[0009]优选地，所述检测方法包括直接检测免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段的相关核酸检测等方法及其相关试剂盒
。
[0010]优选地，所述试剂盒还包括选自下组的成分：固相载体，稀释液，对照品，标准品，质控品，检测抗体，第二抗体
、
第二抗体稀释液，发光试剂，洗涤液
、
显色液
、
终止液中的任意一种或几种的组合
。
[0011]优选地，所述标准品包括免疫球蛋白
κ
轻链标准品
、
人源化标签抗体标准品；较佳地，所述质控品包括：免疫球蛋白
κ
轻链质控品
、
人源化标签抗体质控品；较佳地，所述固相载体包括：微粒
、
微球
、<br/>玻片
、
试纸条
、
塑料珠
、
液相芯片
、
微孔板或亲和膜等以及同等功能的其他载体
。
[0012]优选地，所述固相载体的材质为聚氯乙烯
、
聚苯乙烯
、
聚丙酰胺
、
纤维素中的任意一种及具有类似功能的载体
。
[0013]专利技术人首先收集了健康人
、SLE
患者的尿液标本，
4000r/min
离心
5min
后，吸取上清，采用
Bradford
法测定提取的蛋白浓度，进行
SDS
‑
PAGE
酶解
。
尿液样本的
Label
‑
free
质谱分析由
OrbitrapFusion
型质谱完成
。
将
SLE
组和正常对照组在质谱中得到的数据进行定量计算
。
以蛋白表达量差异在
1.5
倍以上且经统计检验
P&lt;0.05
作为参考标准筛选差异性多肽
。
然后专利技术人对具有统计学意义的差异性多肽进行鉴定，利用数据库检索得到差异蛋白免疫球蛋白
κ
轻链
。
专利技术人利用免疫固定电泳及德国西门子全自动特种蛋白分析仪
(BN
‑
II
系统
)
对
SLR
患者和健康人尿液中的免疫球蛋白
κ
轻链及其含量进行了验证
。
[0014]本专利技术通过研究证实与健康人相比，免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段在
SLE
患者的尿液中呈高表达，与临床诊断有较好的一致性
。
从而提出检测尿液免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段可用于
SLE
的辅助诊断或病情监测
。
[0015]本专利技术发挥尿液标本获取无创
、
可大规模重复取样
、
保存方便的优势，利用尿液标本检测尿液免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段
。
[0016]为让本专利技术的上述和其它目的
、
特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下
。
附图说明
[0017]图1是尿液免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段在
SLE
活动性患者
、SLE
非活动性患者及健康对照组中含量图
。
[0018]图2是尿液免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段在
SLE
活动性患者
、SLE
非活动性患者及健康对照组中免疫固定电泳结果图
。
具体实施方式
[0019]实施例1尿液标本的收集与处理选取
SLE
患者作为
SLE
组，选取同期健康体检者作为正常对照组
。
收集各组研究对象入院后的新鲜晨尿样本
50
‑
100ml
，不能正常排尿者收集其早晨导尿管中尿液，置于干燥
、
洁净的容器内
。
将收集的尿液标本
4000r/min
离心
5min
后，吸取上清，每管
2ml
分装，
‑
80℃
冰箱保存
。
[0020]实施例2质谱分析和尿液多肽的筛选对尿液样品蛋白提取，并对提取的蛋白浓度进行测定
。
尿液样本的质谱分析由
OrbitrapFusion
型质谱完成
。
将实验组和正常对照组在质谱中得到的数据进行定量计算
。
组间比较采用
t
‑
test
进行差异分析，以蛋白表达量差异在
1.5
倍以上且经统计检验
P&lt;0.05
作为参考标准筛选差异表达蛋白
。
[0021]实施例3差异多肽的鉴定及分析使用的数据库为
Uniprot_Homo
数据库，产生的质谱原始文件采用
MaxQuant
软件处理，检索参数设置见表
1。
[0022]实施例4尿液免疫球蛋白
κ
轻链的验证使用免疫固定电泳及德国西门子全自动特种蛋白分析仪
(BN
‑
II
系统
)
对
SLE
患者和健康人尿液中的免疫球蛋白
κ
轻链进行定性
、
定量分析与健康人相比，免疫球蛋白
κ
轻链在
SLE
患者的尿液中高表达，通过德国西门子全自动特种蛋白分析仪
(BN
‑
II
系统
)
对
SLE
患者和健康人尿液中的免疫球蛋白
κ
轻链进行定量分析，其在
SLE
活动性患者
、SLE
非活动性患者及健康对照组尿液中的含量如图本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
尿液免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段在制备用于
SLE
诊断
、
鉴别诊断
、
病情程度与活动性判断
、
治疗效果评价
、
监测
、
预后评估及机理研究等的应用
。2.
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述尿液免疫球蛋白
κ
轻链的氨基酸序列包括
SEQ ID NO:1
所示；或由
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列衍生的，且与
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列
。3.
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述制剂为
SLE
患者尿液免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段检测试剂盒
。4.
根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括抗原抗体反应的免疫方法及其试剂盒如能够特异性结合免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段的适配体抗体或抗体片段中的一种或多种
。5.
根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测方法包括直接检测免疫球蛋白
κ
轻链及其多肽片段的质谱等方法及其相关试剂盒
。6.
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张曼，
申请(专利权)人：张曼，
类型：发明
国别省市：