一种检测灭蝇胺的方法技术

本发明专利技术提供了一种检测灭蝇胺的方法。包括：制备polyT10@纳米金溶液；加入不同浓度的灭蝇胺溶液，反应，加入氯化钠溶液，反应，得到标准溶液，测定标准溶液在520nm处的吸光度值，以吸光度值为纵坐标，灭蝇胺浓度对数为横坐标，绘制灭蝇胺含量测定的标准曲线；测定待测溶液在520nm处的吸光度值，根据标准曲线，得到待测样品中灭蝇胺的含量。本发明专利技术提供了一种果蔬产品中灭蝇胺残留的快速简单灵敏的测定方法，无需色谱-质谱等复杂仪器，操作简单，既可以肉眼观察颜色变化，也可以通过测定吸光度进行精确定量。本方法检测时间短，无需有毒提取试剂，所用纳米金及适配体成本低，可用于现场快速大量样品的初筛检查。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农药残留快速检测
，具体涉及。
技术介绍
灭蝇胺是一种三嗪类农药，作为杀虫剂被广泛用于动物养殖及果蔬种植生产过程 中，但其在动物体内及果蔬上的残留可以引起人类肿瘤的发生，其一部分可通过代谢降解 为三聚氰胺，成为具有肾毒性的化合物，因此近年来各国相继制定了灭蝇胺的残留限量标 准，如我国规定灭蝇胺的残留限量标准为0. 5-1yg/g。但是目前灭蝇胺的检测方法都是 基于色谱质谱的仪器分析方法，具有检测周期长、操作复杂、需要专业人员等缺点，不利于 大批量样品的快速抽查和现场快速检测，因此急需开发一种简单灵敏的灭蝇胺快速检测方 法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何开发一种简单灵敏的快速检测灭蝇胺的方法。 为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种基于polyT的灭蝇胺快速检测方法。 本专利技术所提供的基于polyT的灭蝇胺快速检测方法，包括下述： l)polyT10@纳米金溶液的制备 将polyTIO溶液与纳米金溶液混合后进行反应得到polyT10@纳米金溶液；所述 polyTIO代表由10个脱氧胸苷酸组成的寡核苷酸；所述polyTIO的核苷酸序列如序列表中 序列1所示； 2)标准曲线的制备 将所述p〇lyT10@纳米金溶液分别与不同浓度的灭蝇胺溶液混合后进行反应，得 到多个灭幡胺浓度不同的P〇lyT10@纳米金-灭幡胺体系，将所述多个灭幡胺浓度不同的 polyT10@纳米金-灭幡胺体系分别与氯化钠溶液混合后进行反应，得到多个polyT10@纳 米金-灭幡胺-氯化钠体系，即为多个标准溶液，所述多个p〇lyT10@纳米金-灭幡胺-氯 化钠体系中的每一个P〇lyT10@纳米金-灭蝇胺-氯化钠体系中的氯化钠含量相等，且所述 氯化钠的含量能够诱导与1)中和polyTIO结合的纳米金等量的纳米金发生团聚；分别测 定所述多个标准溶液中的每一个标准溶液在520nm处的吸光度值，以所述吸光度值为纵坐 标，灭蝇胺浓度对数为横坐标，绘制灭蝇胺含量测定的标准曲线； 3)待测样品中灭蝇胺含量的测定 将所述polyTO纳米金溶液与待测样品溶液混合后反应，得到polyT10@纳米 金-待测样品体系，所述polyT100纳米金-待测样品体系中，polyT10@纳米金的含量与2) 中所述多个P〇lyT10@纳米金-灭幡胺体系中的每一个polyT10@纳米金-灭幡胺体系中的 polyT10@纳米金含量相同；将所述polyT10@纳米金-待测样品体系与氯化钠溶液混合后 进行反应，得到p〇lyT10@纳米金-待测样品-氯化钠体系，S卩为待测溶液，所述p〇lyT10@纳 米金-待测样品-氯化钠体系中，所述氯化钠的含量与2)中所述多个polyT10@纳米金-灭 蝇胺-氯化钠体系中的每一个P〇lyT10@纳米金-灭蝇胺-氯化钠体系中的氯化钠的含量 相同；测定所述待测溶液在520nm处的吸光度值，根据所述标准曲线，得到所述待测样品中 灭幡胺的含量。 所述1)中，所述纳米金溶液是将100mL的摩尔浓度为ImM的HAuC14溶液与100mL 摩尔浓度为38. 8mM的柠檬酸三钠溶液反应得到的。 所述纳米金溶液中，纳米金的直径为13nm。 所述1)中，所述polyTIO与所述纳米金溶液的配比为1. 25X10_1Qmol: 50yL。 所述1)中，所述polyT10@纳米金溶液是polyTIO溶液与纳米金溶液混合后反应 得到的溶液。 所述1)中，所述polyTlOO纳米金溶液中，polyTIO的量为使得polyTlOO纳米 金-氯化钠体系中的纳米金不团聚；所述p〇lyT10@纳米金-氯化钠体系是向polyT10@纳 米金溶液中加入氯化钠得到的混合溶液，所述混合溶液中氯化钠的含量与2)中所述多个 polyT10@纳米金-灭幡胺-氯化钠体系中的每一个polyT10@纳米金-灭幡胺-氯化钠体 系中的氯化钠的含量相同。 所述团聚表现为纳米金溶液由红色变为蓝色。 所述2)中，所述多个可为2个以上，如10个。 所述2)中，所述polyT10@纳米金-灭幡胺-氯化钠体系中，所述polyTIO与氯化 钠的摩尔比为 1. 25Xl〇-1Qmol:9Xl(T6mol。 所述3)中，所述待测样品为水果和/或蔬菜（如黄瓜）提取液。 具体地，本专利技术所提供的基于polyT的灭蝇胺快速检测方法，包括下述： l)polyT10@纳米金溶液的制备 将100mL浓度为ImM的HAuC14溶液与10mL浓度为38. 8mM的柠檬酸三钠溶液反 应20分钟，得到纳米金溶液；将50yL2. 5yMpolyTIO加入到50yL所述纳米金溶液中， 反应5分钟后，得到p〇lyT10@纳米金溶液； 2)标准曲线的制备 向多个50yL的所述polyT10@纳米金溶液中的每一个中分别加入50yL不同浓 度的灭蝇胺溶液，反应5分钟后，加入10yL0. 9M的NaCl，再反应5分钟，然后观察纳米金 溶液颜色变化，同时测定520nm的吸光度值，以520nm的吸光度值为纵坐标，灭蝇胺浓度对 数为横坐标，绘制灭蝇胺含量测定的标准曲线； 3)待测样品中灭蝇胺含量的测定 向50yL所述polyTO纳米金溶液中加入50yL待测样品溶液，得到polyT10@纳 米金-待测样品体系，反应5分钟后，加入10yL0. 9M的NaCl，再反应5分钟，然后观察纳 米金溶液颜色变化，同时测定520nm的吸光度值，根据所述标准曲线，得到所述待测样品中 灭幡胺的含量。本专利技术设计了一段含有10个胸腺嘧啶核苷的寡核苷酸（polyTIO)，polyTIO可以 通过与纳米金的配位结合吸附到纳米金上，并保护纳米金在加入高浓度盐溶液的情况下不 团聚，纳米金溶液仍然保持红色。当向其中加入含有灭蝇胺的样品时，polyTIO优先和灭蝇 胺结合，从纳米金上解离，这个时候再加入高浓度的盐溶液就会导致纳米金颗粒发生团聚， 纳米金溶液颜色从红色变为蓝色，程度随着灭蝇胺浓度增高而加深。 本专利技术提供了一种果蔬产品中灭蝇胺残留的快速简单灵敏的测定方法，该方法无 需色谱-质谱等复杂仪器，操作简单，只需简单匀浆过滤加样步骤即可检测，而且既可以肉 眼观察颜色变化，也可以通过测定吸光度进行精确定量。本方法检测时间短，整个过程可在 30分钟内完成，并且无需有机等有毒提取试剂，所用纳米金及适配体成本低，因此本方法可 以用于现场快速大量样品的初筛检查。【附图说明】 图1A为灭蝇胺通过氢键与胸腺嘧啶形成的稳定结合的示意图。 图1B为本专利技术基于polyT的灭蝇胺快速检测方法的原理图。 图2A为纳米金溶液的颜色随着NaCl浓度的变化图。 图2B为纳米金溶液520nm吸光度值随着NaCl浓度的变化图。 图3A为特定NaCl含量下纳米金溶液的颜色随着polyTIO浓度的变化图。 图3B为特定NaCl含量下纳米金溶液520nm吸光度值随着polyTIO浓度的变化图。 图4A为特定NaCl含量特定polyTIO含量下纳米金溶液的颜色随着灭蝇胺浓度的 变化图。 图4B为特定NaCl含量特定polyTIO含量下纳米金溶液520nm吸光度值随着灭蝇 胺浓度的变化图。 图4C为以520nm的吸光度值为纵坐标，灭蝇胺浓度对数为横坐标绘制的标准曲 线。图5为黄瓜提取液稀本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种灭蝇胺检测方法，包括下述：1)polyT10@纳米金溶液的制备将polyT10溶液与纳米金溶液混合后进行反应得到polyT10@纳米金溶液；所述polyT10代表由10个脱氧胸苷酸组成的寡核苷酸；所述polyT10的核苷酸序列如序列表中序列1所示；2)标准曲线的制备将所述polyT10@纳米金溶液分别与不同浓度的灭蝇胺溶液混合后进行反应，得到多个灭蝇胺浓度不同的polyT10@纳米金‑灭蝇胺体系，将所述多个灭蝇胺浓度不同的polyT10@纳米金‑灭蝇胺体系分别与氯化钠溶液混合后进行反应，得到多个polyT10@纳米金‑灭蝇胺‑氯化钠体系，即为多个标准溶液，所述多个polyT10@纳米金‑灭蝇胺‑氯化钠体系中的每一个polyT10@纳米金‑灭蝇胺‑氯化钠体系中的氯化钠含量相等，且所述氯化钠的含量能够诱导与1)中和polyT10结合的纳米金等量的纳米金发生团聚；分别测定所述多个标准溶液中的每一个标准溶液在520nm处的吸光度值，以所述吸光度值为纵坐标，灭蝇胺浓度对数为横坐标，绘制灭蝇胺含量测定的标准曲线；3)待测样品中灭蝇胺含量的测定将所述polyT@纳米金溶液与待测样品溶液混合后反应，得到polyT10@纳米金‑待测样品体系，所述polyT10@纳米金‑待测样品体系中，polyT10@纳米金的含量与2)中所述多个polyT10@纳米金‑灭蝇胺体系中的每一个polyT10@纳米金‑灭蝇胺体系中的polyT10@纳米金含量相同；将所述polyT10@纳米金‑待测样品体系与氯化钠溶液混合后进行反应，得到polyT10@纳米金‑待测样品‑氯化钠体系，即为待测溶液，所述polyT10@纳米金‑待测样品‑氯化钠体系中，所述氯化钠的含量与2)中所述多个polyT10@纳米金‑灭蝇胺‑氯化钠体系中的每一个polyT10@纳米金‑灭蝇胺‑氯化钠体系中的氯化钠的含量相同；测定所述待测溶液在520nm处的吸光度值，根据所述标准曲线，得到所述待测样品中灭蝇胺的含量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈爱亮，刘金钏，白文荟，朱超，颜朦朦，杨曙明，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11