长效胰岛素缀合物的液体制剂制造技术

本发明专利技术涉及长效胰岛素缀合物的液体制剂，其包括药学有效量的长效胰岛素缀合物，其中生理活性肽是胰岛素，与免疫球蛋白Fc区连接；和不含白蛋白的稳定剂，其中稳定剂包括缓冲剂、糖醇、非离子型表面活性剂和等渗剂，和制备所述制剂的方法。为防止多次使用中的微生物污染，可将防腐剂加入制剂。本发明专利技术的液体制剂不包括人血清白蛋白和对机体潜在有害的要素，因此其具有杰出的胰岛素缀合物储存稳定性，且无病毒感染的危险。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】长效胰岛素缀合物的液体制剂
本专利技术涉及长效胰岛素缀合物的液体制剂，其包括药学有效量的长效胰岛素缀合物，其中胰岛素，作为一种生理活性肽，与免疫球蛋白Fc区连接；和不含白蛋白的稳定剂，其中稳定剂包括缓冲剂、糖醇、非离子型表面活性剂和等渗剂，和制备该制剂的方法。
技术介绍
胰岛素是由51个氨基酸组成、具有约5,800Da的分子量的肽。胰岛素由人体胰腺β细胞分泌，并且在控制机体血糖水平方面具有中心作用。如果胰岛素分泌量缺乏或分泌的胰岛素不在机体内正常起作用，则血糖水平将升高，导致代谢疾病——其被称为糖尿病。当胰岛素不被正常分泌或不在机体内正常起作用，则无法调控血糖水平，并且这种类型的糖尿病被称为II型糖尿病。在胰腺不产生足以调控血糖水平增加的胰岛素时导致I型糖尿病。II型糖尿病通常用主要由化学复合物组成的口服降血糖剂治疗，而在一些情况下，通过使用胰岛素来治疗患者。同时，I型糖尿病需要给予胰岛素。当前应用的胰岛素治疗是在餐前和餐后注射胰岛素。然而，这种胰岛素注射应连续不断地一日三次进行，这导致患者严重疼痛或不适。已进行很多尝试以解决这些问题，并且其中之一是通过增加肽药物的生物膜渗透性，将肽药物通过口服或鼻部吸入递送到机体中。然而，与注射相比，这种方法对于递送肽到机体中具有明显低效率。因此，保持体内肽药物活性处于所需水平方面还存在很多限制。同时，另一递送药物的方法是通过延迟皮下注射大量药物后的药物吸收，从而通过进行一日仅一次注射保持血液中持续的药物水平。其中一些药物(例如，LantusSanofi-aventis)被批准作为药物，并且当前被给予患者。此外，已进行研究，以通过如下延长体内持久性：通过用脂肪酸修饰胰岛素而使胰岛素缀合物中的键更强，和使胰岛素在给予部位与白蛋白和血液结合——这导致Levemir(NovoNordisk)的研发，其被批准作为药物。然而，这些方法具有引起注射部位处疼痛的副作用，并且每日注射对于患者仍是过度负担。同时，已经不断地尝试最大化肽药物的治疗效果——通过提高其在血液中的稳定性和在肽药物吸收到机体中后长时间保持血液中的高药物水平。肽药物的长效制剂应促进肽药物的稳定性增加，而且保持药物本身足够高的滴定度，而不诱发患者的免疫应答。关于肽药物长效制剂的制备，具有高溶解度的聚合物，如聚乙二醇(PEG)，已被用于化学修饰肽药物的表面。PEG结合于特定位点，或非特异性结合于目标肽的不同位点，并且增加肽分子量，从而防止肾中肽损失和肽水解，而不引起副作用。例如，国际专利公开WO2006/076471公开，通过将PEG连接于B型利钠肽(BNP)，BNP的生物活性可被保持，该B型利钠肽通过结合于NPR-A激活cGMP的产生并降低动脉内血压，从而有效作为治疗剂用于充血性心脏衰竭。同样，US6,924,264描述了通过将PEG连接于毒蜥外泌肽(exendin)-4的赖氨酸残基增加毒蜥外泌肽-4的体内持久性的方法。然而，虽然这些方法可通过增加PEG分子量延长肽药物的体内持久性，但肽药物的滴定度随PEG分子量增加而减少。作为另一增加生理活性蛋白质的体内稳定性的方法，已研发出制备融合蛋白的方法。在此方法中，通过基因重组连接具有高血清稳定性的蛋白质的基因和生理活性蛋白质的基因，并培养用该重组基因转化的动物细胞，产生融合蛋白。例如，已报告可通过基因重组连接高效增加蛋白质稳定性的白蛋白或其片段与期望的生理活性蛋白质来制备融合蛋白(国际专利公开号WO93/15199和WO93/15200，和欧洲专利公开号EP413,622)。国际专利公开号WO02/46227描述了通过基因重组偶联GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或其类似物与人血清白蛋白或免疫球蛋白片段(Fc)而制备的融合蛋白。美国专利号6,756,480描述了通过偶联甲状旁腺激素(PTH)或其类似物与免疫球蛋白片段(Fc)制备的融合蛋白。这些方法可克服聚乙二醇化收率低和非特异性的问题，但其仍具有不能显著增加肽在血液中的半衰期和在一些情况下滴定度低的局限性。为最大化增加血液半衰期的效果，已使用不同类型的肽连接体，但存在引起免疫应答的可能性。另外，如果使用具有二硫键的肽，如BNP，则错误折叠可能性高，并且如果肽连接体中存在非天然氨基酸残基，则其无法通过基因重组生成。最近，作为可促进活性最低限度减少和稳定性增加的长效蛋白质药物制剂，韩国专利登记号10-0567902(Physiologicallyactivepolypeptideconjugatehavingimprovedinvivodurability)和韩国专利登记号10-0725315(Proteincomplexusinganimmunoglobulinfragmentandmethodforthepreparationthereof)公开了通过组合免疫球蛋白Fc区、非肽基聚合物和生理活性多肽生成的缀合物。另外，韩国专利公开号10-2011-0134210(Insulinderivativedrugconjugateusingimmunoglobulinfragment)公开，通过连接免疫球蛋白Fc区、非肽基聚合物和PEG修饰的胰岛素类似物位点——具体地，通过共价键——生成的胰岛素缀合物显示在血液中提高的半衰期，并降低机体具有低血糖水平的危险。通过上述方法，胰岛素可作为生理活性多肽用于制备长效胰岛素缀合物。为制备包括长效胰岛素缀合物的药物，在储存和递送过程中防止物理化学变化，如热致变性、聚集、吸附、或光、热或添加剂杂质导致的水解，同时保持体内效力，是非常重要的。长效胰岛素缀合物与胰岛素肽本身相比具有较大体积和分子量，因此难以稳定。由于其化学差异，不同的蛋白质可在储存期间在不同的条件下以不同的速率逐渐失活。即，通过稳定剂延长储存期对于不同蛋白质是不同的。因此，用于提高蛋白质储存稳定性的稳定剂的适当比例、浓度和类型根据目标蛋白质的物理化学性质而不同。另外，当将不同的稳定剂一起使用时，由于竞争性相互作用和副作用，其可诱发与期望效果不同的不利影响。而且，在储存期间，储存的蛋白质的性质或其浓度可改变，从而产生不同的影响。因此，需要很多努力和注意来稳定化溶液中的蛋白质。具体地，关于具有提高的体内持久性和稳定性的长效胰岛素缀合物，其由与免疫球蛋白Fc区连接的生理活性肽——胰岛素——组成，因此其分子量和体积明显不同于一般胰岛素，从而需要用于稳定化蛋白质的具体组合物。而且，生理活性肽——胰岛素——和免疫球蛋白Fc区是在物理化学上不同的肽或蛋白质，因此其必须被同时稳定。然而，如上所述，不同的肽或蛋白质可由于其物理化学差异在储存期间在不同的条件下以不同的速率逐渐失活。而且，当将适合于肽或蛋白质中的每一种的稳定剂一起使用时，其可由于竞争性相互作用和副作用而诱发与期望效果不同的不利影响。因此，关于长效胰岛素缀合物，非常难以找到可同时稳定生理活性肽——胰岛素——和免疫球蛋白Fc区的稳定剂组合物。最近，可便于患者反复使用的蛋白质和肽的制剂已被研发。然而，多用制剂必须包含防腐剂以防止在反复给予后和废弃前的微生物污染。包含防腐剂的多用制剂与一次性使用制剂相比具有若干优势。例如，关于一次性使用制剂，大量药物由于剂量差异而被浪费。但通本文档来自技高网...

【技术保护点】
长效胰岛素缀合物的液体制剂，包括：药学有效量的长效胰岛素缀合物，其中胰岛素，作为生理活性肽，与免疫球蛋白Fc区连接；和不含白蛋白的稳定剂，其中所述稳定剂包括缓冲剂、糖醇、非离子型表面活性剂和等渗剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.07.25 KR 10-2012-00814771.长效胰岛素缀合物的液体制剂，包括：药学有效量的长效胰岛素缀合物，其中胰岛素，作为生理活性肽，通过聚乙二醇(PEG)与免疫球蛋白Fc区连接；和不含白蛋白的稳定剂，其中所述稳定剂包括缓冲剂、糖醇、非离子型表面活性剂和等渗剂，或者缓冲剂、蔗糖、非离子型表面活性剂和等渗剂；并且其中所述缓冲剂是乙酸钠缓冲剂，并且构成所述乙酸钠缓冲剂的乙酸的浓度为5mM至50mM；所述非离子型表面活性剂是聚山梨醇酯20，并且所述非离子型表面活性剂的浓度为0.02％w/v或更小；所述制剂的pH为5.6至6.5；所述糖醇或蔗糖的浓度基于溶液总体积为1％w/v至15％w/v；并且所述等渗剂的浓度为0.5mg/ml至20mg/ml。2.根据权利要求1所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述胰岛素具有与天然胰岛素相同的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述胰岛素是胰岛素衍生物，其通过天然胰岛素或显示与天然胰岛素相似活性的肽类似物的氨基酸置换、缺失或插入而生成。4.根据权利要求1所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述免疫球蛋白Fc区是衍生自IgG、IgA、IgD、IgE或IgM的Fc区。5.根据权利要求4所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述免疫球蛋白Fc区是衍生自选自IgG、IgA、IgD、IgE和IgM的免疫球蛋白的不同来源的结构域的杂合物。6.根据权利要求4所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述免疫球蛋白Fc区是由单链免疫球蛋白组成的二聚体或多聚体，所述单链免疫球蛋白由相同来源的结构域组成。7.根据权利要求6所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述免疫球蛋白Fc区是人无糖基化IgG4Fc区。8.根据权利要求1所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述药学有效量的长效胰岛素缀合物具有10mg/mL至200mg/mL的浓度。9.根据权利要求1所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述糖醇是甘露醇和山梨醇中的至少一种。10.根据权利要求1所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述等渗剂选自氯化钠、硫酸钠和柠檬酸钠。11.根据权利要求1所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述等渗剂是氯化钠。12.根据权利要求1所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述非离子型表面活性剂具有0.001％w/v至0.02％w/v的浓度。13.根据权利要求1所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述稳定剂进一步包括选自其它糖、其它多元醇和氨基酸的一种或多种物质。14.根据权利要求1所述的长效胰岛素缀合物的液体制剂，其中所述缓冲剂是乙酸钠缓冲剂，并且构成所述乙酸钠缓冲剂的乙酸的浓度为5mM至50mM；所述糖醇是甘露醇和山梨醇中的至少一种，并且具有基于溶液总体积1％w/v至15％w/v的浓度；并且所述等渗剂选自氯化钠、硫酸钠和柠檬酸钠，并且具有0.5mg/ml至20mg/ml的浓度。15.根据权利要求14所述的长效...

【专利技术属性】
技术研发人员：林亨奎，金贤煜，洪性熙，金玟永，裴城敏，权世昌，
申请(专利权)人：韩美药品株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国;KR