一种小分子多肽、其应用及产品制造技术

本发明专利技术公开了一种小分子多肽、其应用及产品。实验表明，所述小分子多肽，其应用于制备降低缺血后神经元坏死药物、降低缺血后神经元凋亡药物及防治缺血性卒中药物，具有良好的效果与实际操作可行性。本发明专利技术提供的产品，为其活性成分包括所述小分子多肽的防治缺血性卒中的药物，其为医学上可接受的剂型，优选为注射剂。

【技术实现步骤摘要】
一种小分子多肽、其应用及产品
本专利技术属于生物医药领域，更具体地，涉及一种小分子多肽、其应用及产品。
技术介绍
缺血性脑卒中是由于脑血流中断，引起血栓形成或栓塞，导致大脑局部缺血的一类严重的神经疾病，患者会出现语言功能损伤，视力丧失，瘫痪甚至死亡。脑卒中发病率、死亡率、致残率居高不下，伴随着人口老龄化的加剧，脑卒中的发生率还在逐渐上升。被公认为目前严重危害人类健康和生命安全的常见难治性疾病。尽管如此，目前针对脑缺血造成的损害所采取的治疗手段却非常有限，目前唯一有效的治疗是运用组织纤溶酶原激活物(tPA)的溶栓疗法。然而，出于安全考虑和溶栓治疗的时间窗较窄(小于4.5小时)，多数患者只能得到对症支持治疗。目前实验室针对脑缺血治疗所开发的小分子化合物已超过1000种，并开展了约200项临床试验，但所有这些方法运用到临床都面临失败。卒中的研究走在了十字路口，若要取得突破，则必须对传统治疗手段的利弊进行再评价，与此同时，还应研究新的策略来指导临床。因此，针对缺血性卒中脑损伤，开发新的药物来对抗脑损伤并保护神经细胞显得格外重要。
技术实现思路
针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本专利技术提供了一种小分子多肽、其应用及产品，其目的在于提供一种小分子多肽，对于缺血性神经细胞损伤具有修复作用，可用于制备防治缺血性卒中药物，由此解决目前针对脑缺血造成的损伤所采取的质量手段有限的技术问题。为实现上述目的，按照本专利技术的一个方面，提供了一种小分子多肽，其序列为SEQIDNO.1所示。按照本专利技术的另一方面，提供了编码所述小分子多肽的核苷酸序列。按照本专利技术的另一方面，提供了所述的小分子多肽的应用，其应用于制备降低缺血后神经元坏死药物。按照本专利技术的另一方面，提供了所述的小分子多肽的应用，其应用于制备降低缺血后神经元凋亡药物。按照本专利技术的另一方面，提供了所述的小分子多肽的应用，其应用于制备防治缺血性卒中药物。总体而言，通过本专利技术所构思的以上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有益效果：(1)本专利技术提供的小分子多肽，和对照组相比，对于缺血后神经元具有明显的滋养作用，实验表明，其应用于制备降低缺血后神经元凋亡药物及防治缺血性卒中药物，具有良好的效果；(2)本专利技术所涉及的小分子多肽纯度高，可溶，适合静脉注射，无毒副作用，便于转化生产；(3)本专利技术提供的小分子多肽，意在采用静脉注射的方式达到改善缺血性卒中后神经系统症状，减少缺血性卒中神经细胞死亡和脑损伤的目的，其可以经血液穿过血脑屏障被神经元摄取，可以转化应用于神经系统疾病如缺血性卒中，使其具有实际操作的可行性。附图说明图1是实施例1制备本专利技术提供的小分子多肽的色谱图；图2是离体细胞水平实施例1中制备的小分子多肽对缺血性卒中治疗作用的流程图；图3是离体细胞水平实施例1中制备的小分子多肽应用的最佳浓度探索结果示意图，其中图3A为应用不同浓度小分子多肽处理原代神经元免疫沉淀实验后免疫印迹条带图，图3B为图3A条带灰度统计图；图4是实施例1中制备的小分子多肽减少氧糖剥夺(OGD)处理后神经元坏死，逆转OGD引起微兴奋性突触后电流(mEPSC)频率和幅度下降的结果统计图，其中图4A为碘化丙啶(PI)结果统计图，图4B为树突棘数目统计图，图4C为mEPSC频率统计图，图4D为mEPSC幅度统计图；图5是在体动物水平实施例1中制备的小分子多肽应用的最佳浓度和治疗时间窗探索结果示意图，其中图5A为静脉注射不同浓度小分子多肽免疫沉淀后免疫印迹结果示意图，图5B为大脑中动脉栓塞(MCAO)后不同时间点应用小分子多肽免疫沉淀后免疫印迹结果示意图；图6是在体动物水平实施例1中制备的小分子多肽对缺血性卒中治疗作用的实施方案图；图7是实施例1中制备的小分子多肽减少缺血性卒中后缺血梗死体积与神经元死亡的结果统计图，其中图7A为TTC染色结果示意图，图7B为Fluoro-JadeC(FJ)和TUNEL染色结果示意图；图8是实施例1中制备的小分子多肽改善缺血性卒中后神经系统症状及运动平衡功能的结果统计图，其中图8A为神经功能评分结果统计图，图8B为1-5分钟内小鼠旷场运动速度结果示意图，图8C为Rotarod转棒实验结果示意图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。此外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。本专利技术提供的小分子多肽，其序列为SEQIDNO.1所示，为：Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Glu-Asp-Ser-Ser-Ser-Pro-Pro-Ser-Thr(YGRKKRRQRRR-EDSSSPPST)。所述小分子多肽为商业化公司合成。编码所述小分子多肽的核苷酸，其序列为SEQIDNO.2所示序列及其同义序列。本专利技术提供的小分子多肽具有滋养缺血后神经元的作用，可应用于制备降低缺血后神经元坏死药物及制备降低缺血后神经元凋亡药物，从而可应用于制备治疗或预防缺血性卒中药物的应用，具体如下：(1)缺血性卒中细胞模型应用所述小分子多肽氧糖剥夺(OxygenGlucoseDeprivation,OGD)是一种缺血性中风的体外细胞模型。我们对体外培养14天的原代神经元给予Lenti-EGFP-virus显示树突棘，共聚焦显微镜下观察树突棘的密度，进行计数。对感染了GFP的神经元进行60分钟OGD处理，然后再观察树突棘的密度，结果树突棘密度明显下降。用5μM的所述小分子多肽对培养的原代神经元进行孵育处理，OGD处理，结果树突棘密度的下降得到抑制，说明所述小分子多肽处理可以在细胞水平降低缺血后神经元树突棘丢失。PI染色检测OGD后神经元坏死情况，结果发现所述小分子多肽处理后坏死神经元数量较对照组明显下降。同时我们对OGD处理的原代神经元进行电生理记录，5μM的所述小分子多肽孵育处理能显著提高AMPA受体介导的mEPSC幅度和频率,说明所述小分子多肽处理可以恢复OGD导致的突触功能损伤。(2)缺血性卒中动物模型应用所述小分子多肽大脑中动脉栓塞(MiddleCerebralArteryOcclusion,MCAO)以及光照缺血栓塞模型广泛用于脑缺血研究中，通过向小鼠颈动脉中插入线拴堵塞大脑中动脉能引起大脑中动脉支配的皮层纹状体缺血，拔出线拴，则引起血流再灌注，从而引起缺血再灌注损伤，以模拟临床脑梗塞或脑栓塞的症状。光照缺血栓塞模型：小鼠腹腔注射Rosebengal，暴露头皮，15分钟后冷光源照射大脑局部，10分钟后，移除冷光源，则光照区域内的血管形成血栓，其所支配的脑区则缺血。采用一系列的实验来检测小鼠缺血后的表型。TTC染色反映缺血梗死体积，FJ和TUNEL检测神经元死亡与凋亡的情况，转棒实验Rotarod反映动物协调平衡能力，神经系统功能评分(NeurologicalScore,N.S.)反映缺血后神经系统症状，旷场实验检测小鼠的运动能力。对动物缺血再灌注后3小时和6小时的小鼠股静脉注射2mg/kg的所述小分子多肽溶液，动物缺血再灌注第3天处理，TTC染色显示给予所述小分子多肽的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小分子多肽，其特征在于，其序列为SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种小分子多肽，其特征在于，其序列为SEQIDNO.1所示。2.编码如权利要求1所述小分子多肽的核苷酸序列。3.一种如权利要求1所述的小分子多肽的应用，其应用于制备降低缺血后神经元坏死药物。4.一种如权利要求1所述的小分子多肽的应用，其应用于制备降低缺血后神...

【专利技术属性】
技术研发人员：旺姗，裴磊，颜欢欢，郭豫，李浩，唐娜，庞培，鲁友明，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42