一种适于蛋白质组学的牛支原体外膜蛋白提取方法技术

本发明专利技术涉及一种适于蛋白质组学的牛支原体外膜蛋白提取方法。该方法包括菌体培养与收集、液氮研磨、恒温超声震荡、离心收集蛋白质沉淀、用乙醇和丙酮漂洗，然后用真空冷冻离心干燥，获得蛋白粉末后裂解处理；将裂解后的溶液混匀，离心后保留上清液，即得到牛支原体外膜蛋白。本发明专利技术对蛋白的提取步骤和使用试剂进行优化，大大提高了蛋白提取的效率和纯净度，有效除去了双向电泳中干扰第一向和第二向的杂质，和传统方法相比，方法简便、省工省时、蛋白提取效率高、干扰物少，可获得分辨率高、重复性好、蛋白点分布均匀、蛋白点清晰的图谱，对牛传染性胸膜肺炎支原体组学的研究及免疫蛋白的筛选研究具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及。该方法包括菌体培养与收集、液氮研磨、恒温超声震荡、离心收集蛋白质沉淀、用乙醇和丙酮漂洗，然后用真空冷冻离心干燥，获得蛋白粉末后裂解处理；将裂解后的溶液混匀，离心后保留上清液，即得到牛支原体外膜蛋白。本专利技术对蛋白的提取步骤和使用试剂进行优化，大大提高了蛋白提取的效率和纯净度，有效除去了双向电泳中干扰第一向和第二向的杂质，和传统方法相比，方法简便、省工省时、蛋白提取效率高、干扰物少，可获得分辨率高、重复性好、蛋白点分布均匀、蛋白点清晰的图谱，对牛传染性胸膜肺炎支原体组学的研究及免疫蛋白的筛选研究具有重要意义。<b/>【专利说明】
本专利技术涉及一种外膜蛋白的提取方法，具体涉及一种适于蛋白质组学的牛支原体 外膜蛋白提取方法，属于生物
。
技术介绍
牛传染性胸膜肺炎又称牛肺疫，是由丝状支原体所致牛的一种高度接触性传染性 肺炎。该病以肺间质淋巴管、结蹄组织和肺泡组织的渗出性炎症以及浆液性纤维素性胸膜 肺炎为主要特征。本病的易感动物主要是奶牛、肉牛、黄牛、水牛、牦牛等。各种牛对本病的 易感性不同，依其品种、生活方式本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种适于蛋白质组学的牛支原体外膜蛋白的提取方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）菌体的培养与收集，收集在支原体培养基上生长的细菌，经菌体培养，得到冷冻保存的菌体，备用；（2）取冷冻菌体，用液氮研磨，准确称取一定量的菌体粉末至离心管中；往离心管中加入等量的蛋白提取液；将所得溶液充分混匀，恒温超声震荡；（3）在转速为12000 rpm的离心机中 4℃离心15 min，收集上清液，向上清液中加入5倍体积10% 的TCA‑丙酮，置于‑20℃沉淀过夜，然后4℃条件下在转速为12000 rpm 离心机中离心30 min，收集蛋白质沉淀；所述TCA‑丙酮中含有0.5%的β‑二巯基乙醇；（4）将所述蛋白...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李海利，魏成斌，张震，徐引弟，朗利敏，张青娴，候自花，蔺萍，游一，施巧婷，杨素新，崔忠华，
申请(专利权)人：河南省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：河南;41