The invention relates to a method of mesenchymal stem cell count high-throughput measurements between the steps are as follows: 1 the standard selection, the sample preparation, the positive control sample preparation, the blank preparation, the sample, such as measurement, the validity of the results, judgment, calculation, results. The invention can reduce human error: using conventional counting method, often because of problems in machine or manual counting requirements need to be diluted multiple samples, diluted high multiples easily cause serious error, this method can directly detect the sampling, avoid high dilution multiple to reduce experimental error.
【技术实现步骤摘要】
一种高通量测量间充质干细胞数量的方法
本专利技术属于细胞培养领域,涉及一种高通量测量间充质干细胞数量的方法。
技术介绍
细胞计数是在细胞培养过程中最为常见的操作,复苏、传代、制剂等操作都需要对培养细胞进行计数,以确认细胞数量。目前常见的技术方法有两种。一种是人工计数法,基本方法是将细胞悬液稀释,然后将少量悬液注入人工计数版,利用显微镜人工目测计数,最后依据计数板规格,通过公式计算出细胞数量;另一种是机器计数法,细胞稀释和处理过程与人工计数类似,只是计数时将少量稀释后的悬液注入机器配件中,再扫描计数。两种计数方法的基本原理没有脱离:测量少量样本个数,计算总样本个数这一思路。但这两种方法都有着自身的局限性:1、计数过程误差:人工计数法需要利用显微镜肉眼观测计数,这一过程人为主观性较大,常会出现不同人计数同一样本但结果不同的情况;而机器计数多采用扫描计数,有时会将不是细胞的颗粒计入其中,或者将过小的细胞漏计,造成计数误差。2、操作过程误差:人工计数和机器计数最终所需样本多为10-50μL左右,细胞数过多时还需要高倍稀释。因为样本量过少,在吸取样本和稀释的过程中,非常容易产生误差,而在加样过程中,因为计数池过薄,样本在扩散过程中也容易分布不均。这些操作过程的误差都会导致最终计算时所得结果的不准确。不适用于大批量操作:现今常用的细胞计数方法中,在不做重复实验的情况下,人工计数一次实验结束至少需要10-15分钟,机器计数也至少需要5分钟。并且这种两种方法每次只能对一个样本进行计数,针对大批量样本效率较低,有时甚至会因为计数时间问题影响后续的细胞实验。
技术实现思路
本专利 ...
【技术保护点】
一种高通量测量间充质干细胞数量的方法,其特征在于:步骤如下:⑴标准品选择:利用标准间充质干细胞溶液,使用PBS为溶剂,制备标准间充质干细胞标准曲线;⑵样本制备:取1mL待测细胞样本,加入至1.5mL离心管中,300g离心5分钟;弃去上清液,向沉淀细胞中加入PBS至1mL,反复吹打混匀;⑶样本阳性对照品制备:取1mL待测细胞样本,加入至1.5mL离心管中,300g离心5分钟;弃去上清液,向沉淀细胞中加入步骤⑴中最低浓度的标准品溶液1mL,反复吹打混匀;⑷空白对照品制备:取上述步骤⑵制成的样本1mL,300g离心5分钟,取上清液做空白对照品备用;⑸加样:分别取制备好的空白对照品、样本阳性对照品、标准品和样本各200μL,加入至96孔板中,每例各做一个复孔;⑹测量:使用酶标仪或紫外分光光度计,选择360nm波长对样本进行检测;⑺结果有效性判断:重复实验吸光度值的CV值应小于5%;相关系数R
【技术特征摘要】
1.一种高通量测量间充质干细胞数量的方法,其特征在于:步骤如下:⑴标准品选择:利用标准间充质干细胞溶液,使用PBS为溶剂,制备标准间充质干细胞标准曲线;⑵样本制备:取1mL待测细胞样本,加入至1.5mL离心管中,300g离心5分钟;弃去上清液,向沉淀细胞中加入PBS至1mL,反复吹打混匀;⑶样本阳性对照品制备:取1mL待测细胞样本,加入至1.5mL离心管中,300g离心5分钟;弃去上清液,向沉淀细胞中加入步骤⑴中最低浓度的标准品溶液1mL,反复吹打混匀;⑷空白对照品制备:取上述步骤⑵制成的样本1mL,300g离心5分钟,取上清液做空白对照品备用;⑸加样:分别取制备好的空白对照品、样本阳性对照品、标准品和样本各200μL,加入至96孔板中,每例各做一个复孔;⑹测量:使用酶标仪或紫外分光光度计,选择360nm波长对样本进行检测;⑺结果有效性判断:重复实验吸光度值的CV值应小于...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘国鑫,
申请(专利权)人:天津市康婷生物工程有限公司,
类型:发明
国别省市:天津,12
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