本发明专利技术公开了一种缩泉制剂的指纹图谱和特征图谱检测方法，包括对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、各原料药与成品之间的相关性的测定；采用多波长切换技术测定，以对照品的色谱峰保留时间和峰面积为1，计算供试品相对保留时间和相对峰面积，即得到缩泉制剂HPLC标准指纹图谱。由此方法得到的缩泉制剂HPLC标准指纹图谱归属于山药的指纹图谱具有5个共有峰；归属于益智仁的指纹图谱具有4个共有峰；归属于乌药的指纹图谱具有9个共有峰。本发明专利技术方法采用多波长的检测方法可达到增加质量覆盖面的目的，提高了检测灵敏度和检测质量，能全面、客观、科学地评价缩泉制剂的质量，特别是可将其作为缩泉制剂真伪鉴别的指标之一。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物质量控制
，特别涉及一种缩泉制剂标准指纹图谱及特征图谱的构建方法及质量检测方法。
技术介绍
缩泉制剂由山药、益智仁、乌药三味药材组成。以古代名方缩泉丸为基础方，运用现代先进设备和提取工艺精制而成。缩泉制剂处方为历代治疗肾元虚冷及小便失调之要方。方中以益智仁温补肾之阳，固气涩精为主药；山药补益脾肾之气，增强益智仁的作用，为辅药；乌药顺气开郁，宣通人体经络气血，以助阳气之恢复，并能散寒气，消胀满，止疼痛，改善肾阳不足，虚寒内生或寒凝聚力气滞出现的肢体清冷、腹部胀满、腰膝疼痛等症，为方中佐药。诸药和合，共奏温肾助阳，健脾益气，固精缩尿，顺气散寒之功。且择药精当，配伍严谨，脾肾同治，病症兼顾，实为治疗肾阳不足，下元虚冷不可多得之名方。临床适应症：肾内科：补肾、性功能减退；老年性迎风流泪症；冷泪症；双侧肾积水的治疗；慢性肾小球肾炎；肾病综合征的治疗。泌尿科：中老年尿频、夜尿过多；前列腺增生症；非感染性尿频；顽固性遗尿症、尿道综合征；慢性前列腺炎；精神紧张性尿频。儿科：小儿及青少年遗尿症；配合心理干预治疗小儿神经性尿频；中医辨证肾阳不足的小儿流涎；中医辨证肾阳不足的多涕症。妇科：女性中老年张力性尿失禁；中医辨证尿崩症；劳淋症；妇科崩漏、带下、乳泣、滑胎。现有技术中，根据缩泉中药方，已制得多种剂型的缩泉制剂，市场上缩泉制剂主要有丸剂、胶囊剂等。通常的制备工艺为：将原料药材碎断后加水和乙醇提取，按现有常规方法制成颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、口服液、合剂等。缩泉制剂作为中成药，其药效是多种活性成分共同作用的结果。但目前缩泉制剂现有的质量标准仅测定单一指标成份的含量，未对其他有效成分进行监测，存在一定局限性，不能全面反映缩泉制剂的质量水平。针对缩泉制剂的质量检测方法公开很少，如中国专利01100197.6(公开号CN01100197.6)、201010200971.2(公开号CN201010200971.2)、201210357722.3(公开号CN201210357722.3)均未涉及其质量检测方法；《中国药师》2014年第2期《HPLC法测定缩泉胶囊中去甲异波尔定的含量》记载了一种测定缩泉胶囊中去甲异波尔定的含量的HPLC方法；《中国医药指南》2013年9月第11卷第27期《HPLC法测定缩泉胶囊中尿囊素的含量》记载了一种测定缩泉颗粒剂中尿囊素的含量的HPLC方法；《中国医药指南》2013年9月第11卷第27期《HPLC法测定缩泉胶囊中乌药醚内酯的含量》记载了一种测定缩泉胶囊剂中乌药醚内酯的含量的HPLC方法。现有技术中，尚无较全面的质量控制方法反映现有中药材、中间体及成品的质量状况，也无法对生产过程及产品质量有效控制，不能较好地保证其临床疗效。因此，建立缩泉其制剂的指纹图谱检测方法和标准指纹图谱及其特征图谱检测方法具有非常重要的意义。
技术实现思路
本专利技术旨在克服现有技术的不足，提供一种缩泉制剂标准指纹图谱及特征图谱的构建方法及质量检测方法。为了达到上述目的，本专利技术提供的技术方案为：所述缩泉制剂标准指纹图谱及特征图谱的构建方法包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备：用体积百分比浓度为50％～100％甲醇将去甲异波尔定配制成每1mL含0.01—0.05mg去甲异波尔定的对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：用体积百分比浓度为50％～100％甲醇或体积百分比浓度为50％～100％乙醇将缩泉制剂供试品配制成每1mL含20～100mg缩泉制剂供试品的供试品溶液(所述的缩泉制剂为口服液、合剂时，混匀，量取1.0～5.0ml；所述的制剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂时，称取粉末0.6～3.0g)；所述的缩泉制剂包括如下重量份的组分(为现有中药方)：乌药90～110、山药90～110、益智仁90～110，优选为乌药100、山药100、益智仁100(取缩泉制剂，置锥形瓶中，加50％～100％甲醇或50％～100％乙醇25～125ml，称重，回流提取或超声处理10～60min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液)(3)高效液相色谱分析：分别精密吸取等量(优选10μl)的参照物溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，得缩泉制剂指纹图谱；高效液相色谱分析中，色谱柱为C18反相色谱柱，优选为柱长为250mm的C18反相色谱柱；流动相为流动相A与流动相B组成的梯度洗脱液，流动相A为乙腈，流动相B为体积百分比浓度为0.05～0.2％，优选0.1％的磷酸溶液；检测波长为280nm、260nm、230nm三个波长，检测波长的切换时间分别为0min、21min、33min；柱温25℃～35℃；流速0.8ml/min～1.2ml/min，优选为1.0ml/min；分析时间为45～55min，优选50min；采用梯度洗脱：根据10批次缩泉制剂的指纹图谱，制定标准指纹图谱；所述的标准指纹图谱在280、260、230nm切换波长检测下，具有14个共有峰，共有峰峰面积总和占总峰面积的90％以上，归属于山药的指纹图谱具有5个共有峰；归属于益智仁的指纹图谱具有4个共有峰；归属于乌药的指纹图谱具有9个共有峰；其中以5号峰去甲异波尔定为参照峰S，计算相对保留时间和相对峰面积，各峰的相对保留时间分别为：(1)0.324～0.358、(2)0.433～0.479、(3)0.541～0.598、(4)0.919～1.016、(S)1.000、(6)1.004～1.109、(7)1.275～1.410、(8)2.334～2.580、(9)2.420～2.675、(10)2.693～2.977、(11)2.732～3.020、(12)3.135～3.465、(13)3.204～3.541、(14)3.456～3.819；本专利技术中，所述的10批次缩泉指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比对，其相似度为0.911～1.000根据10批次由缩泉制剂指纹图谱的共有峰确定的特征图谱，制定标准特征图谱；所述标准特征图谱具有9个特征峰，以4号峰为去甲异波尔定作为参照峰，各特征峰的相对保留时间和相对标准偏差为：1号峰：相对保留时间0.341±0.017，相对标准偏差为0.20％；2号峰：相对保留时间0.456±0.023，相对标准偏差为0.15％；3号峰：相对保留时间0.569±0.028，相对标准偏差为0.14％；4号峰：相对保留时间1.000±0.000，相对标准偏差为0.00％；5号峰：相对保留时间1.057±0.053，相对标准偏本文档来自技高网...
【技术保护点】
缩泉制剂标准指纹图谱及特征图谱的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备：用体积百分比浓度为50％～100％甲醇将去甲异波尔定配制成每1mL含0.01—0.05mg去甲异波尔定的对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：用体积百分比浓度为50％～100％甲醇或体积百分比浓度为50％～100％乙醇将缩泉制剂供试品配制成每1mL含20～100mg缩泉制剂供试品的供试品溶液；所述的缩泉制剂包括如下重量份的组分：乌药90～110、山药90～110、益智仁90～110；(3)高效液相色谱分析：分别精密吸取等量的参照物溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，得缩泉制剂指纹图谱；高效液相色谱分析中，色谱柱为C18反相色谱柱；流动相为流动相A与流动相B组成的梯度洗脱液，流动相A为乙腈，流动相B为体积百分比浓度为0.05～0.2％的磷酸溶液；检测波长为280nm、260nm、230nm三个波长，检测波长的切换时间分别为0min、21min、33min；柱温25℃～35℃；流速0.8ml/min～1.2ml/min；分析时间为45～55min；采用梯度洗脱：根据10批次缩泉制剂的指纹图谱，制定标准指纹图谱；所述的标准指纹图谱在280、260、230nm切换波长检测下，具有14个共有峰，共有峰峰面积总和占总峰面积的90％以上，归属于山药的指纹图谱具有5个共有峰；归属于益智仁的指纹图谱具有4个共有峰；归属于乌药的指纹图谱具有9个共有峰；其中以5号峰去甲异波尔定为参照峰S，计算相对保留时间和相对峰面积，各峰的相对保留时间分别为：(1)0.324～0.358、(2)0.433～0.479、(3)0.541～0.598、(4)0.919～1.016、(S)1.000、(6)1.004～1.109、(7)1.275～1.410、(8)2.334～2.580、(9)2.420～2.675、(10)2.693～2.977、(11)2.732～3.020、(12)3.135～3.465、(13)3.204～3.541、(14)3.456～3.819；根据10批次由缩泉制剂指纹图谱的共有峰确定的特征图谱，制定标准特征图谱；所述标准特征图谱具有9个特征峰，以4号峰为去甲异波尔定作为参照峰，各特征峰的相对保留时间和相对标准偏差为：1号峰：相对保留时间0.341±0.017，相对标准偏差为0.20％；2号峰：相对保留时间0.456±0.023，相对标准偏差为0.15％；3号峰：相对保留时间0.569±0.028，相对标准偏差为0.14％；4号峰：相对保留时间1.000±0.000，相对标准偏差为0.00％；5号峰：相对保留时间1.057±0.053，相对标准偏差为0.05％；6号峰：相对保留时间2.457±0.123，相对标准偏差为0.17％；7号峰：相对保留时间2.835±0.142，相对标准偏差为0.16％；8号峰：相对保留时间3.300±0.165，相对标准偏差为0.19％；9号峰：相对保留时间3.638±0.182，相对标准偏差为0.20％。...
【技术特征摘要】
1.缩泉制剂标准指纹图谱及特征图谱的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步
骤：
(1)对照品溶液的制备：用体积百分比浓度为50％～100％甲醇将去甲异波尔定配制成
每1mL含0.01—0.05mg去甲异波尔定的对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备：用体积百分比浓度为50％～100％甲醇或体积百分比浓度为
50％～100％乙醇将缩泉制剂供试品配制成每1mL含20～100mg缩泉制剂供试品的供试品溶
液；所述的缩泉制剂包括如下重量份的组分：乌药90～110、山药90～110、益智仁90～
110；
(3)高效液相色谱分析：分别精密吸取等量的参照物溶液和供试品溶液，注入液相色
谱仪，测定，得缩泉制剂指纹图谱；高效液相色谱分析中，色谱柱为C18反相色谱柱；流
动相为流动相A与流动相B组成的梯度洗脱液，流动相A为乙腈，流动相B为体积百分
比浓度为0.05～0.2％的磷酸溶液；检测波长为280nm、260nm、230nm三个波长，检测波
长的切换时间分别为0min、21min、33min；柱温25℃～35℃；流速0.8ml/min～
1.2ml/min；分析时间为45～55min；采用梯度洗脱：
根据10批次缩泉制剂的指纹图谱，制定标准指纹图谱；所述的标准指纹图谱在280、
260、230nm切换波长检测下，具有14个共有峰，共有峰峰面积总和占总峰面积的90％以
上，归属于山药的指纹图谱具有5个共有峰；归属于益智仁的指纹图谱具有4个共有峰；
归属于乌药的指纹图谱具有9个共有峰；其中以5号峰去甲异波尔定为参照峰S，计算相
对保留时间和相对峰面积，各峰的相对保留时间分别为：(1)0.324～0.358、(2)0.433～
0.479、(3)0.541～0.598、(4)0.919～1.016、(S)1.000、(6)1.004～1.109、(7)
1.275～1.410、(8)2.334～2.580、(9)2.420～2.675、(10)2.693～2.977、(11)2.732～
3.020、(12)3.135～3.465、(13)3.204～3.541、(14)3.456～3.819；
根据10批次由缩泉制剂指纹图谱的共有峰确定的特征图谱，制定标准特征图谱；所
述标准特征图谱具有9个特征峰，以4号峰为去甲异波尔定作为参照峰，各特征峰的相对
保留时间和相对标准偏差为：
1号峰：相对保留时间0.341±0.017，相对标准偏差为0.20％；
2号峰：相对保留时间0.456±0.023，相对标准偏差为0.15％；
3号峰：相对保留时间0.569±0.028，相对标准偏差为0.14％；
4号峰：相对保留时间1.000±0.0...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘令安，杨华，张妮瑜，张飞飞，王雄龙，许志，张建伟，
申请(专利权)人：湖南汉森制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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