一种枳壳药材指纹图谱的检测方法及标准指纹图谱技术

本发明专利技术公开了一种枳壳药材指纹图谱的检测方法及标准指纹图谱，以及枳壳药材指纹图谱或标准指纹图谱在鉴别枳壳药材中的用途。方法包括：（1）取枳壳药材粉碎成粗粉，精密称定，加入甲醇，进行提取，取续滤液，即得供试品溶液；（2）制备对照品溶液；（3）分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得枳壳指纹图谱。本发明专利技术的测定方法操作简便，特征性成分保留完整，重复性、稳定性良好，精密度高，专属性强，对于指导生产投料、确保质量可靠具有积极作用，本发明专利技术建立的枳壳药材指纹图谱可有效的监控枳壳药材的质量及鉴别其真伪。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物分析
，特别涉及一种枳壳药材指纹图谱及其建立方法。具体地，本专利技术涉及一种枳壳药材的高效液相色谱（HPLC）切换波长法指纹图谱及其建立方法，以及枳壳的标准指纹图谱。本专利技术还涉及一种枳壳药材质量优劣的鉴别方法。
技术介绍
枳壳为芸香科柑橘属植物酸橙CitrusaurantiumL及其栽培变种的干燥未成熟果实。《中国药典》2015年版收载的栽培变种为黄皮酸橙(Citrusaurantium‘Huangpi’)、塘橙（Citmsaurantium‘Tangcheng’)、朱栾(Citrusaurantium‘Chuluan’)、代代花(Citrusaurantium‘Daidai’)的干燥未成熟果实，枳壳为7月果皮尚绿时采收，是常用中药材。枳壳味苦、辛、酸，温，归脾、胃经，具有行气宽中、消食、化痰等功能,用于胸脘满闷胀痛、食积不化、痰饮、胃下垂、脱肛、子宫脱垂。枳壳药材来源于酸橙和甜橙，由于各产地的地理环境、气候、土壤等生长条件不同以及采收后加工炮制方法不同，使枳实药材在化学成分组成及含量上差异很大，因而直接影响到药材质量。2015版药典规定，以柚皮苷、新橙皮苷作为枳壳质量控制的指标（国家药典委员会编，中华人民共和国药典2015年版，北京：中国医药工业出版社，2015，一部：246），采用两个指标成分进行中药质量控制的方法不能全面反映中药内在化学成分的种类和数量，存在一定局限性，不能全面控制药材质量。枳壳中的主要活性成分为挥发油、黄酮类化合物和少量生物碱类化合物，其药理作用应该是多种成分综合作用的结果。因此仅以单一成分或几个主要有效成分来控制和评价枳壳的质量是不全面的。而指纹图谱作为一种综合的、可量化的评价中药质量的检测手段，恰好适用于对中药多成分的质量评价。针对枳壳的研究主要涉及栽培技术与提取分离技术，质量检测方法公开较少，如中国专利201410837547.7（公开号CN104587014A）涉及的质量检测方法主要是对枳壳提取物进行总黄酮检测，不是对枳壳药材进行检测，也没有对质量进行全面控制，仅测定了总黄酮总类成分。《海峡药学》2003年第6期《绿衣枳壳指纹图谱的研究》记载了一种应用气相色谱（GC）测定绿衣枳壳中挥发油指纹图谱的方法；《中国药学杂志》2005年第11期《中药积壳HPLC指纹图谱分析及化学模式识别分类研究》记载了应用高效液相（HPLC）测定枳壳的指纹图谱方法，但仅有8个共有峰且仅指认柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷等三个指标成分；《中草药》2009年第3期《不同栽培品种枳壳HPLC指纹图谱研究》记载了测定枳壳的HPLC指纹图谱方法，但仅采用单一波长，没有对共有峰进行指标成分指认；《中国中药杂志》2008年第20期《不同产地和品种枳壳药材的毛细管电泳指纹图谱研究》记载了应用毛细管电泳测定枳壳的指纹图谱方法；《中国现代中药》2009年第12期《麸炒积壳HPLC指纹图谱的研究》记载了应用高效液相色谱测定枳壳炮制品的指纹图谱方法，但仅采用单一波长测定，仅鉴定了柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷3个特征峰；《中国现代应用药学》2015年第4期《市售枳壳饮片的质量调查与指纹图谱研究》记载了应用高效液相色谱测定枳壳饮片的指纹图谱方法，采用单一波长仅有5个共有峰且仅指认芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷等四个指标成分。现有技术中，鉴定的指标成分少，不能全面反映药材的质量优劣，保证用药的疗效，因此，建立枳壳药材的指纹图谱检测方法及标准指纹图谱方法具有非常重要的意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种枳壳指纹图谱的测定方法，该方法在控制枳壳的质量，有效的指导临床和生产中使用、保证用药的有效、安全和可靠具有积极作用。建立的方法和枳壳药材HPLC标准指纹图谱能够用于鉴定或者鉴别枳壳药材质量真伪优劣，具有较高的可信度和极高的灵敏度。由此提供了下述专利技术：本专利技术的一种枳壳药材指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备：取枳壳药材粗粉，精密称定，加入甲醇，超声或回流提取，提取液以微孔膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；（2）对照品溶液的制备：分别取芸香柚皮苷对照品、柚皮苷对照品、橙皮苷对照品、新橙皮苷对照品、柠檬苦素对照品、川陈皮素对照品、诺米林对照品、橘红素对照品，精密称定，分别加入甲醇制成对照品溶液；（3）高效液相色谱检测：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得枳壳指纹图谱；其中，色谱条件为：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，4.6×250mm，5μm；柱温：20~40℃；检测波长为280nm、215nm，切换时间为0min、24.01min；进样量为10μl；流速：1.0ml/min；分析时间为70min；流动相为流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸溶液；采用梯度洗脱方式：0min→25min→25.01min→35min→60min→70min，乙腈20%→24%→30%→40%→95%→100%。所述步骤（1）的枳壳粗粉与甲醇的比例为0.2g:50ml。所述步骤（1）的超声或回流提取时间为1小时。所述步骤（2）中的对照品溶液具体为：每1ml各含芸香柚皮苷70ng、柚皮苷80ng、橙皮苷40ng、新橙皮苷80ng、柠檬苦素70ng、川陈皮素80ng、诺米林70ng、橘红素60ng的混合溶液。枳壳指纹图谱中12个色谱峰被确定为共有峰，通过与对照品保留时间的比较，确定峰1为芸香柚皮苷，峰2为柚皮苷，峰3为橙皮苷，峰4为新橙皮苷，峰8为柠檬苦素，峰9为川陈皮素，峰10为诺米林，峰11为橘红素，所述指纹图谱的12个共有指纹峰的相对保留时间范围及相对标准偏差如下：1号峰：0.680～0.692，RSD为0.68%；2号峰：0.789～0.804，RSD为0.92%；3号峰：0.862～0.877，RSD为0.75%；4号峰：1，RSD为0%；5号峰：1.277～1.296，RSD为0.51%；6号峰：1.893～1.924，RSD为0.74%；7号峰：2.322～2.345，RSD为0.65%；8号峰：2.530～2.547，RSD为1.02%；9号峰：2.670～2.696，RSD为0.84%；10号峰：2.765～2.828，RSD为0.34%；11号峰：2.834～2.854，RSD为0.59%；12号峰：3.560～3.571，RSD为0.64%。本专利技术与现有技术相比，具有以下有益效果：（1）本专利技术建立的切换波长指纹图谱能够较单波长指纹图谱更全面的反应中药的物质信息，克服了枳壳质量检测方法所检测的有效成分单一，不能全面反应枳壳质量的缺陷。通过波长的转换，增强了指纹峰的可视化比较，指认了8个指标成分，更有效的表征了枳壳的质量信息，更有利于增强对药材的质量监控；（2）本专利技术获得的标准指纹图谱比较指纹图谱中共有峰的有无，能有效地监控枳壳药材的质量，完善了枳壳药材的质量评价体系，为枳壳药材质量的全面、有效控制提供了理论和实践基础；（3）本专利技术方法适用于枳壳药材真伪和品质的鉴别，有利于指导投料、规范生产操作，真正确保临床用药的安全、有效、可控；（4）本专利技术方法操作简便、稳定、重复性好，结论客观、准确。附图说明图1为枳壳药材标准指纹图谱，其中峰1为芸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种枳壳药材指纹图谱的检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备：取枳壳药材粗粉，精密称定，加入甲醇，超声或回流提取，提取液以微孔膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；（2）对照品溶液的制备：分别取芸香柚皮苷对照品、柚皮苷对照品、橙皮苷对照品、新橙皮苷对照品、柠檬苦素对照品、川陈皮素对照品、诺米林对照品、橘红素对照品，精密称定，分别加入甲醇制成对照品溶液；（3）高效液相色谱检测：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得枳壳指纹图谱；其中，色谱条件为：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，4.6×250mm，5μm；柱温：20~40℃ ；检测波长为280nm、215nm，切换时间为0min、24.01min；进样量为10μl；流速：1.0ml/min；分析时间为70min；流动相为流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸溶液；采用梯度洗脱方式：0min→25min→25.01min→35min→60min→70min，乙腈20%→24%→30%→40%→95%→100%。

【技术特征摘要】
1.一种枳壳药材指纹图谱的检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备：取枳壳药材粗粉，精密称定，加入甲醇，超声或回流提取，提取液以微孔膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；（2）对照品溶液的制备：分别取芸香柚皮苷对照品、柚皮苷对照品、橙皮苷对照品、新橙皮苷对照品、柠檬苦素对照品、川陈皮素对照品、诺米林对照品、橘红素对照品，精密称定，分别加入甲醇制成对照品溶液；（3）高效液相色谱检测：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得枳壳指纹图谱；其中，色谱条件为：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，4.6×250mm，5μm；柱温：20~40℃；检测波长为280nm、215nm，切换时间为0min、24.01min；进样量为10μl；流速：1.0ml/min；分析时间为70min；流动相为流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸溶液；采用梯度洗脱方式：0min→25min→25.01min→35min→60min→70min，乙腈20%→24%→30%→40%→95%→100%。2.根据权利要求1所述的一种枳壳药材指纹图谱的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）的枳壳粗粉与甲醇的比例为0.2g:50ml。3.根据权利要求1所述的一种枳壳药材指纹图谱的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）的超声或回流提取时间为1小时。4.根据权利要求1所述的一种枳壳...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘令安，杨华，张妮瑜，林俊华，张建伟，王雄龙，郭元满，
申请(专利权)人：湖南汉森制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43