组合物制造技术

本发明专利技术涉及包含α-突触核蛋白的表位的至少一种模拟表位的组合物，其用在预防和/或治疗突触核蛋白病的方法中，其中所述至少一种模拟表位偶联或融合至药学可接受的载体蛋白，所述载体蛋白选自下组：无毒白喉毒素突变体、匙孔虫戚形血蓝素(KLH)、白喉毒素(DT)、破伤风毒素(TT)和流感嗜血杆菌蛋白D(蛋白D)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】组合物
本专利技术涉及用于预防和/或治疗突触核蛋白病（Synucleinopathy)的药物。
技术介绍
突触核蛋白病是变化多端的一组具有共同的病理学特征的神经退行性障碍：在 神经病理学检查中，可以检出特征性损伤，其在选定的神经元和神经胶质细胞群体中含有 a-突触核蛋白（alpha-syn，a-syn)蛋白的异常聚集体。 a -syn(最初鉴定为PARKl和PARK4)是一种在新皮质、海马、齿状回、嗅球、纹状 体、丘脑和小脑中广泛表达的140个氨基酸的蛋白质。a -syn也在造血细胞，包括B-、T-、 和NK细胞及单核细胞和血小板中高度表达。在这些细胞中的确切作用是未知的，但是其已 经牵涉巨核细胞（血小板前体）的分化。 最常见的突触核蛋白病包括但不限于卢伊体病（Lewy body disorder) (LBD)，如 帕金森氏病（PD)、帕金森氏病伴痴呆（PDD)和卢伊体痴呆（dementia with Lewy bodies) (DLB)，及多系统萎缩（MSA)或神经退行性变伴脑铁积累I型（NBIA I型）。另外，基于 典型的、包含a-syn的损伤的出现，其他神经退行性疾病可被归类于突触核蛋白病，所述 其他神经退行性疾病为：进行性核上性麻搏（supranuclear palsy) (PSP)，额颞叶痴呆 (Fronto-temporal dementia) (FTD)、皮克氏病（PiD)和皮质基底退化症（cortico-basal degeneration) (CBD)。目前,针对这些疾病的治疗选项包括治标性药物,例如L-多巴、抗胆 碱能药物及单胺氧化酶抑制剂。然而，目前存在的所有治疗机会仅导致症状性缓解，而没有 在患者中诱导长效的疾病减轻效果。 卢伊体病（LBD)是以震颤、强直、运动徐缓及以脑中丧失多巴胺能神经元为特征 的进行性神经退行性病症。在DLB和PDD的病例中，症状还包括认知受损。在西方国家，年 龄60岁以上的人群的多至2%形成HVLBD的典型症状。目前，仅有治标性治疗。遗憾的 是，这些疗法仅提供早期症状的暂时缓解，而不遏制疾病进展。PD/LBD的发病机制仍不完全 了解，但是似乎疾病的发展中牵涉遗传易感性和环境因素。尽管所有遗传进展，但HVLBD 仍主要是没有已知原因的散发性病症（又称作特发性HVLBD)。 患有此疾病的患者在脑的皮质和皮质下区中形成被称作卢伊体（LB)的特征性泛 素化胞内内含物。特别地，具有高含量多巴胺能神经元或神经元投射的区域显示这种典型 的病理学特征。最近，几项研究可以显示突触蛋白a-syn在LBD发病机制中发挥中枢作用。 在LBD中，a-syn在遍及受影响的脑区的LB中积累。另外，可以证明a-syn基因中的单 点突变及双倍或多倍突变与罕见的家族型帕金森氏综合征（parkinsonism)有关。重要的 是，基于来自转基因（tg)小鼠中及黑腹果蝇（Drosophila melanogaster)中的过表达研究 的结果，其在HVLBD发病机制中的关键作用被着重指出，因为这些动物模型模拟ro的数种 特征。 另一种非常重要的突触核蛋白病是多系统萎缩（MSA)。MSA是一种以L-多巴 抗性帕金森氏综合征、小脑性共济失调（cerebellar ataxia)、和家族性自主神经异常 (dysautonomia)的症状为特征的散发性神经退行性病症。患者遭受影响各个脑区（包括 纹状体、黑质、小脑、脑桥，及下橄榄体和脊髓）的多系统神经元损失。MSA以遍及中枢神经 系统的a-syn-阳性神经胶质细胞质内含物（GCI)和罕见的神经元内含物为特征。这些内 含物与纹状体黑质变性（striatonigral degeneration)、橄榄体脑桥小脑萎缩、及髓质和 脊髓中牵涉自主核有关。GCI对于MSA发病机制的重要性得到普遍公认，并且通过对分析 a-syn过表达在少突神经胶质中的效果的转基因小鼠模型的新近分析得到强调。在过表达 人a -Syn的tg小鼠中，观察到GCI样聚集体和MSA的生化标志物两者。 虽然a -syn积累导致突触核蛋白病中的典型神经退行性变特征的精确机制没有 得到完全了解，但是新近的研究暗示a-syn的异常形成和积累牵涉突触潜在核蛋白病的 变性过程。最近，已经在LB中鉴定出不同形式的a-syn。除了所述蛋白质的全长形式外， 已经鉴定出不同形式的经修饰的a-syn，包括磷酸化的、硝化的、和单_、二_、或三-泛素化 的a-syn。另外，已经在来自转基因小鼠和病例两者的脑组织中检出蛋白质的C端截短 形式，如a-syn 1-119、a-syn 1-122和a-syn 1-123。目前认为，从LB和Lewy神经突中 检出的多至15%的a-syn是经截短的。使用截短的a-syn的先前的体外研究可以证明， 缺乏C端20-30个氨基酸的a -syn显示聚集及形成Lewy神经突和LB中找到的细丝的趋 势升高。如此，这些截短的型式可以以与阿耳茨海默氏病（AD)中的淀粉状蛋白beta (A3) 的经截短和经修饰形式相似的方式起作用。认为A3的这些截短和经修饰形式充当斑块沉 积的种子分子（seed molecule)，并且在体内及在体外显示了较高的聚集倾向及高神经毒 性和突触毒性。 这样一来，全长a -syn及截短的和/或经修饰形式的a -syn (其显示潜在的播种 效应）被认为会发生导致寡聚物形成的积累。基于新近的研究，认为例如在突触末端和轴 突中的此类寡聚体形成对于HVLBD发展发挥重要的作用，并且如此可以通过存在截短形 式的a-syn来增强。因此，a-syn沉积和寡聚化的降低在治疗突触核蛋白病，尤其是特发 性LBD/H)和MSA中应当是有益的，并且在目前的治疗策略中应用L-多巴的仅仅症状减轻 之外，可以呈现用于治疗这些神经退行性疾病的第一种策略。 在 Iwatsubo T. (Neuropathology 27 (5) (2007) :474-478)中，检查了 a -突触核 蛋白沉积物及其磷酸化与a-突触核蛋白病发病机制的关联。此出版物的作者发现，突触 核蛋白病损伤中沉积的a-突触核蛋白的丝氨酸129是广泛磷酸化的。US 2007/213253涉 及突变体人a-突触核蛋白及自其衍生的肽，其可以用于抑制野生型人a-突触核蛋白的 聚集。在WO 2004/041067中，披露了用于预防或治疗与a-突触核蛋白聚集体有关的疾病 的手段和方法，其包括使用a-突触核蛋白片段。在US 2003/166558中，描述了可用于诱 导对蛋白质沉积物的免疫应答的肽。US 2005/198694涉及包含至少100个氨基酸，并具有 删除1至23个氨基酸的C端的a -突触核蛋白片段。 Liang 等（J. Neurochem. 99 (2006) :470-482)研究了在大鼠中调节 a -突触核蛋 白。他们观察到在好酒大鼠 （alcohol preferring rat)中，与非好酒大鼠（alcohol-non preferring rat)相比，a-突触核蛋白的表达速率增加。 在 Hamilton BA (Genomics 83(2004)本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含α‑突触核蛋白的表位的至少一种模拟表位的组合物，其用在预防和/或治疗突触核蛋白病的方法中，其中所述至少一种模拟表位偶联或融合至药学可接受的载体蛋白，所述载体蛋白选自下组：无毒白喉毒素突变体、匙孔虫戚形血蓝素(KLH)、白喉毒素(DT)、破伤风毒素(TT)和流感嗜血杆菌蛋白D(蛋白D)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.05.01 EP 12166315.71. 包含a-突触核蛋白的表位的至少一种模拟表位的组合物，其用在预防和/或治 疗突触核蛋白病的方法中，其中所述至少一种模拟表位偶联或融合至药学可接受的载体 蛋白，所述载体蛋白选自下组：无毒白喉毒素突变体、匙孔虫戚形血蓝素（KLH)、白喉毒素 (DT)、破伤风毒素（TT)和流感嗜血杆菌蛋白D(蛋白D)。2. 根据权利要求1的组合物，其中所述无毒白喉毒素突变体选自下组：CRM 197、CRM 176、CRM 228、CRM 45、CRM 9、CRM 102、CRM 103 和 CRM 107,特别是 CRM 197。3. 根据权利要求1或2的组合物，其中所述至少一种模拟表位用至少一种佐剂进行配 制。4. 根据权利要求3的组合物，其中至少一种佐剂能够刺激先天性免疫系统。5. 根据权利要求4的组合物，其中所述能够刺激先天性免疫系统的至少一种佐剂包含 Toll样受体（TLR)激动剂或由Toll样受体（TLR)激动剂组成，所述Toll样受体（TLR)激 动剂优选为TLR1激动剂、TLR2激动剂、TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR5激动剂、TLR7激动 齐IJ、TLR8激动剂或TLR9激动剂，特别优选为TLR4激动剂。6. 根据权利要求5的组合物，其中所述TLR激动剂选自下组：单磷酰基脂质A (MPL)、 3-去-0-乙酰化单磷酰基脂质A(3D-MPL)、聚I:C、GLA、鞭毛蛋白、R848、咪喹莫特和CpG。7. 根据权利要求3至6中任意一项的组合物，其中所述至少一种佐剂包含皂苷优选 QS21、油包水乳液和脂质体或由皂苷优选QS21、油包水乳液和脂质体所组成。8. 根据权利要求3的组合物，其中所述至少一种佐剂选自下组：MF59、AS0UAS02、 AS03、AS04、氢氧化铝和磷酸铝。9. 根据权利要求1至8中任意一项的组合物，其中所述表位包含氨基酸序列KNEEGAP 或 DMPVDPDN。10. 根据权利要求1至9中任意一项的组合物，其中所述至少一种模拟表位包含氨基酸 序列 (X1)nX2X3X4X 5GX6P(X7)m (式 I)， 其中 Xi是任意氨基酸残基， x2是选自下组的氨基酸残基：赖氨酸（K)、精氨酸（R)、丙氨酸（A)和组氨酸（H)， 乂3是选自下组的氨基酸残基：天冬酰胺（N)、谷氨酰胺（Q)、丝氨酸（S)、甘氨酸（G)和 丙氨酸（A)、优选地天冬酰胺（N)、丝氨酸（S)、甘氨酸（G)和丙氨酸（A)， X4是选自下组的氨基酸残基：谷氨酸（E)、天冬氨酸（D)和丙氨酸（A)， X5是选自下组的氨基酸残基：谷氨酸（E)和天冬氨酸（D)， X6是选自下组的氨基酸残基：丙氨酸（A)和酪氨酸（Y)， X7是任意氨基酸残基， n和m独立的是0或大于0的整数， 其中式I的氨基酸序列与具有氨基酸序列KNEEGAP的a -突触核蛋白的7聚体多肽片 段不相同，或者不包含所述7聚体多肽片段，且其中 包含式I的氨基酸序列的所述至少一种模拟表位具有结合抗体的能力，该抗体对包含 所述氨基酸序列KNEEGAP的a -突触核蛋白的表位是特异性的。11. 根据权利要求10的组合物，其中所述模拟表位包含选自下组的氨基酸序列： (X1)nKNDEGAP(X7)m, (X:) nANEEGAP (X7) m, (X:) nKAEEGAP (X7) m, (X:) nKNAEGAP (X7) m, (X:)nRNEEGAP (X丄、（X) nHNEEGAP (X丄、（X〇 nKNEDGAP (X丄、（X) nKQEEGAP (X丄、（X〇 nKSEEGAP (X7)m> (X1)nKNDDGAP(X7)m, (X:) nRNDEGAP (X7) m, (X:) nRNEDGAP (X7) m, (X:) nRQEEGAP (X7) m, (X:)nRSEEGAP (X7) m, (X:) nANDEGAP (X7) m, (X:) nANEDGAP (X7) m, (X:) nHSEEGAP (X7) m, (X:) nASEEGAP (X7)m> (X1)nHNEDGAP(X7)m, (X:) nHNDEGAP (X7) m, (X:) nRNAEGAP (X7) m, (X:) nHNAEGAP (X7) m, (X:)nKSAEGAP (X丄、（XJ nKSDEGAP (X丄、（X〇 nKSEDGAP (X...

【专利技术属性】
技术研发人员：M曼德勒，P格鲁伯，F马特纳，W施密特，
申请(专利权)人：阿费里斯股份公司，
类型：发明
国别省市：奥地利;AT