高亲和力IgE受体的α链(FceRIa)制造技术

公开了人高亲和力IgE受体的α链(FceRIa)，其中43位氨基酸赖氨酸(K43)交换为选自下组的氨基酸：丙氨酸、丝氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、色氨酸、甘氨酸和缬氨酸，优选丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸或酪氨酸，特别是丙氨酸。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】高亲和力IgE受体的α链(FceRIa)本专利技术涉及高亲和力IgE受体(FceRI)的α链的改良形式和使用这些改良形式的方法。IgE介导的疾病在工业化社会中，变态反应的患病率目前达到人口的30％。变态反应通常可以从温和的形式如变应性鼻结膜炎发展到严重病况，如对生活质量有严格限制的变应性支气管哮喘。因此，广泛的努力一直致力于开发靶向作为变应性免疫应答的关键介质的血浆IgE的新治疗策略。随着临床抗IgE试验出现在多种(变应性)疾病和合并症中，具有IgE依赖性特征的病况的数目正在增加(Holgate2014)。最近，证据已经证明了IgE在炎症和变态反应相关疾病的扩展领域中也发挥作用，包括慢性荨麻疹、特应性皮炎、变应性胃肠病和各种其他(自身)免疫介导的病况。IgE的致病作用的进一步实例和轶事证据来自诸如例如肠易激综合征(Pearson等，2015)或特发性血管性水肿(Shroba等，2015)的病况。因此，IgE及其下游信号转导的核心作用已经公认是比最初设想更宽的疾病范围的最重要的靶向机会。作为严重变应性病况的原型实例，变应性支气管哮喘(allergicasthmabronchiale)受先天免疫系统、T细胞、上皮细胞功能和导致产生IgE的B细胞免疫之间的复杂相互作用控制。自从20世纪60年代认为它是变态反应的关键介质(Bennich和Ishizaka，1968)以来，IgE在其临床和分子方面得到了广泛的研究。该分子的结构和生物化学特征已得到充分了解，并且其通过细胞受体，最值得注意地高亲和力IgE受体(FceRI)的生理作用模式已得到良好表征(Miller等1989；Wurzburg等2002；Sutton等2015)。IgE产生受IgE自身强烈调控(Dullaers等，2012)，提示IgE/FceRI途径是变态反应和IgE依赖性疾病中有吸引力的靶向机会。IgE的一个特殊特征是它对称为FceRI的高亲和性IgE受体，更具体地对α链(除非另有规定命名为FceRIa)具有非常高的亲和力。受体主要在肥大细胞和嗜碱性粒细胞上表达，但也在抗原呈递细胞上表达。四聚体高亲和性IgE受体由一个α、一个β和两个γ链组成，并在由变应原或免疫复合物结合的IgE交联时介导胞内信号传导(Galli&Tsai2012)。因此，通过变应原的交联导致变态反应机制的激活，特别是由肥大细胞脱粒引起的组胺和细胞因子释放。抗IgE疗法和限制自从治疗性抗IgE单克隆抗体奥马珠单抗(Licari等，2015；Incorvaia等，2014)获得临床和市场成功以来，对负担得起的且广泛适用的抗IgE治疗剂的需求日益增加。改进的第二代治疗性抗体(例如单克隆抗体或活性抗IgE疫苗)目前处于临床前和临床开发和评估阶段。的被动抗-IgE抗体治疗的主要缺点是成本高且剂量要求相对较高，前提是需要将多达数百毫克的重组抗体重复注射入患者中。出于多种原因，与高剂量的被动施用的重组生物制剂如存在一般风险：首先，重组分子含有潜在被患者免疫系统识别的外源序列。其次，聚集倾向必须始终与蛋白质的结构和质量相平衡，最后，特别地疗法目前仅限于不超过600IU/ml血浆IgE的严重肾上腺皮质激素抗性哮喘患者。除非响应者外，的最大允许剂量为每两周375mg，这可以造成严重的局限性。其他限制包括过敏风险和需要连续的、良好控制的治疗方案(参见Drugs.comhttp://www.drugs.com/dosage/xolair.html)。商品成本对更广泛使用造成严重限制，例如对于不太严重但最烦琐的变态反应表现。用于例如具有400-500IU/ml血浆IgE的70-80kg患者的典型治疗方案由每两周375mgs.c.的抗IgE剂量组成。由于给药和价格计算限制，该药不能被批准用于IgE水平非常高的患者，也不批准用于重和超重患者。限制使用的其他原因包括在某些病况如食物过敏中不利的风险收益比、缺乏疗效或患者依从性或者仅仅在哮喘患者亚组中的疗效缺乏。根据定义，被动施用的抗IgE抗体如需要固有高的给药以满足功效和药效学要求。重组抗体如的半衰期和药动学处于受限制的窗内，并且在不进行大量的开发工作的情况下不能容易地调整。预期给药方案的修改不会显著促进当前抗IgE疗法的剂量限制或降低财务负担(Lowe等2015)。为了规避或缓解抗IgEmAB的局限性，已经提出了备选的组合IgE降低策略：体外预消减高IgE水平，然后进行被动IgE降低抗IgE治疗。测试多克隆抗IgE抗体作为选择性单采血液成分术吸附剂的可能用途(Sato等1989)，在超过25年前提出了通过单采血液成分术降低IgE的原理。这些早期研究中的主要问题不仅包括从血浆中的IgE耗尽的低效力，而且还包括从吸附剂分子的性质预期的安全性问题，所述吸附剂分子是具有倾向于泄漏到患者的血液循环中的多克隆山羊抗IgE抗体。因此，这种非人吸附剂带有在可能的免疫复合物形成的情况下诱导针对外来表位的免疫应答的风险。类似地，Lebedin及同事使用单特异性兔多克隆抗IgE抗血清和单克隆抗体或其Fab片段作为吸附剂(Lebedin等，1991)。在大多数情况下，由于吸附剂不能充分固定到支持基质或由于蛋白水解切割，主要担心的是较低的血浆消减效力和吸附剂材料(即非人抗体物质)泄漏或脱落到血浆中。最近，Kerzel及同事(Kerzel等，2011)提出，抗IgE疗法前特异性IgE清除允许疗法，即使在通常不会选择治疗的非常高的IgE患者中。作者应用临床设置，其中抗IgE疗法前的血浆去除术(plasmapheresis)可以补充常规抗IgE疗法，特别是当单独的不可行时(Kerzel等，2011；Kasperkiewicz等，2011)。该试点试验指示抗IgE治疗前IgE特异性消减可能对高IgE患者有益。Zink及同事显示了可能使用单采血液成分术和的组合在重度特应性皮炎患者中靶向IgE(Zink等2012[论文]和Zink等2015)。在此种情况下，Lupinek及同事(Lupinek等，2009)提出缺乏FceRI交联活性的单链抗体吸附剂(称为scFv12)作为常规抗体的备选(Lupineket等，US2014/124448A1)。FreseniusMedicalcareDeutschlandGmbH(临床试验编号NCT02096237；ESPIRA研究；Derfler等，2015)最近的概念验证研究，题为“FirstinManTrialofStudyofSafetyandEfficacyoftheNewIgEAdsorber”，已经证明了scFv12可以成功地用作IgE单采血液成分术的吸附剂。产生称为(https://www.fresenius.com/5689_5968.htm)的商业吸附剂柱，并且基于单价高亲和力scFv12吸附剂。作者声称IgE降低86.2％、皮肤试验反应性降低和变应性患者中的变应性症状减少。这项特殊的研究未设计为IgE单采血液成分术和随后抗IgE治疗的联合治疗。重要的是，它可以验证在外来吸附剂蛋白可能泄漏到血液循环(诸如例如常见的抗IgE抗体)的情况下用不带有FceRI交联风险的第一种单价IgE吸附剂的IgE单采血液成分术的原理。与scFv本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人高亲和力IgE受体的α链(FceRIa)，其中43位氨基酸赖氨酸(K43)交换为选自下组的氨基酸：丙氨酸、丝氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、色氨酸、甘氨酸和缬氨酸，优选丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸或酪氨酸，特别是丙氨酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.13 EP 16020009.31.人高亲和力IgE受体的α链(FceRIa)，其中43位氨基酸赖氨酸(K43)交换为选自下组的氨基酸：丙氨酸、丝氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、色氨酸、甘氨酸和缬氨酸，优选丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸或酪氨酸，特别是丙氨酸。2.根据权利要求1的FceRIa，其具有根据SEQIDNo.1的氨基酸序列，其中43位氨基酸赖氨酸(K43)被交换为选自下组的氨基酸：丙氨酸、丝氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、色氨酸、甘氨酸和缬氨酸，优选丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸或酪氨酸，特别是丙氨酸。3.根据权利要求1或2的FceRIa，其中进一步的氨基酸是被交换的，优选选自以下的氨基酸：31位赖氨酸(K31)、40位精氨酸(R40)、41位异亮氨酸(I41)、42位苯丙氨酸(F42)、44位甘氨酸(G44)、45位谷氨酸(E45)、142位赖氨酸(K142)、196位赖氨酸(K196)、199位精氨酸(R199)和201位赖氨酸(K201)，尤其选自下组：31位赖氨酸(K31)、40位精氨酸(R40)、142位赖氨酸(K142)、196位赖氨酸(K196)、199位精氨酸(R199)和第201位赖氨酸(K201)。4.根据权利要求1至3中任一项的FceRIa，其中所述FceRIa固定在固体表面上。5.包含通过两个二硫桥连接的α链、β链和两条γ链的FceRI，其中所述α链是根据权利要求1至4中任一项的经修饰的α链。6.根据权利要求1至4中任一项的FceRIa，用于预防和/或治疗IgE介导的疾病，其中所述FceRIa用于在单采血液成分术中从人体液，特别是人血浆或血清中消减过量的IgE(抗IgE疗法)。7.根据权利要求6使用的FceRIa，其中所述IgE介导的疾病选自下组：变应性疾病，优选季节性、食物、花粉、霉菌孢子、毒植物、药物/药品、昆虫毒液、蝎毒液、或蜘蛛毒液、胶乳或房尘螨变态反应、宠物变态反应、变应性鼻炎和结膜炎、变应性结膜炎、变应性支气管哮喘、非变应性哮喘、丘斯综合征(Churg-StraussSyndrome)、特应性皮炎、鼻息肉病、基穆拉病(Kimura’sdisease)、针对粘合剂、抗微生物剂、香料(fragrance)、染发剂、金属、橡胶组分、外用药物、松香、蜡、抛光剂(polishes)、粘固剂(cement)和皮革的接触性皮炎、慢性鼻窦炎、特应性湿疹、IgE相关自身免疫性疾病，优选慢性(特发性)和自身免疫性荨麻疹、胆碱能性荨麻疹、肥大细胞增多症，特别是皮肤肥大细胞增多症，变应性支气管肺曲霉病、慢性或复发性特发性血管性水肿、间质性膀胱炎、过敏反应，特别是特发性和运动诱发的过敏反应，免疫疗法、嗜曙红细胞相关疾病(eosinophil-associateddisease)，优选嗜酸细胞性哮喘(eosinophilicasthma)，嗜酸细胞性胃肠炎(eosinophilicgastroenteritis)，嗜酸粒细胞性中耳炎(eosinophilicotitismedia)和嗜酸粒细胞性食管炎(eosinophilicoesophagitis)；淋巴瘤、...

【专利技术属性】
技术研发人员：O斯姆茨卡，M莫斯塔吉尔，
申请(专利权)人：阿费里斯股份公司，
类型：发明
国别省市：奥地利,AT