一种具有清除展青霉素作用的消化乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种具有清除展青霉素作用的消化乳杆菌及其应用，属于微生物技术领域。本发明专利技术所提供的消化乳杆菌(Lactobacillus alimentris)具有耐酸性，能够快速脱除水溶液中的展青霉素，将菌体数为1×1010CFU/mL的消化乳杆菌与浓度为1000μg/L的展青霉素共培养，共培养4h，对展青霉素的清除率可以达到80％以上，共培养8h后，对其清除率可达到90％以上。同时可显著降低苹果汁和发霉苹果渣中的展青霉素。所述的消化乳杆菌用于去除食品或饲料中的展青霉素，具有非常广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种具有清除展青霉素作用的消化乳杆菌及其应用，属于微生物

技术介绍
展青霉素又称棒曲霉素，是青霉属、曲霉属、丝衣霉属等霉菌代谢产生的一种有毒的真菌代谢产物。它对人及动物具有广泛而强烈的毒性作用。急性毒性表现为抽搐、痉挛、皮下组织水肿、肺肠充血、肠炎、无尿直至死亡；慢性毒性可导致胃溃疡，并具有抑制免疫、致畸性以及潜在的致癌性等。展青霉素能溶于水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和氯仿，微溶于乙醚、苯，不溶于石油醚，在酸性条件下化学性质稳定。展青霉素是一种世界范围内的污染物，食品和饲料生产中展青霉素的污染相当普遍，广泛存在于苹果、葡萄、橘子、菠萝、玉米、奶酪和动物饲料等产品中，特别是在水果及以水果为加工原料的产品中的展青霉素污染最为严重。水果中展青霉素主要是由扩展青霉(Penicillium expansum)产生的，这种病菌不仅会引起果实腐烂，还会向果实组织中分泌大量的展青霉素。在果汁加工产业中，如果腐烂的果实混入原材料中，那么产出的果汁就会有不同程度的展青霉素的残留，给消费者(特别是儿童)的身体健康带来严重的危害。基于展青霉素对人体健康的潜在危害，世界上很多国家都对果汁产品中展青霉素的最大限量做了规定，EU、USFDA规定果汁产品中的展青霉素的最大限量为50μg/kg，婴幼儿产品中最大限量为10μg/kg，WHO建议每人每天展青霉素摄入量不超过0.4μg/kg体重。目前主要通过吸附、微波处理等物理手段或添加添加剂、臭氧处理等化学手段进行去除展青霉素，但物理方法效果不是十分理想，而且很容易使展青霉素聚集到吸附材料中，对环境构成了潜在威胁。而化学方法存在成本高、安全性及去除机理尚不明确等问题，还未见在生产实际中得到应用。鉴于传统的方法存在多种问题，亟需研发新型的展青霉素去除手段。目前通过微生物清除展青霉素的效率普遍不高，且局限于清除水溶液或培养液中的展青霉素，很少应用到食品和饲料中。本专利技术旨在筛选出能高效清除展青霉素的微生物并将其用于清除食品和饲料中的展青霉素。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种消化乳杆菌(Lactobacillus alimentris)，该菌株已于2014年09月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.9663。所述消化乳杆菌具有以下特性：(1)菌落特征：在MRS培养基上生长良好，形成乳白色、半透明、圆形菌落，菌落表面湿润。细菌形态呈中长杆状，两端椭圆，革兰氏染色反应呈阳性，无运动性，不产芽抱。(2)生长特性：该菌株的最低生长温度为15℃，最高生长温度为40℃，该菌株以30-37℃的生长温度为佳，最高和最低初始生长pH为9.0和3.0，最适生长初始pH为6.0；该消化乳杆菌的延迟期相对较短，4h左右开始进入对数生长期12h就达到稳定期。(3)具有耐酸性，在pH3.0-9.0环境条件下生长良好，在pH 2.5环境下存活良好。(4)在含1000μg/L展青霉素的水溶液中，能够将展青霉素浓度降到11.1μg/L。(5)在含1000μg/L展青霉素的培养基中，能够对展青霉素的清除率达90％以上。(6)在含966.95μg/L展青霉素的苹果汁中，能够将展青霉素的含量从966.95μg/L降到54.41μg/L，清除率达94.37％。本专利技术还提供一种制备用于清除展青霉素的消化乳杆菌CGMCC No.9663的生物制剂，是将消化乳杆菌CGMCC No.9663活化培养后离心获得消化乳杆菌菌体，洗涤后收集菌体得到消化乳杆菌生物制剂。或者，将收集得到的菌体再用保护剂重悬达到浓度1010CFU/mL，将悬浮液培养一段时间后进行冷冻干燥得到消化乳杆菌菌粉生物制剂。所述的保护剂可以为脱脂奶粉、海藻糖或蔗糖等。所述消化乳杆菌CGMCC No.9663菌具有以下用途：(1)制成清除展青霉素的生物制剂；(2)用来清除水溶液、果汁及食品和饲料中的展青霉素。本专利技术的消化乳杆菌CGMCC No.9663具有耐酸性，对展青霉素有良好的耐受能力，能够耐受起始浓度为10000μg/L的展青霉素溶液。并且对展青霉素有较强的清除作用，能够显著降低水溶液、苹果汁及发霉苹果渣中展青霉素的含量。所述的消化乳杆菌CGMCC No.9663用于去除食品或饲料中的展青霉素，具有非常广泛的应用前景。生物材料保藏消化乳杆菌(Lactobacillus alimentris)，已于2014年09月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.9663。附图说明图1为展青霉素对消化乳杆菌CGMCC No.9663生长影响分析。图2为不同时间消化乳杆菌CGMCC No.9663对展青霉素的清除效率图。图3为添加消化乳杆菌CGMCC No.9663后苹果汁中展青霉素含量的变化图。图4为添加消化乳杆菌CGMCC No.9663的发霉苹果渣与对照组中展青霉素的含量图。具体实施方式下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1展青霉素标准品母液的配制所述展青霉素为展青霉素标准品，购于北京泰乐祺科技有限公司，使用时配制成100mg/L的母液。配置方法为：准确称取5mg的展青霉素标准品，溶于50mL乙酸乙酯中，充分混匀溶解，并使用0.22μm微孔滤膜进行过滤除菌后贮存于-20℃。实施例2制备用于清除展青霉素的消化乳杆菌CGMCC No.9663的生物制剂将消化乳杆菌CGMCC No.9663以2％接种量接种于MRS培养基，在温度为30～37℃，摇床转速为150r/min-200r/min的摇床中培养18-24h后，经5000r/min，10min离心获得消化乳杆菌菌体，将离心后的菌体用0.85％生理盐水清洗三次后离心得到消化乳杆菌CGMCC No.9663生物制剂。或者，将菌体再用保护剂重悬达到浓度1010CFU/mL。所述的保护剂为100g/L脱脂奶粉、100g/L海藻糖和150g/L蔗糖。接着，让该悬浮液在温度37℃的条件下预培养60min，再在-20℃预冻2-4h，最后进行冷冻干燥得到消化乳杆菌CGMCC No.9663菌粉生物制剂。实施例3展青霉素对消化乳杆菌CGMCC No.9663生长的影响1、含不同浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种消化乳杆菌(Lactobacillus alimentris)，该菌株已于2014年09月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.9663。

【技术特征摘要】
1.一种消化乳杆菌(Lactobacillus alimentris)，该菌株已于2014年09月15日保藏于中国
微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号
中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.9663。
2.一种应用权利要求1所述消化乳杆菌CGMCC No.9663制备用于清除展青霉素的生物
制剂的方法，是将所述消化乳杆菌活化培养后离心获得消化乳杆菌菌体，洗涤后收集菌体得
到消化乳杆菌生物制剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，进一步将收集得到的菌体用保护剂重悬达
到浓度1010CFU/mL，将悬浮液培养一段时间后进行冷冻干...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈卫，田丰伟，郭敏，龚雪，翟齐啸，王刚，赵建新，张灏，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32