一种白耙齿菌及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种白耙齿菌及其用途，其形态特征：在PDA培养基上，25℃培养一周，菌丝白色，菌落平坦，绳状，边缘羊毛状，两周后菌丝变为象牙黄，有水果香味。显微镜观察发现菌丝容易染色，生殖菌丝直径2-4um，菌丝有隔膜，且多分支，菌丝系统为一体系至二体系，生殖菌丝具简单分隔，显微镜观察，菌丝着色深，均匀，且分支多，呈网状，有隔膜，且所有菌丝在Melzer试剂中无变色反应，在棉蓝试剂中厚壁菌丝有中度嗜蓝反应,菌丝均匀，分支多，呈网状，粗壮；而在CA培养基上，菌丝稀疏，白色，质地呈绳状，无味。本发明专利技术在酱香型白酒酿造中产酶、皂苷和挥发性物质。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体来说涉及一种白耙齿菌，同时涉及该白耙齿菌在产酶、皂苷等物质方面的用途。
技术介绍
酱香型白酒是中国三大香型白酒之一，由于其独特的风味和保健作用，受到众人的喜爱。其中白酒中具有保健功能的药用成分也是白酒的研究热点，目前，认为萜类物质有重要作用（徐岩，2013）。在白酒酿造中，液化酶、糖化酶和蛋白酶活力对于出酒率和白酒品质有重要作用，液化酶和糖化酶降解淀粉使其糖化，糖化是发酵的基础，直接影响出酒率，并与白酒中还原糖和杂醇油含量有关（王立钊，2006）。蛋白酶能降解蛋白质促进糖化作用和微生物的生长（马加军，2000），且降解产物在多种酶的作用下生成酯及其它香味物质（唐胜球，2005；魏炜，1997）。在研究白耙齿菌时，发现白耙齿菌降解木材，能够产生一些降解木材的酶（张伟，2009），而对于是否产液化酶、糖化酶和蛋白酶未见报道。除此之外，对其发酵产多糖和蛋白含量的测定方法也有研究（袁文彬，2012）。酱香型大曲微生物研究中还未见分离到白耙齿菌，对于皂苷和挥发性物质的研究未见报道，并在白酒酿造工艺中也未见报道，这为酱香型白酒的功能性开发提供了新的论点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株在酱香型白酒酿造中产酶、皂苷和挥发性物质的白耙齿菌。本专利技术的另一目的在于提供该白耙齿菌在产酶、皂苷等物质方面的用途一种白耙齿菌，其形态特征：在PDA培养基上，25℃培养一周，菌丝白色，菌落平坦，绳状，边缘羊毛状，两周后菌丝变为象牙黄，有水果香味。显微镜观察发现菌丝容易染色，生殖菌丝直径2-4um，菌丝有隔膜，且多分支，菌丝系统为一体系至二体系，生殖菌丝具简单分隔，显微镜观察，菌丝着色深，均匀，且分支多，呈网状，有隔膜，且所有菌丝在Melzer试剂中无变色反应，在棉蓝试剂中厚壁菌丝有中度嗜蓝反应,菌丝均匀，分支多，呈网状，粗壮；而在CA培养基上，菌丝稀疏，白色，质地呈绳状，无味。该菌种已于2014年4月28保藏到中国典型培养物保藏中心（地址：中国 武汉 武汉大学），保藏号：CCTCC NO：M2014166，名称：白耙齿菌（Irpex lacteus）FBKL3.0021。本专利技术的一种白耙齿菌FBKL3.0021（Irpex lacteus）的分离，包括以下步骤：（一）对白耙齿菌FBKL3.0021（Irpex lacteus）的分离：称取10g粉碎酱香型大曲放入盛有90mL生理盐水三角瓶中，再加玻璃珠，室温震荡30min。取1mL样品悬液进行10倍梯度稀释，分别为10-2、10-3，用浇注平板法分离培养，在25℃条件下培养4d，对不同的菌株划线纯化，对纯化菌株斜面保藏。（二）培养基：斜面培养基：马铃薯琼脂糖培养基（PDA）麸皮培养基：将麸皮和蒸馏以1：1混合，用玻璃棒搅匀，121℃灭菌20min。小麦培养基：将粉碎小麦和蒸馏以1：1混合，用玻璃棒搅匀，121℃灭菌20min。高粱小麦培养基：高粱:小麦质量比为1：1，小麦全部粉碎，高粱整粒:碎粒质量比为3：1，搅拌均匀，取30g，加30mL睡，搅拌均匀，121℃灭菌20min，固体种子培养基：将麸皮和蒸馏以1：1混合，用玻璃棒搅匀，121℃灭菌20min。液体种子培养基：马铃薯葡萄糖液体培养基鉴定培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），马铃薯液体培养基。（三）菌种的保种和传代：（1）液体石蜡保藏法：将白耙齿菌接种到PDA斜面培养基上，在25℃培养箱中培养4d后，在斜面上加一层无菌无水液体石蜡，石蜡高出斜面1cm处，写上标签，置于4℃保存，保存时间为3-5年。（2）液氮超低温保藏法：将白耙齿菌接种到PDA平板上，在25℃培养箱中培养4d后，轻轻刮取平板上的菌丝体使成菌悬液，加入甘油终浓度为15%，吸取0.5-0.8mL悬液注入安瓿管中，熔封管口，写上标签，置液氮冷冻器中保存。（3）超低温冰箱保藏法：将白耙齿菌接种到PDA平板上，在25℃培养箱中培养一周后，在超净工作台中利用解剖刀轻轻分割平板吗，使成为0.5cm2的方形菌种块，取5支1.8mL的无菌冻存管，在超净工作台中加入0.5mL-1.0mL的马铃薯液体培养基，之后加入甘油使其终浓度为15%，分别放进3-8块方形菌种块，使液体培养基全部掩盖菌种块。盖紧瓶盖，写上标签，置于-70℃ 超低温冰箱中保存。（四）菌种的生态特征：该菌接种在PDA培养基上，25℃培养一周，菌丝白色，菌落平坦，绳状，边缘羊毛状，两周后菌丝变为象牙黄，有水果香味。显微镜观察发现菌丝容易染色，生殖菌丝直径2-4um，菌丝有隔膜，且多分支，菌丝系统为一体系至二体系，生殖菌丝具简单分隔，显微镜观察，菌丝着色深，均匀，且分支多，呈网状，有隔膜，且所有菌丝在Melzer试剂中无变色反应，在棉蓝试剂中厚壁菌丝有中度嗜蓝反应,菌丝均匀，分支多，呈网状，粗壮；而在CA培养基上，菌丝稀疏，白色，质地呈绳状，无味。（五）分子生物学鉴定：将菌种接种到PDA培养基上活化2-3次，将菌种再接种到100 mL马铃薯液体培养基中，25℃摇瓶培养3d，用滤纸过滤，将菌丝水分用滤纸吸干用液氮研磨，用植物基因组DNA提取试剂盒提取DNA，进行PCR扩增，PCR采用引物为ITS4:是28 sRNA基因序列（5'TCCTCCGCTTATTGATATGC3'），ITS5是18 sRNA基因序列（5'GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG3'），经PCR扩增后用1%琼脂糖凝胶电泳进行DNA电泳检测，最后将序列进行测序。白耙齿菌（Irpex lacteus）FBKL3.0021的内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）的核酸序列((包括18SDNA和28SDNA的一部分以及5.SSDNA和三者之间的两段间隔序列)长度为628个碱基，通过美国生物技术信息中心（National Center for Biorechnology Information,NCBI）进行序列同源性分析，将白耙齿菌（Irpex lacteus）序列通过Blast比对，结果为白耙齿菌，结合形态学特征，根据MycoBank数据库鉴定该菌株为担子菌属中的白耙齿菌。（六）菌种的培养特性（1）培养温度15℃～40℃，最适培养温度28℃～32℃；（2）培养pH为3～8，最适生长PH为6～7。该菌接种在PDA培养基上，菌丝白色，菌落平坦，绳状，菌丝有隔膜，且多分支，菌丝在Melzer试剂中无变色反应，在棉蓝试剂中厚壁菌丝有中度嗜蓝反应,菌丝均匀，分支多，呈网状，粗壮。该菌株可以与酿酒酵母等酿造类菌种混合发酵使用，并有增香，高酶活，提高发酵制品功能因子的作用。具体实施方式本专利技术的白耙齿菌分离方法：称取10g粉碎酱香型大曲放入盛有90mL生理盐水三角瓶中，再加适量玻璃珠，室温震荡30min。取1mL样品悬液进行10倍梯度稀释，分别为10-2、10-3，后用浇注平板法分离培养，在2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白耙齿菌（Irpex lacteus）FBKL3.0021，其特征在于所述菌种的保藏号为CCTCC NO：M2014166，名称：白耙齿菌（Irpex lacteus）FBKL3.0021。

【技术特征摘要】
1.一种白耙齿菌（Irpex lacteus）FBKL3.0021，其特征在于所述菌种的保藏号为CCTCC NO：M2014166，名称：...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓丹，邱树毅，班世栋，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52