HPLC同时测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量的方法技术

技术编号:11085838 阅读:106 留言:0更新日期:2015-02-26 12:34
本发明专利技术涉及一种HPLC同时测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量的方法。具体技术方案是:分别制备标准品溶液和样品溶液,用HPLC法进行梯度洗脱,同时测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量。本发明专利技术方法简便、可靠、迅速,灵敏度高,重现性好,可以将诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸与干扰物质很好的分离,并同时测定其含量,对诺尼果汁功效性成分的研究具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
HPLC同时测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷 酸含量的方法
本专利技术涉及一种HPLC同时测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量 的检测方法。
技术介绍
诺尼(Noni),学名海巴戟天(iforiflt/a ci(ri/b/ia Lina ),2010 年 5 月,中国卫生 部将诺尼果浆正式批准为新资源食品。诺尼果汁有广泛的营养和药用价值,具有抗肿瘤、抗 氧化、增强免疫力、降血脂和保护心血管等功能,对多种疾病有预防和治疗作用。 车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸是环烯醚萜类物质,是诺尼果汁中重要的活性成 分,具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗畸变等活性,与人体健康密切相关,逐渐成为研究热点。 但目前尚无利用HPLC测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸的方法,限制了诺 尼果汁功效性成分的研究。因此,亟需建立一种同时检测诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰 车叶草苷酸的高效液相色谱法。
技术实现思路
为了解决上述技术问题,本专利技术提供了一种使用HPLC同时测定诺尼果汁中车叶 草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量的方法,为诺尼果汁的功效研究奠定了基础。实现本专利技术 的具体技术方案是:用HPLC同时测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量,其 特征是: 本专利技术中混合标准品溶液的制备方法为: 称取车叶草苷酸对照品5 mg,去乙酰车叶草苷酸对照品25 mg,置于10 mL容量瓶中, 加水稀释至刻度,摇匀,即得混合对照品储备液,测定前经〇. 22 y m微孔滤膜过滤。 本专利技术中样品溶液的制备方法为: 取20 mL诺尼果汁10000 r/m离心5 min,吸取上清液10 mL于100 mL容量瓶中,力口 水稀释至刻度,摇匀,测定前经0. 22 微孔滤膜过滤。 本专利技术的色谱条件为: 色谱柱为 shim-pack VP-0DS-C18 (250 _X4. 6 mm,5 ilm) ;VWD-3000紫外检测器;柱 温为35 °C ;流动相A为0. 1 %磷酸水溶液,流动相B为乙腈;梯度洗脱条件为0-10 min,4 % B ;10-22,15 % B ;22-40 min,4 % B ;流速为 0? 5 mL / min ;检测波长为 237 nm ;在上述 色谱条件下,取对照品溶液和标准品溶液分别进样,记录色谱图。 本专利技术中所说的诺尼果汁为纯诺尼果汁或含诺尼成分的其它产品。 本专利技术采用HPLC法,梯度洗脱,同时测得诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草 苷酸含量。结果:车叶草苷酸在浓度为5-50 y g/mL范围内具有良好线性关系,平均回收率 为99. 02 %,RSD为1.58 %;去乙酰车叶草苷酸在浓度为25-250 iig/mL范围内具有良好线 性关系,平均回收率为102. 15 %,RSD为2. 40 %。本专利技术方法简便、可靠、迅速,灵敏度高, 重现性好,为诺尼果汁的功效研究提供科学依据。 四、【附图说明】 图1为本专利技术中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸混合标准品的色谱图。 图2为本专利技术中诺尼果汁样品溶液的色谱图。 五、【具体实施方式】 下面结合具体实例对本专利技术作进一步说明,但本专利技术并不限于以下实施例。 实施例1 : 1、 仪器与材料 1.1仪器 Thermo UltiMate 3000型高效液相色谱仪(VWD-3000紫外检测器,Chromeleon 7色谱 工作站,Thermo Fisher 公司),Shim-pack VP-0DS-C18 (250 mmX4.6 mm,5 U m)色谱柱; minispin 离心机(eppendorf 公司)。 1. 2 材料 对照品车叶草苷酸购自成都普菲德生物技术有限公司,去乙酰车叶草苷酸购自北京盛 世康普化工技术研究院,乙腈、磷酸均为色谱纯。西沙诺尼果汁由海南诺尼生物工程开发有 限公司生产,产品批次为 20120911、20130618、20131206 和 20140122。 方法与结果 2. 1色谱条件的选择 检测器:Thermo VWD-3000;检测波长:237nm;色谱柱:Shim-pack VP-ODS (250X4.6 mm,5 ii m);柱温:35 °C ;流动相A为0. 1 %磷酸溶液,流动相B为乙腈,进行梯度洗脱,梯 度洗脱程序如表1所示,流速:〇. 5 mL / min,检测波长为237 nm,柱温最优为35°C。 表1梯度洗脱程序本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种采用HPLC法检测车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量的方法,其特征是:按照如下步骤对诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸同时进行定性和定量分析:(1) 混合标准品溶液制备称取车叶草苷酸对照品5 mg,去乙酰车叶草苷酸对照品25 mg,置于10 mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得混合对照品储备液;(2) 样品制备取20 mL诺尼果汁10000 r/m离心5 min,吸取上清液 10 mL于100 mL 容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀;(3) 高效液相色谱分离检测条件采用C18反相色谱柱,以流动相A 磷酸水溶液;流动相B乙腈,采用梯度洗脱,采用紫外检测器检测,柱温为30 ‑ 40℃,流速为0.2‑1.2 mL / min;(4) 样品定性和定量分析采用系列混合标准品溶液按照步骤(1)进行配制,按步骤(3)色谱条件进样;以峰面积y对质量浓度 x进行线性回归,得到车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸标准品的回归方程;每个样品按步骤(2)进行前处理后,按步骤(3)色谱条件分别进样分析,样品峰与标准品保留时间比对定性,样品峰面积代入相对应的标准曲线回归方程定量。

【技术特征摘要】
1. 一种采用HPLC法检测车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量的方法,其特征是:按照 如下步骤对诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸同时进行定性和定量分析: (1) 混合标准品溶液制备 称取车叶草苷酸对照品5 mg,去乙酰车叶草苷酸对照品25 mg,置于10 mL容量瓶中, 加水稀释至刻度,摇匀,即得混合对照品储备液; (2) 样品制备 取20 mL诺尼果汁10000 r/m离心5 min,吸取上清液10 mL于100 mL容量瓶中,力口 水稀释至刻度,摇匀; (3) 高效液相色谱分离检测条件 采用C18反相色谱柱,以流动相A磷酸水溶液;流动相B乙腈,采用梯度洗脱,采用紫 外检测器检测,柱温为30 - 40°C,流速为0. 2-1. 2 mL / min ; (4) 样品定性和定量分析 采用系列混合标准品溶液按照步骤(1)进行配制,按步骤(3)色谱条件进样;以峰面积 y对质量浓度X进行线性回归,得到车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸标...

【专利技术属性】
技术研发人员:程池陈建国张露李金霞洪启恩谭望桥
申请(专利权)人:中国食品发酵工业研究院海南诺尼生物工程开发有限公司
类型:发明
国别省市:北京;11

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