本发明专利技术提供一种HPLC波长切换技术同时测定诺尼果汁中多种酚酸含量的方法，该方法包括利用高效液相色谱波长切换技术，对诺尼果汁中的酚酸物质进行定性和定量分析：选用C18色谱柱，流动相为甲醇-冰醋酸水溶液，梯度洗脱，检测器为二极管阵列检测器，通过波长切换完成同时对多种酚酸成分的分离与测定，以标准品峰面积外标法定量。本发明专利技术特点在于运用波长切换技术去除干扰物质的影响、同时测定出诺尼果汁中6种酚酸的含量，测定组分在30min内可达到较好分离，准确度高、重现性好。本发明专利技术能有效分离、准确测定诺尼果汁中多种酚酸物质，对诺尼果汁功效性成分的研究和产品质量的评价具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
一种HPLC波长切换技术同时测定诺尼果汁中多种酚酸含 量的方法
本专利技术涉及一种HPLC波长切换技术同时测定诺尼果汁中多种酚酸含量的检测方 法。
技术介绍
诺尼（Noni)是一种热带常绿多年生阔叶灌木或小乔木，又名海巴戟，海巴戟天， 萝蒸。学名ci(ri/b/ia Lina ,为茜草科巴戟天属植物，原产于一些太平洋岛ill与、 东南亚和澳大利亚等地，现引种于我国海南省。诺尼果有丰富的营养和药用价值，被人们称 为神奇果富含大量活性成分如多糖、酚类、黄酮类和环烯醚萜类等，具有抗肿瘤、抗氧化、 增强免疫力、降血脂和保护心血管等功能，对多种疾病有预防和治疗作用。 酚酸是植物多酚类物质的一类，具有独特的保健生物活性，具有抗氧化、清除自由 基，抗肿瘤、增强免疫力、保护心血管等作用，与人体健康密切相关，逐渐成为研究热点。诺 尼果汁含有丰富的多酚类活性物质，其中酚酸种类较多，目前，尚无对诺尼果汁中多种酚酸 物质定性和定量的研究。因此需要建立一种测定诺尼果汁中酚酸类物质的检测方法，为诺 尼果汁功效性成分的研究提供依据。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种HPLC波长切换技术同时测定诺尼果汁中多种酚酸含量 的检测方法，对诺尼果汁中酚酸类物质没食子酸、龙胆酸、P-羟基苯甲酸、绿原酸、咖啡酸、 阿魏酸同时进行测定，为诺尼果汁功效性成分的研究和产品质量的评价提供可信依据。 为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种HPLC波长切换技术同时测定诺尼果 汁中多种酚酸含量的检测方法，采用高效液相色谱、二极管阵列检测器波长切换技术同时 对诺尼果汁中6种酚酸进行定性和定量分析，其特征在于： 本专利技术所述检测6种酚酸，分别为：没食子酸、龙胆酸、P-羟基苯甲酸、绿原酸、咖啡酸、 阿魏酸。 本专利技术中标准品的制备方法为： 分别称取标准品没食子酸50mg、龙胆酸100mg、P-羟基苯甲酸500mg、绿原酸200mg、咖 啡酸50mg、阿魏酸30mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，即得混合标 准品储备液，于冰箱4°C避光保存。使用前，根据实验需要将此标准储备液用50%甲醇稀释 10-100倍，配制成系列标准混合溶液，测定前经0. 22 y m微孔滤膜过滤。 本专利技术中样品的制备方法为： 取15 mL诺尼果汁，每次用45mL乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并有机相，浓缩后，残渣 溶于I mL50 %甲醇中，测定前样品经0.22 微孔滤膜过滤，用于进样分析。 本专利技术的色谱条件为： 色谱柱为 Thermo Accucore XL C18 (250 mmX4.6 mm，4 U m);柱温为 30 °C ;流动相 A 0. 95 %冰醋酸溶液；流动相B甲醇；梯度洗脱条件为0-11 min，5 % B ; ll-17min，20% B ; 17-22min，30 % B ;22-50min，5% B ;流速为 0? 8min/mL ;检测器为 Thermo DAD-3000 ;检测波 长为280nm和330nm (龙胆酸、咖啡酸和阿魏酸波长切换为330nm处检测，没食子酸、P-羟 基苯甲酸、绿原酸在280nm处检测)。在上述色谱条件下，取标准品和样品制备溶液分别进 样，记录色谱图。 本专利技术中所述的诺尼果汁为纯诺尼果汁或含诺尼成分的其它产品。 本专利技术采用高效液相色谱法，通过梯度洗脱，检测过程波长切换，同时测定诺尼果 汁中6种酚酸的含量。结果6种酚酸组分的质量浓度与峰面积具有良好的线性关系；相关 系数均大于0.991，且6种酚酸组分在30 min内可得到较好分离。平均回收率为91. 18%? 101.08 %，相对标准偏差为0.73%?2. 17 %。本法快速、简便、准确、高效，可用于同时测定 诺尼果汁中没食子酸、龙胆酸、P-羟基苯甲酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸6种酚酸的含量，为 诺尼果汁功效性成分的研究和产品质量的评价提供科学、可信依据。 本专利技术由于采用以上技术方案，具有以下优点： 1. 采用波长切换技术进行检测，用二极管阵列检测器综合考虑不同酚酸组分最强吸 收且杂质干扰较小的波长进行波长切换检测。可在一张色谱图中较好的对测定组分进行分 离；去除干扰杂质，有利于组分含量准确计算，具有方便、快捷、高效、方法稳定、重现性好的 优点； 2. 流动相的选择：本专利技术在流动相中添加少量冰醋酸作为酸性调节剂，使分离效果和 峰形得到改善。考察了 〇.5%-9%不同浓度冰醋酸溶液对6种酚酸的分离效果，最终流动相 选择采用A液（0. 95%冰醋酸水溶液）和B液（甲醇)，6种酚酸组分能较好分离，且各组分之 间分离度均大于1. 5 ; 3. 样品的制备方法：实验采用不同萃取溶剂对样品中酚酸进行提取，根据回收率最终 确定采用乙酸乙酯提取，平均回收率可达91. 18%?101.08 %; 4. 梯度洗脱条件：本专利技术进行了多种梯度洗脱条件研究，最终确定以下洗脱程序： 0 ?llmin，B 为 5% ;11 ?17min，B 为 20% ;17 ?22min，B 为 30% ;22 ?50min，B 为 5%。在 此梯度条件下，没食子酸、龙胆酸、P-羟基苯甲酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸均能得到较好的 分离、峰形良好、保留时间稳定。 【附图说明】 图1为本专利技术没食子酸、龙胆酸、P-羟基苯甲酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸6种酚酸混 和标准品色谱图。其中1.没食子酸；2.龙胆酸；3. P-羟基苯甲酸；4.绿原酸；5.咖啡酸； 6.阿魏酸。 图2为本专利技术诺尼果汁样品的色谱图。其中1.没食子酸；2.龙胆酸；3. P-羟基 苯甲酸；4.绿原酸；5.咖啡酸；6.阿魏酸。 【具体实施方式】 下面结合实施案例对本专利技术进行进一步说明，但本专利技术并不限于以下实施案例。 实施例1 1.材料 I. 1仪器 Thermo UltiMate 3000型高效液相色谱仪（DAD-3000二极管阵列检测器，Chromeleon 7 色谱工作站，Thermo Fisher 公司）；Thermo Accucore XL C18 (250 mmX 4. 6 mm, 4 u m) 色谱柱；旋转蒸发仪IKA-RVlO (德国艾卡公司）。 1.2 试剂 标准品没食子酸、龙胆酸、P-羟基苯甲酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸购自北京百灵威科技 有限公司（纯度> 98%)。甲醇、冰醋酸为色谱纯，乙酸乙酯为分析纯，实验所用水均为超纯 水。 1.3 样品 诺尼果汁由海南诺尼生物工程开发有限公司生产，产品批次为20121228、20130105、 20130603、20140313、20140325 和 20140326。 2?方法与结果 2. 1混合标准品溶液制备 分别称取标准品没食子酸50mg、龙胆酸100mg、P-羟基苯甲酸500mg、绿原酸200mg、咖 啡酸50mg、阿魏酸30mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，即得混合标 准品储备液，于冰箱4°C避光保存。使用前，根据实验需要将此标准储备液用50%甲醇稀释 10-100倍，配制成系列标准混合溶液，测定前经0. 22 y m微孔滤膜过滤。 2.2样品的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种HPLC波长切换技术测定诺尼果汁中多种酚酸含量的方法，其特征在于：按照下述步骤同时对诺尼果汁中没食子酸、龙胆酸、P‑羟基苯甲酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸6种酚酸进行定性和定量分析： (1) 混合标准溶液制备分别精确称取标准品没食子酸50mg、龙胆酸100mg、P‑羟基苯甲酸500mg、绿原酸200mg、咖啡酸50mg、阿魏酸30mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，为混合标准品储备液，于冰箱4℃避光保存；使用前，根据实验需要将此标准储备液用50%甲醇稀释10‑100倍，配制成系列混合标准溶液, 测定前经0.22μm微孔滤膜过滤；(2) 样品制备取适量诺尼果汁，经有机溶剂多次萃取，合并有机相，浓缩，残渣溶于50 %甲醇中，测定前样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用于进样分析；(3) 高效液相色谱分离检测条件采用C18反相色谱柱，以流动相A 冰醋酸溶液；流动相B 甲醇，采用梯度洗脱，二极管阵列检测器波长切换技术测定，检测温度25‑35℃，流速0.8‑1.0 mL/min；(4) 样品定性和定量分析采用系列标准混合溶液按照步骤(1)进行配制，按步骤(3)色谱条件进样；以峰面积y对质量浓度 x绘制标准曲线，得到6种酚酸标准品的回归方程；每个样品按步骤（2）进行前处理后，按步骤(3)色谱条件分别进样分析，样品峰与标准品峰保留时间比对定性，样品峰面积代入相对应的标准曲线回归方程定量。...
【技术特征摘要】
1. 一种HPLC波长切换技术测定诺尼果汁中多种酚酸含量的方法，其特征在于：按照下 述步骤同时对诺尼果汁中没食子酸、龙胆酸、P-羟基苯甲酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸6种酚 酸进行定性和定量分析： (1)混合标准溶液制备 分别精确称取标准品没食子酸50mg、龙胆酸lOOmg、P-轻基苯甲酸500mg、绿原酸 200mg、咖啡酸50mg、阿魏酸30mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇勻，为混 合标准品储备液，于冰箱4°C避光保存；使用前，根据实验需要将此标准储备液用50%甲醇 稀释10-100倍，配制成系列混合标准溶液，测定前经0. 22 μ m微孔滤膜过滤； (2) 样品制备 取适量诺尼果汁，经有机溶剂多次萃取，合并有机相，浓缩，残渣溶于50 %甲醇中，测定 前样品经0. 22 μ m微孔滤膜过滤，用于进样分析； (3) 高效液相色谱分离检测条件 采用C18反相色谱柱，以流动相A冰醋酸溶液；流动相B甲醇，采用梯度洗脱，二极管 阵列检测器波长切换技术测定，检测温度25-35°C，流速0. 8-1. 0 mL/min ; (4) 样品定性和定量分析 采用系列标准混合溶液按照步骤（1)进行配制，按步骤（3)色谱条件进样；以峰面积y 对质量浓度X绘制标准曲线，得到6种酚酸标准品的回归方程；每个样品按步骤（2)进行前 处理后，按步骤（3)色...
【专利技术属性】
技术研发人员：程池，陈建国，张露，李金霞，洪启恩，谭望桥，
申请(专利权)人：中国食品发酵工业研究院，海南诺尼生物工程开发有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。