本发明专利技术公开了一种用于白血病细胞检测的磁珠捕获探针及其应用。本发明专利技术所提供的用于白血病细胞检测的磁珠捕获探针，由磁珠和固定于所述磁珠上的捕获探针组成；所述捕获探针为序列表中序列1所示的单链DNA分子。实验证明，利用本发明专利技术所提供的磁珠捕获探针可用于白血病细胞的检测及白血病病情的监测。具体而言，本发明专利技术具有以下优点：1、本发明专利技术所提供的是一种直观的、可用于定量分析的白血病细胞检测方法。检测结果不受检测者经验的影响，客观性强。2、本发明专利技术可以作为白血病的快速诊断手段，在半个小时之内能够得到结果。3、本发明专利技术是使用简单、价格低廉、结果可靠的检测方法。
【技术实现步骤摘要】
-种用于检测白血病细胞的磁珠捕获探针及其应用
本专利技术属于生物材料的临床医学应用领域，涉及一种用于检测白血病细胞的磁珠 捕获探针及其应用。
技术介绍
白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病。克隆性白血病细胞因为增殖失控、分 化障碍、凋亡受阻等机制在骨髓和其他造血组织中大量增殖累积，并浸润其他组织和器官， 同时正常造血受抑制。临床可见不同程度的贫血、出血、感染发热以及肝、脾、淋巴结肿大和 骨骼疼痛。 白血病是我国的高发肿瘤之一，其分型诊断需要联合形态学、免疫表型、细胞遗传 学和分子生物学等各种手段。由于细胞形态的多样性，单纯依靠形态学检查很难准确分型； 也未发现白血病细胞特异性单克隆抗体，白血病作为一种高度异质性疾病，抗原表达有时 较紊乱，跨系列表达较为常见，部分白血病相关抗原在治疗过程中或复发时会丢失或发生 系列转换；利用细胞遗传学（染色体核型和显带）与分子生物学的检查方法，使诊断的客观 性和准确率明显提高，但只有40%的急性淋巴细胞白血病（ALL)有染色体的异常，而且各 种临床亚型并没有对应特异性染色体异常，另外、这些检查耗时、成本高，使之普及性有一 定难度。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种用于白血病细胞检测的磁珠捕获探针。 本专利技术所提供的用于白血病细胞检测的磁珠捕获探针，具体由磁珠和固定于所述 磁珠上的捕获探针组成；所述捕获探针为序列表中序列1所示的单链DNA分子。 本专利技术的另一个目的是提供一种所述磁珠捕获探针的制备方法。 本专利技术所提供的所述磁珠捕获探针的制备方法，具体可包括如下步骤：将经生物 素标记的所述捕获探针与经链霉亲和素标记的所述磁珠共同孵育，通过生物素-链霉亲和 素反应，使所述捕获探针固定于所述磁珠，从而获得所述磁珠捕获探针。 在本专利技术中，所述生物素具体标记于所述捕获探针的3'端。 所述方法中，进行所述孵育时，经生物素标记的所述捕获探针与经链霉亲和素标 记的所述磁珠的配比为75pmol:lmg。 进一步，所述孵育具体为20-30°C(如25°C)80-150rpm(如IOOrpm)震荡孵育 10-30(如15min)。所述孵育的液体环境为结合缓冲液；所述结合缓冲液的溶剂为水，溶 质及浓度如下：NaCl8g/L，KCl0· 2g/L，CaCl2O. 14g/L，Na2HPO4 ·H2O0·lg/L，MgCl2 · 6H20 I. 42g/L，NaHCO3O. 35g/L，KH2PO4O. 2g/L，葡萄糖 4. 5g/L。 toon] 更加具体的，在本专利技术的一个实施例中，所述磁珠捕获探针的制备方法包括如下 步骤：分别取浓度为500nM(以所述捕获探针的量计）的经生物素标记的所述捕获探针的溶 液（溶剂为所述结合缓冲液）和浓度为l〇mg/ml(以所述磁珠的量计）的经链霉亲和素标 记的所述磁珠溶液（溶剂为所述结合缓冲液），按照体积比3:2的配比混合，20-30°C(如 25°C)80?150rpm(如IOOrpm)震荡孵育10-30min(如15min)，即获得所述磁珠捕获探针。 含有所述磁珠捕获探针的试剂盒也属于本专利技术的保护范围。 所述磁珠捕获探针，或所述试剂盒，在如下任一中的应用也属于本专利技术的保护范 围： (a)制备用于白血病细胞检测的试剂盒； (b)制备用于白血病病情监测的试剂盒。 在本专利技术中，所述白血病细胞检测为从待测者的外周全血、骨髓细胞、白细胞或淋 巴细胞中检测白血病细胞。 在所述应用中，进行所述白血病病情监测时，采用的待测样本可为待测者的外周 全血、骨髓细胞、白细胞或淋巴细胞。 所述待测者可为白血病患者、健康的正常人、或患有其他疾病（如地中海贫血、骨 髓异常增多症、或缺铁性贫血）的非白血病患者。 在本专利技术中，所述白血病具体为急性淋巴细胞白血病（ALL)或急性粒-单核细胞 白血病（AML-M4)。其中，ATLL具体可如急性T淋巴细胞白血病（T-ALL)、急性B淋巴细胞 白血病（B-ALL)或慢粒急淋变。 实验证明，利用本专利技术所提供的磁珠捕获探针可用于白血病细胞的检测及白血病 病情的监测。具体而言，本专利技术具有以下优点： 1、本专利技术所提供的是一种直观的、可用于定量分析的白血病细胞检测方法。检测 结果不受检测者经验的影响，客观性强。 2、本专利技术可以作为白血病的快速诊断手段，在半个小时之内能够得到结果。 3、本专利技术是使用简单、价格低廉、结果可靠的检测方法。 【附图说明】 图1为磁珠捕获探针从DIPY染色的健康正常人和ALL病人外周全血中捕获细胞 荧光显微镜成像图。A、B分别为健康正常人外周全血捕获前光学显微镜和荧光显微镜观察 结果；C、D分别为健康正常人外周全血捕获后光学显微镜和荧光显微镜观察结果。E、F分 别为T-ALL病人外周全血捕获前光学显微镜和荧光显微镜观察结果；G、H分别为T-ALL病 人外周全血捕获后光学显微镜和荧光显微镜观察结果。 图2为磁珠捕获探针从健康正常人和ALL病人外周全血细胞中捕获白血病细胞光 学显微镜成像图。A、B分别为健康正常人全血与磁珠捕获探针孵育25分钟后洗涤前和洗 漆后；C、D分别为ALL患者全血与磁珠捕获探针孵育25分钟后洗漆前和洗漆后。 图3为磁珠捕获探针从非白血病患者和白血病患者骨髓细胞中捕获白细胞光学 显微镜成像图。A、B分别为非白血病患者骨髓与磁珠捕获探针孵育25分钟后洗涤前和洗 涤后；C、D分别为白血病患者骨髓与磁珠捕获探针孵育25分钟后洗涤前和洗涤后。 图4为磁珠捕获探针从非白血病和ALL白细胞中捕获细胞光学显微镜成像图。A、 B分别为非白血病患者骨髓白细胞与磁珠捕获探针孵育25分钟后洗涤前和洗涤后；C、D分 别为ALL患者骨髓白细胞与磁珠捕获探针孵育25分钟后洗涤前和洗涤后。 图5为ALL患者骨髓白细胞中捕获细胞百分比与原始幼稚细胞百分比相关性分析 图。 图6为通过对ALL患者的骨髓涂片与白细胞捕获后的涂片结果图。A、B分别为急性 粒-单核细胞白血病（AML-M4)患者骨髓涂片与白细胞捕获后的涂片。C、D分别为B-A11-L2 患者骨髓涂片与白细胞捕获后的涂片。 图7为磁珠捕获探针从健康正常人和ALL患者淋巴细胞中捕获白血病细胞光学显 微镜成像图。A、B分别为健康正常人淋巴细胞捕获前、后；C、D分别为ALL患者淋巴细胞捕 获前、后。 图8为磁珠捕获探针对T-ALL病人病情监测光学显微镜成像图。A为病人淋巴细 胞；B为治疗前；C为治疗3天后；D为治疗4天后；E为治疗后第5天；F为治疗后第13天。 图9为T-ALL患者化疗前后外周血淋巴细胞中捕获细胞百分比和外周血淋巴细胞 计数比较图。 【具体实施方式】 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 实施例1、用于白血病细胞检测的磁珠捕获探针的制备 -、经生物素标记的捕获探针的制备 所述生物素标记的捕获探针为生物素标记的单链DNA分子，为中国大连宝生物公 司产品，该探针所用单链DNA的序列如下： 5 '-ATCTAACTGCT本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于白血病细胞检测的磁珠捕获探针，由磁珠和固定于所述磁珠上的捕获探针组成；所述捕获探针为序列表中序列1所示的单链DNA分子。
【技术特征摘要】
1. 一种用于白血病细胞检测的磁珠捕获探针，由磁珠和固定于所述磁珠上的捕获探针 组成；所述捕获探针为序列表中序列1所示的单链DNA分子。2. 权利要求1所述的磁珠捕获探针的制备方法，包括如下步骤：将经生物素标记的所 述捕获探针与经链霉亲和素标记的所述磁珠共同孵育，获得所述磁珠捕获探针。3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于：进行所述孵育时，经生物素标记的所述捕 获探针与经链霉亲和素标记的所述磁珠的配比为75pmol :lmg。4. 根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述孵育为20-30°C 80-150rpm震荡 孵育 10-30min。5. 根据权利要求2-4中任一所述的方法，其特征在于：所述孵育的液体环境为结合缓 冲液；所述结合缓冲液的溶剂为水，溶质及浓度如下：NaCl 8g/L，KC1 0. 2g/L...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵永祥，李霞，卢小玲，黄勇，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：广西;45
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