一种混菌固态发酵谷朊粉制备小麦活性肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种以市售谷朊粉为原料制备小麦活性肽的方法，该方法采用枯草芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌的复配发酵剂，进行混合固态发酵；再经加水提取、离心分离、膜精制后，将得到的滤液经喷雾干燥而成。本发明专利技术克服了现有技术的不足，制备方法操作简单，活性肽得率高，成本低，反应温和，有利于环境友好保护，并充分发挥微生物去除肽类苦味的作用，是一种适合工业化生产小麦活性肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种以市售谷朊粉为原料制备小麦活性肽的方法，该方法采用枯草芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌的复配发酵剂，进行混合固态发酵；再经加水提取、离心分离、膜精制后，将得到的滤液经喷雾干燥而成。本专利技术克服了现有技术的不足，制备方法操作简单，活性肽得率高，成本低，反应温和，有利于环境友好保护，并充分发挥微生物去除肽类苦味的作用，是一种适合工业化生产小麦活性肽的方法。【专利说明】
本专利技术涉及一种植物蛋白肽的制备方法，具体涉及一种采用两种微生物混合培 养，固态发酵谷朊粉制备小麦活性肽的生产方法。
技术介绍
肽是蛋白质的一种特殊存在形式，一般为蛋白质降解过程中的中间产物。现代营 养研究成果表明，蛋白质被动物所摄入后，主要以肽的形式被吸收利用，并可在体内发挥提 高免疫、抗疲劳、降血压和降血脂等多种生物功能。美国、日本等国家以活性肽为研究对象 已开发出低抗原食品、婴儿食品、运动食品、促钙吸收食品、降压食品、醒酒食品等一系列产 品，取得了良好的社会和经济效益。我国拥有相对丰富的蛋白质资源，因此利用不同蛋白资 源开发活性肽是目前食品和饲料工业研究的重点。 谷朊粉是一类从小麦中提取的优质的植物蛋白原料，其蛋白质含量高 (75% -85% )且含有丰富的必需氨基酸，在食品和饲料工业中具有广泛应用。研究表明， 谷朊粉经过水解后可产生具有抗氧化、调节血糖、镇痛等多种功能活性的小麦肽，并大大提 高其蛋白体外消化率；体内试验表明，小麦活性肽可显著提高饲喂实验小鼠的免疫功能。因 此，谷朊粉水解成小麦肽后，具备更优的生物活性和广阔的市场开发应用前景。 目前，由谷朊粉出发制备活性肽的主要方法为酶解法。如中国专利技术专利（CN 102326664B)公开了"一种谷朊粉肽的提取方法"，主要包括将蒸煮过的谷朊粉加水混合后， 分别加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶并调控pH稳定进行酶解反应，再经过分离、浓缩和干燥 制成小麦肽产品。但由于液体酶解法生产小麦活性肽的苦味明显，口感较差，因而严重影响 了产品品质。同时，由于酶解反应使用的酶量大，且多为进口酶，加大了制备小麦肽的成 本，减少了企业的经济效益。此外，为了保证酶解反应的效果，往往需要实时调节pH、温度等 反应条件，进一步加深了酶解工艺的复杂性，不利于小麦活性肽产业化的推广。因此，目前 急需要一种新的生产工艺来实现有效消除小麦活性肽苦味的同时，降低其生产成本。
技术实现思路
本专利技术目的是为了克服现有技术存在的不足，提供一种工艺简单、无需酸碱调节， 成本低的小麦活性肽制备方法，该制备方法所获得的小麦活性肽苦味可达到有效去除。 本专利技术的上述目的通过以下技术方案实现： -种混菌固态发酵谷朊粉制备小麦活性肽的方法，其特征在于：该方法包括：以 市售谷朊粉为原料，直接加入含有枯草芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌的复配发酵剂，进行固态发 酵；再经提取分离、精制、干燥而成，其中，枯草芽孢杆菌为保藏在中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心保藏号为CGMCC No. 1. 4255的菌株，嗜酸乳杆菌为保藏在中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 1. 3342的菌株。 优选的，制备所述的枯草芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌复配发酵剂的方法包括：1)、配制 发酵培养液，成分为葡萄糖50g，酵母粉15g，蛋白胨20g，无菌水lOOOmL，pH为7. 0 ;2)、将从 斜面经过活化、扩大培养后的枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌菌种分别用上述发酵培养的菌体 液稀释为1-5X 1〇8个/mL的悬浊液，并按照等比例混合即得复配发酵剂。较优选的，悬浊 液中枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌的菌体浓度为1X 1〇8个/mL。 优选的，所述的固态发酵的步骤包括：按照谷朊粉与复配发酵剂固液质量比 1:1-2:1加入发酵剂，发酵温度调节为28-42°C，发酵时间为24-72小时。 优选的，所述的提取步骤包括：按谷朊粉与蒸馏水的比1:10-1:20加入蒸馏水， 每次提取的时间为10-30分钟，提取次数为1-3次。 较优选的，在经过水提取过程后，还包括分离步骤，其中分离步骤包括：离心转速 为3000-6000转/分钟以去除残渣。 优选的，在经过分离步骤后，采用超滤膜过滤分离小麦活性肽粗提液并分离成不 同分子量的小麦活性肽。 ，其特征在于：以市售谷朊粉为 原料，直接加入含有芽孢杆菌与乳酸菌的复配发酵剂，进行固态发酵；再经提取分离、精制、 干燥而成。 优选的，混菌固态发酵谷朊粉制备小麦活性肽的方法，其特征在于：其工艺步骤包 括：1)、制备芽孢杆菌与乳酸菌复配发酵剂；2)、固态发酵：向谷朊粉中加入步骤1)所述芽 孢杆菌与乳酸菌的复配发酵剂，进行固态发酵；3)、加水提取步骤2)所述固态发酵后的培 养基，离心去除残渣，超滤膜过滤分离得到小麦活性肽的粗提液；4)精制：将步骤3)所述制 得的小麦肽粗提液采用凝胶色谱方法进行脱盐、脱色处理；5)将步骤4)所述精制后的小麦 肽组分喷雾干燥即得生物活性小麦肽。优选的，在步骤1)中所述的制备芽孢杆菌与乳酸菌 复配发酵剂的工序为：1)配制发酵培养液，成分为葡萄糖50g，酵母粉15g，蛋白胨20g，无菌 水lOOOmL，pH为7. 0 ;2)将从斜面经过活化、扩大培养后的枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌菌种 分别用上述发酵培养液稀释为1-5 X 108个/mL的悬浊液，并按照等比例混合即得复配发酵 剂。 优选的，在步骤2)中所述的固态发酵步骤中，具体方法为：按照谷朊粉与复配发 酵剂固液质量比1:1-2:1加入发酵剂，发酵温度调节为28-42°C，发酵时间为24-72小时。 更优选的，在步骤3)中所述的加水提取步骤中，按固液质量比1:10-1:20加入蒸 馏水，每次提取时间为10-30分钟，提取次数为1-3次。更优选的，步骤3)中所述的离心 分离去除残渣的方法中，离心转速为3000-6000转/分钟。优选的，在步骤3)中所述的超 滤膜过滤分离是将小麦活性肽粗提液采用不同截留分子量的超滤膜（3kDa，5kDa和10kDa) 进行分级分离，得到三种不同分子量大小的小麦活性肽滤液。 优选的，在步骤4)中，所述的凝胶层析精制过程采用的填料为葡聚糖凝胶G-15或 G-25。 优选的，在步骤5)中，所述的喷雾干燥在以下条件下进行：进口温度130-180°C， 干燥器内温度90-1KTC，出口温度65-90°C。 本专利技术的有益效果： 本专利技术与现有技术相比，具有以下显著优点： 1)本专利技术制备方法操作简单，直接以市售谷朊粉为原料直接进行固态发酵生产小 麦肽，无需对原料进行蒸煮或酸碱处理，有效降低成本，因此适合工业化生产并有效避开了 酸碱处理所带来的环境污染和安全隐患； 2)利用芽孢杆菌和乳酸菌混合发酵产生的蛋白酶和多种代谢产物，大大简化了谷 朊粉降解过程，节省了昂贵生物酶制剂的使用，有效降低了工业化生产成本； 3)本专利技术采用不同截留量的超滤膜对小麦肽进行分级分离，可有针对性的根据实 际需要获得不同品质的小麦活性肽产品，大大优化了产品分级过程； 4)经感官苦味评定检测，本专利技术方法有效降低了所制备小麦活性肽的苦味，同时 所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种混菌固态发酵谷朊粉制备小麦活性肽的方法，其特征在于：该方法包括：以市售谷朊粉为原料，直接加入含有枯草芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌的复配发酵剂，进行固态发酵；再经提取分离、精制、干燥而成，其中，枯草芽孢杆菌为保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.1.4255的菌株，嗜酸乳杆菌为保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.1.3342的菌株。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：汤江武，孙宏，吴逸飞，姚晓红，王新，柳永，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33