【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
小麦条锈病菌分子检测方法，其特征在于，包括下列步骤：１）小麦条锈菌检测的特殊引物设计根据小麦条锈菌ＤＮＡ序列的特性，设计了对条锈菌具特异扩增作用的一对引物：５’－ＧＴＣＴＧＴＡＡＧＡＴＧＴＴＡＧＡＴＧＣ和５’－ＡＴＧＣＴＧＧＣＡＧＴＧＴＧＧＴＴＧ２）小麦条锈菌检测体系的建立①提取小麦叶片基因组ＤＮＡ；②ＰＣＲ扩增，２５μＬ反应体系分别在ＰＣＲ薄壁管中依次放入：１０×Ｂｕｆｆｅｒ２．５μＬ、２５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣＬ２２．０μＬ、２．５ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ１．５μＬ、上游引物及下游引物各２０～４０ｎｇ、小麦叶片基因组ＤＮＡ１０～４０ｎｇ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶１．０Ｕ，最后用无菌去离子水补齐至２５μＬ；离心１０ｓｅｃ，将ＰＣＲ薄壁管放入ＰＣＲ仪中扩增；扩增条件为：第一循环９４℃预变性３ｍｉｎ；然后９４℃变性５０ｓｅｃ，５４℃退火９０ｓｅｃ７２℃延伸２ｍｉｎ，共３５个循环；最后一循环，７２℃延伸１０ｍｉｎ补齐末端，扩增完成；③ＰＣＲ产物在１．５％琼脂糖凝胶上用１×ＴＡＥ缓冲液中电泳分析，电压为４－５Ｖ／ｃｍ，电泳结束后用凝胶成像系统分析；④４００ｂｐ处出现特异条带，说明小麦叶片带菌。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：康振生，王小杰，郑文明，黄丽丽，赵杰，韩青梅，魏国荣，高小宁，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]
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