纳米免疫磁球、其制备方法及用途技术

本发明专利技术提供一种纳米免疫磁球、其制备方法及用途，纳米免疫磁球的平均粒径为100-1000nm。其制备方法包括：纳米磁球的活化；纳米磁球的偶联：将用于特异性捕获和分离抗原的抗体经稀释后加入离心管中，抗体和活化后的纳米磁球发生偶联反应，使抗体偶联到活化后的纳米磁球表面，得到纳米免疫磁球粗品；其中，偶联反应的反应条件为：偶联温度为4～37℃，偶联时间为2～12小时；抗体的浓度为10～200μg/mL；保存。纳米免疫磁球的粒径远小于常规的免疫磁球，是一种分散效果好、稳定性强的免疫磁球，从而能够方便、快捷、高效的分离出样品中的沙门氏菌。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供一种，纳米免疫磁球的平均粒径为100-1000nm。其制备方法包括：纳米磁球的活化；纳米磁球的偶联：将用于特异性捕获和分离抗原的抗体经稀释后加入离心管中，抗体和活化后的纳米磁球发生偶联反应，使抗体偶联到活化后的纳米磁球表面，得到纳米免疫磁球粗品；其中，偶联反应的反应条件为：偶联温度为4～37℃，偶联时间为2～12小时；抗体的浓度为10～200μg/mL；保存。纳米免疫磁球的粒径远小于常规的免疫磁球，是一种分散效果好、稳定性强的免疫磁球，从而能够方便、快捷、高效的分离出样品中的沙门氏菌。【专利说明】
本专利技术属于生物
，具体涉及一种。
技术介绍
沙门氏菌是一种革兰氏阴性短杆菌，不形成芽胞，是引起人类食物中毒的主要病原菌之一，临床上可表现为胃肠炎、肠热病、菌血症综合症或局灶性疾病。据统计，在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。我国内陆地区也以沙门氏菌为首位。 目前，我国绝大多数检测机构对沙门氏菌检测的常规方法为分离培养方法，必须进行增菌培养以提高检出率，因而具有检测周期长、程序复杂、所需试剂繁多、检出率较低等缺点，从而远远不能满足现代检测要求。 免疫磁球是一种新型的功能材料，免疫磁球表面偶联有抗体，在反应体系中，通过抗体与反应介质中特异性抗原结合形成抗原一抗体复合物，此复合物在磁场的作用下定向移动，从而达到分离或检测抗原的目的。通过免疫磁球分离抗原，具有样品分离速度快、特异性强、操作简单、不需要昂贵的仪器设备等特点，而且不影响被分离细胞的生物学性状和功能，目前已在医学和生物学的许多方面发挥了重要作用。 但是，现有的沙门氏菌免疫磁球分离技术中，所使用的免疫磁球产品粒径较大，一般都在I μ m以上，因此，在分离微生物过程中，具有免疫磁球溶液稳定性差、容易沉淀聚集、不利于对分离目标物的有效捕获、有可能对被分离的微生物造成损伤、对微生物的检测灵敏度低等缺陷。
技术实现思路
针对现有技术存在的缺陷，本专利技术提供一种，纳米免疫磁球的粒径远小于常规的免疫磁球，是一种分散效果好、稳定性强的免疫磁球，从而能够方便、快捷、高效的分离出样品中的沙门氏菌。 本专利技术采用的技术方案如下: 本专利技术第一目的为提供一种纳米免疫磁球,所述纳米免疫磁球的平均粒径为100-1000nm。 优选的，所述纳米免疫磁球的平均粒径为180_450nm。 本专利技术第二目的为提供一种纳米免疫磁球的制备方法，包括以下步骤: SI,纳米磁球的活化: 取未活化的纳米磁球原料到离心管中，用磷酸盐吐温缓冲液PBST洗涤后，磁分离移除上清液； 以所述PBST为溶剂，分别配制I?10mg/mL的EDC溶液和I?10mg/mL的NHS溶液；向离心管中加入配制的EDC溶液和NHS溶液，在振荡器上振荡活化后，将离心管放置到磁分离架上，待磁球完全被吸附后，磁分离移除上清液；其中，EDC溶液和NHS溶液所使用的溶剂PBST为:10mM磷酸根浓度、pH为6.0?6.4、含有0.05%聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯Tween-20的缓冲液。1mM含义为10mmol/L。 向离心管中加入所述PBST，用所述PBST洗涤纳米磁球后，磁分离移除上清液；使用PBS重悬磁球，得到活化后的纳米磁球； S2，纳米磁球的偶联: 将用于特异性捕获和分离抗原的抗体经稀释后加入离心管中，抗体和活化后的纳米磁球发生偶联反应，使抗体偶联到活化后的纳米磁球表面，得到纳米免疫磁球粗品；其中，偶联反应的反应条件为:偶联温度为4?37°C，偶联时间为2?12小时；抗体的浓度为 10?200 μ g/mL ； S3，将经S2处理后的离心管放置到磁分离架上，待磁球完全被吸附后，磁分离移除上清液；使用所述PBST洗涤后，加入质量分数为I?5% BSA封闭磁球；其中，封闭磁球的温度为4?37°C ;封闭磁球的时间为I?12小时； S4，将经S3处理后的离心管放置到磁分离架上，磁分离移除上清液后PBS洗涤； S5，保存: 将经S4处理后的纳米免疫磁球保存在含有I?10%的甘油、0.1?I %酪蛋白、10?20%血清和0.1 %叠氮钠的溶液中。 优选的，SI中，磷酸盐吐温缓冲液PBST为10mM、pH为6.0?6.4、含有0.05%Tween-20的缓冲液。 优选的，SI中，所述EDC溶液浓度为I?10mg/ml ;所述NHS溶液浓度为I?1mg/ml ο 优选的，SI中，所述在振荡器上振荡活化的条件为:22?25°C条件下震荡活化30?60分钟。 优选的，SI中，所述PBS的pH = 7.0?7.4。 本专利技术第三目的为提供纳米免疫磁球的用途，所述的纳米免疫磁球用于富集沙门氏国。 实验结果证明，本专利技术制备得到的纳米免疫磁球对沙门氏菌具有特异性和灵敏性。 本专利技术的有益效果如下: 本专利技术提供一种，纳米免疫磁球的粒径远小于常规的免疫磁球，是一种分散效果好、稳定性强的免疫磁球，从而能够方便、快捷、高效的分离出样品中的沙门氏菌。 【具体实施方式】 纳米免疫磁球制备实施例一 制备方法: SI,纳米磁球的活化: 取未活化的纳米磁球原料到离心管中，用30 μ L、pH为6.0、浓度为10mM、含有0.05% Tween-20的磷酸盐吐温缓冲液PBST洗涤3次后，磁分离移除上清液；其中，本专利技术中，Tween-20含义为吐温20。 以PBST为溶剂，分别配制lmg/mL的EDC溶液15 μ L、以及，10mg/mL的NHS溶液15 μ L ;向离心管中加入配制的EDC溶液和NHS溶液，22°C条件下在振荡器上震荡活化60分钟，将离心管放置到磁分离架上，待磁球完全被吸附后，磁分离移除上清液； 向离心管中加入PBST，用30 μ L PBST洗涤纳米磁球3次后，磁分离移除上清液；使用PH = 7.4的PBS重悬磁球，得到活化后的纳米磁球； S2，纳米磁球的偶联: 将用于特异性捕获和分离抗原的抗体经稀释后加入离心管中，抗体和活化后的纳米磁球发生偶联反应，使抗体偶联到活化后的纳米磁球表面，得到纳米免疫磁球粗品；其中，偶联反应的反应条件为:偶联温度为37°C,偶联时间为12小时；抗体的浓度为200 μ g/mL ； S3，将经S2处理后的离心管放置到磁分离架上，待磁球完全被吸附后，磁分离移除上清液；使用PBST洗涤3次后，加入300μ L5%的BSA封闭磁球；其中，封闭磁球的温度为37°C ;封闭磁球的时间为12小时；其中，BSA为牛血清白蛋白。 S4，将经S3处理后的离心管放置到磁分离架上，PBS洗涤后磁分离移除上清液； S5，保存: 将经S4处理后的纳米免疫磁球保存在含有10%的甘油、I %酪蛋白、10%血清和0.1 %叠氮钠的溶液中。 纳米免疫磁球制备实施例二 制备方法: SI,纳米磁球的活化: 取未活化的纳米磁球原料到离心管中，用100 μ L、pH为6.4、浓度为10mM、含有0.05% Tween-20的磷酸盐吐温缓冲液PBST洗涤3次后，磁分离移除上清液； 以PBST 为溶剂，分别配制 10mg/mL、pH = 6.0 的 EDC 溶液 15 μ L、以及，l本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纳米免疫磁球，其特征在于，所述纳米免疫磁球的平均粒径为100‑1000nm。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邓奕，杜美红，许迪莘，
申请(专利权)人：北京市科学器材公司，
类型：发明
国别省市：北京;11