本发明专利技术是药用盾叶薯蓣组培一步成苗批量化生产的方法，包括(1)基础苗获得；(2)一步成苗批量化生产：将带芽愈伤组织块分成小块，接在MS大量+B5微量+MS有机+MS铁盐+6-BA0.2～2.0mg/L+KT0.2～0.8mg/L+多效唑0.5～5.0mg/L+矮壮素2.0～4.0mg/L+IAA0.2～0.8mg/L+NAA0.2～0.8mg/L的琼脂固体培养基上进行增殖和生根；(3)试管苗移栽；(4)大田块茎繁育。本发明专利技术通过组织培养技术短期内扩大了优选单株群体，大大缩短了盾叶薯蓣优良种系的选育时间，能以最快的速度将研究成果转化为现实生产力，充分显示了现代生物技术在薯蓣产业化生长中的高效益应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药用盾叶薯蓣的组培
，具体涉及一种药用盾叶薯蓣组培苗批一步成苗量化生产的方法。
技术介绍
薯蓣属植物(D1scorea)具有重要的药用价值，其根茎皂甙元是合成避孕药和甾体激素类药物的重要起始原料，在医药工业中占有重要地位。在《中国珍稀濒危保护植物名录》中被列为国家级二级渐危物种而受到保护。因盾叶薯蓣根状茎的薯蓣皂甙元含量最高而成为薯蓣属植物产业化开发的首选原料。盾叶薯蓣主要靠人工种植，长期以来由于只种不选，导致品种种性退化，药材质量和产量下降，化学成本不稳定。采用植物细胞工程技术和方法进行盾叶薯蓣大规模组培快繁、规范化种植对于促进制药业的发展有着重要作用。 本专利技术为解决盾叶薯蓣品种退化问题、提高药材产量和质量，采用组织培养技术，加快其优良品种的生产应用推广工作。本专利技术主要采用组织培养技术扩大优选单株群体，并对盾叶薯蓣组织培养生产工艺、培养方法与条件进行整体优化和改进，主要针对如何缩短培养时间、提高培养效率、降低培养成本，以期创造出盾叶薯蓣一步成苗的最佳方法，建立一套高效低耗量的培养体系，以最快的速度将研究成果转化为现实生产力。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高效低耗量的盾叶薯蓣组织培养方法，该方法配方效果佳，培养周期短，易操作，培养程序简单，培养效率高，稳定性好、生产成本低，是一种在最短的时间内获得大量试管苗的快速繁殖方法。而且本专利技术方法不污染环境，非常适合工业化生产，已达到产业化水平。 本专利技术的目的是通过以下方式实现的: ，包括以下步骤: (1)基础苗获得:选择优良药用盾叶薯蓣植株的茎段和顶芽为外植体，外植体消毒后在MS大量+B5微量+MS有机+2 XMS铁盐+6-BA2.0~4.0mg/L+KT0.2~0.8mg/L+多效唑 2.0 ~8.0mg/L+ 矮壮素 2.0 ~5.0mg/L+IAA0.2 ~0.8mg/L+NAA0.2 ~0.8mg/L 琼脂固体培养基上，同步诱导出带芽的愈伤组织； (2) 一步成苗批量化生产:将步骤(1)获得的带芽愈伤组织块分成小块，接在MS大量+B5微量+MS有机+MS铁盐+6-BA0.2~2.0mg/L+KT0.2~0.8mg/L+多效唑0.5~ 5.0mg/L+矮壮素 2.0 ~4.0mg/L+IAA0.2 ~0.8mg/L+NAA0.2 ~0.8mg/L 的琼脂固体培养基上进行增殖和生根； (3)试管苗移栽:试管苗出瓶移栽前，将根叶俱全的丛生幼苗分成单株，出瓶的幼苗先用500~800倍的多菌灵或代森锰锌浸泡10~15分钟，随后将幼苗移至有顶玻璃的移栽容器中，在温度为20~30°C，湿度80~90%的条件下生长，25~30d长出新叶时，既已成活； (4)大田块茎繁育:将移栽成活的幼苗，在自然条件炼苗3~5d后，移栽至大田进行块茎繁育。 步骤(1)中将外植体剪成含有I节I芽的规格，首先用洗衣粉清洗干净，在无菌操作台上用无菌水洗5~7次，用70%酒精浸润30秒-1分钟，再放入0.1 %的升汞溶液中灭菌12~18分钟，无菌水冲洗5~6次，备用。 步骤(1)和(2)的培养温度为24°C ±2，1000~20001x弱光环境中，每天10~12小时光照培养。 步骤(1)诱导出的芽继代培养时，去老茎留新芽，新芽茎段或顶芽再分成I节I芽转入相同的诱导培养基中，每隔25~30d继代一次。 步骤⑵是将愈伤组织块按0.5~IcmX0.5~Icm的规格分成小块。 步骤⑵培养时每隔25~30d继代一次。 步骤(1)优选使用的培养基:MS大量+B5微量+MS有机+2XMS#&+6-BA2.0mg/L+KT0.4mg/L+ 多效唑 4.0mg/L+ 矮壮素 2.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.4mg/L。或者优选使用培养基:MS 大量 +B5 微量 +MS 有机 +2XMS 铁盐 +6-BA3.0mg/L+KT0.4mg/L+ 多效唑 4.0mg/L+ 矮壮素 2.0mg/L+IAA0.4mg/L+NAA0.4mg/L ； 步骤⑵优选使用的培养基:MS大量+B5微量+MS有机+MS铁盐+6-BA0.5mg/L+KT0.2mg/L+ 多效唑 2.0mg/L+ 矮壮素 2.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.2mg/L。或者优选使用培养基:MS大量+B5微量 +MS有机+MS铁盐+6-BA0.8mg/L+KT0.5mg/L+多效唑2.0mg/L+矮壮素 3.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.2mg/L。 本专利技术与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于: 1、针对现有技术存在的不足之处，本专利技术通过组织培养技术短期内扩大了优选单株群体，大大缩短了盾叶薯蓣优良种系的选育时间，能以最快的速度将研究成果转化为现实生产力，充分显示了现代生物技术在薯蓣产业化生长中的高效益应用。 2、根据前人的研究，盾叶薯蓣的组织培养主要采用外植体一愈伤组织(诱导培养)一分化幼苗(分化培养)一生根(生根培养)等多个培养程序完成，至少需要90d。本专利技术将初代与继代、增殖与生根，多个培养程序简化为一步完成。 3、大规模工厂化生产时，本专利技术根据生产需要设计培养方法，首先同步诱导愈伤和芽，抑制根的形成，提高增殖倍数，加快基础苗的繁殖；批量化生产阶段同步诱导愈伤组织、芽、不定根，增殖与生根简化为一步完成，即“一步成苗”方法，形成完整植株只需30天左右，节约了 25~30天的生根时间。 4、常规技术生产100万株盾叶薯蓣组培苗，根据每瓶继代苗形成15株用于生根的组培苗，需生产14万瓶组培苗，其中包括7万瓶继代苗，7万瓶生根苗。本专利技术技术生产100万株盾叶薯蓣组培苗，仅需生产5.5万瓶继代生根苗。本专利技术不仅减少了无菌操作步骤，而且节约了培养室空间，简化了健康种苗生产程序，降低了生产成本，提高了生产效率。 5、前人研究证明，盾叶薯蓣的人工驯化引种和离体培养快速繁殖的研究取得了较大的进展，但无菌短枝难生根、试管苗的移栽成活率很低，这两大核心问题成为盾叶薯蓣组培快繁技术扩大化生产的瓶颈。本专利技术不仅创造出一步成苗方法，而且移栽成活率高(达95%以上)；栽培当年(8个月左右)，获30g/株左右的优质种茎。 【附图说明】 图1为盾叶薯蓣茎段和顶芽诱导的无菌苗生长情况； 图2为盾叶薯蓣初代培养同步诱导愈伤和芽生长情况； 图3为盾叶薯蓣继代培养同步诱导愈伤、芽和根生长情况； 图4为移栽成活的盾叶薯蓣试管苗生长情况； 图5为栽培当年(8个月左右)盾叶薯蓣试管苗的单株种茎生长情况。 【具体实施方式】 以下结合实施例旨在进一步说明本专利技术，而非限制本专利技术。 实施例1、组织培养快速繁殖盾叶薯蓣 一、培养基配制和灭菌 初代培养基用于基础苗繁殖:MS大量+B5微量+MS有机+2 X MS铁盐+6-BA2.0mg/L+KT0.4mg/L+ 多效唑(PP333) 4.0mg/L+ 矮壮素(CCC) 2.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.4mg/L ； 继代培养基用于一步成苗批量化生产:MS大量+B5微量+MS有机+MS铁盐+6-BA0.5mg/L+ KT0.2mg/L+ 多效唑(PP333) 本文档来自技高网...
【技术保护点】
药用盾叶薯蓣组培一步成苗批量化生产的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)基础苗获得：选择优良药用盾叶薯蓣植株的茎段和顶芽为外植体，外植体消毒后在MS大量+B5微量+MS有机+2×MS铁盐+6‑BA2.0～4.0mg/L+KT0.2～0.8mg/L+多效唑2.0～8.0mg/L+矮壮素2.0～5.0mg/L+IAA0.2～0.8mg/L+NAA0.2～0.8mg/L琼脂固体培养基上，同步诱导出带芽的愈伤组织；(2)一步成苗批量化生产：将步骤(1)获得的带芽愈伤组织块分成小块，接在MS大量+B5微量+MS有机+MS铁盐+6‑BA0.2～2.0mg/L+KT0.2～0.8mg/L+多效唑0.5～5.0mg/L+矮壮素2.0～4.0mg/L+IAA0.2～0.8mg/L+NAA0.2～0.8mg/L的琼脂固体培养基上进行增殖和生根；(3)试管苗移栽：试管苗出瓶移栽前，将根叶俱全的丛生幼苗分成单株，出瓶的幼苗先用500～800倍的多菌灵或代森锰锌浸泡10～15分钟，随后将幼苗移至有顶玻璃的移栽容器中，在温度为20～30℃，湿度80～90％的条件下生长，25～30d长出新叶时，既已成活；(4)大田块茎繁育：将移栽成活的幼苗，在自然条件炼苗3～5d后，移栽至大田进行块茎繁育。...
【技术特征摘要】
1.药用盾叶薯蓣组培一步成苗批量化生产的方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)基础苗获得:选择优良药用盾叶薯蓣植株的茎段和顶芽为外植体，外植体消毒后在MS大量+B5微量+MS有机+2 XMS铁盐+6-BA2.0~4.0mg/L+KT0.2~0.8mg/L+多效唑2.0 ~8.0mg/L+ 矮壮素 2.0 ~5.0mg/L+IAA0.2 ~0.8mg/L+NAA0.2 ~0.8mg/L 琼脂固体培养基上，同步诱导出带芽的愈伤组织； (2)—步成苗批量化生产:将步骤(1)获得的带芽愈伤组织块分成小块，接在MS大量+B5 微量 +MS 有机 +MS 铁盐 +6-BA0.2 ~2.0mg/L+KT0.2 ~0.8mg/L+ 多效唑 0.5 ~5.0mg/L+矮壮素2.0~4.0mg/L+IAA0.2~0.8mg/L+NAA0.2~0.8mg/L的琼脂固体培养基上进行增殖和生根； (3)试管苗移栽:试管苗出瓶移栽前，将根叶俱全的丛生幼苗分成单株，出瓶的幼苗先用500~800倍的多菌灵或代森锰锌浸泡10~15分钟，随后将幼苗移至有顶玻璃的移栽容器中，在温度为20~30°C，湿度80~90%的条件下生长，25~30d长出新叶时，既已成活； (4)大田块茎繁育:将移栽成活的幼苗，在自然条件炼苗3~5d后，移栽至大田进行块茎繁育。2.根据权利要求1所述的药用盾叶薯蓣组培一步成苗批量化生产的方法，其特征在于，步骤(1)中将 外植体剪成含有I节I芽的规格，首先用洗衣粉清洗干净，在无菌操作台上用无菌水洗5~7次，用70 %酒精浸润30秒-1分钟，再放入0.1 %的升汞溶液中灭菌12~18分钟，无菌水冲洗5~6次，备用。3.根据权利要求1所述的药用盾叶薯蓣组培一步成苗批量化生产的方法，其特征在于，步骤⑴和⑵的培养温度为24°C ±2，1000~20001x弱光环境中，每天10~12小时光照培养。...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄丽芳，夏新界，刘永源，彭光花，冉军，杨平辉，李伟丽，
申请(专利权)人：中国科学院亚热带农业生态研究所，重庆华方武陵山制药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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