一种龙胆的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：(1)取龙胆为开裂果实作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体在超净工作台拨开，将种子抖落到MS培养基上诱导发芽得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽；(4)将所述丛生芽置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；(5)取完整的带根苗进行炼苗后移植于苗床生长一个月，再移栽至大田。采用本发明专利技术所述的培养方法得到的龙胆丛生芽增殖系数达到15-20倍，获得的组培苗生根率达到99.5％，移栽苗床成活率达到98％，有效解决了龙胆的规模化育苗问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物繁殖方法，特别是。
技术介绍
龙胆，拉丁学名Gentiana scabra Bunge,也称龙胆草,胆草、草龙胆、山龙胆，为龙胆科龙胆属多年生草本植物，为药材龙胆草的基源植物之一，以根与根茎入药，具有清肝胆、泻下焦湿热等功效，主要用于治疗能治头胀头疼、目赤肿疼、湿热黄疸、小便淋疼、阴肿阴痒、带下、抽搐、惊风等疾病。现代研究认为其主要有效成分为龙胆苦苷具有抗炎、镇痛、耐缺氧，以及抗疲劳等作用。 龙胆草是我国大宗常用中药材，市场需求量大，长期供不应求，在过去三十几年一直列入国家和省管理的统配品种，但鲜有人工种植，主要来源于野生资源。近年来，由于乱垦、乱牧、乱采挖致使野生资源遭到严重破坏，药材的蕴藏量越来越少，野生资源趋于枯竭，可能有绝种的危险，因此于1989年被列入国家重点发展的保护品种，是重点推荐发展的63种紧缺中药材之一。为了保护珍贵的野生资源，促进龙胆的可持续发展，满足市场的需求，需要加快推进龙胆的中药产业现代化进程，寻找更加快速的繁苗方法，以推动人工种植的发展。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，它能够提高龙胆种苗的繁殖速度和质量，实现龙胆优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。 本专利技术通过以下技术方案达到上述目的:，包括以下步骤: (I)外植体的选择与消毒:取龙胆的成熟为开裂果实作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒10-12min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水； (2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体在超净工作台上剥开，将种子抖落到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001uX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中含0.2mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ; (3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001uX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中含0.5-2.5mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.0-0.2mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的PH值为5.8 ； (4)丛生芽生根培养:将步骤(3)中得到的丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中含0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.3mg/L的生根粉ABT、0_0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼月旨，培养基的pH值为5.8 ； (5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到苗床中，在苗床中生长一个月后移栽大田。 移栽后一个星期内，每天早8点到晚6点喷雾3-5次，每次lOmin，此后每天早8点、晚6点各喷雾I次，每次1min ;移栽时的温度条件为20_28°C，相对湿度75-80%，遮阳率为60%。 本专利技术的突出优点在于: (I)采用组织培养技术繁育龙胆种苗具有繁殖速度快、种苗质量均一，且不受时间、空间、季节限制等突出优点，缩短了种苗繁育周期，提高了种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。 (2)在本专利技术所述的培养体系上得到的龙胆丛生芽增殖系数达到15-20倍，丛生芽健康粗壮，无玻璃化现象，接种到含有生根粉吲哚乙酸IAA、生根粉ABT的1/2MS生根培养基上，获得的组培苗生根率达到99.5%，炼苗后移栽苗床成活率达到98%。 【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术的技术方案进一步说明。 本专利技术所述的龙胆的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤: (I)外植体的选择与消毒:取龙胆的成熟为开裂果实作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒10-12min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。 (2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体在超净工作台上剥开，将种子抖落到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001uX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中含0.2mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。 (3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001uX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中含表1所列的不同浓度的苄基腺嘌呤6-BA、吲哚乙酸IAA、和激动素KT,以及30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。由表1的结果看出，苄基腺嘌呤6-BA对龙胆丛生芽的亚增殖倍率具有显著影响，随着苄基腺嘌呤6-BA浓度的增加，亚增殖倍率迅速增加。三种激素对龙胆亚增殖倍率的影响顺序为A>C>B，最佳配比为A3B2C3，即MS培养基中添加2.5mg/L的苄基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA和0.2mg/L的激动素KT增殖效果最好，增殖倍率达到20倍以上。 表1不同激素对龙胆组织培养快速繁殖效果的影响 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种龙胆的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取龙胆的成熟为开裂果实作为外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15‑30min、添加了2‑3滴吐温‑20的100毫升0.1％升汞消毒10‑12min、无菌水冲洗3‑5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水，(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体在超净工作台上剥开，将种子抖落到MS培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为12‑14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中含0.2mg/L的苄基腺嘌呤6‑BA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为12‑14小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中含0.5‑2.5mg/L的苄基腺嘌呤6‑BA、0.1‑0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.0‑0.2mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，(4)丛生芽生根培养：将步骤(3)中得到的丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为12‑14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中含0.1‑0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1‑0.3mg/L的生根粉ABT、0‑0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，(5)炼苗与移栽：步骤(4)获得带根的完整植株后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2‑4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到苗床中，在苗床中生长一个月后移栽大田。...
【技术特征摘要】
1.一种龙胆的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，该方法包括以下步骤: (1)外植体的选择与消毒:取龙胆的成熟为开裂果实作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒10-12min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水， (2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体在超净工作台上剥开，将种子抖落到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001uX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中含0.2mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8， (3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为12-14小时/天...
【专利技术属性】
技术研发人员：韦坤华，李林轩，缪剑华，韦莹，李翠，刘凡，韦范，黄宝优，林伟，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西;45
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