本发明专利技术公开了一种低成本流水化生产组培苗的方法：包括培养基的配制、培养基的分装与灭菌、无菌操作进行外植体的分离与接种、组织培养等步骤，采用了聚丙烯薄膜袋代替传统玻璃容器，并改善了组织培养的照明光源。本发明专利技术中所使用的聚丙烯薄膜袋培养容器透光透气性好、成本低、重量轻、有效重量大、搬运更简单。通过本发明专利技术的改进，使得组培苗生产的成本降低，生产效率显著提高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生产组培苗的方法，特别涉及一种低成本规模化生产组培苗的方法。
技术介绍
植物组织培养即植物无菌培养技术，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等)组织(如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生质体，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株。但是，传统生产组培苗所使用的玻璃培养容器透光透气性差、成本高、重量大、有效重量小、搬运困难，易损坏。生产成本较高，生产效率较低，可以有更进一步低成本规模化生产组培苗技术的改进。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种易于推广的低成本组织培养容器，建立一种简便、低成本、流水化的组织培养方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下 本专利技术包括以下步骤(一)培养基的配制(1)称取以下重量分数的药品分别置于烧杯中 KH2PO4 3. 75 NH4NO3 36.43 KNO3 41.94 CaCl2 · 2H20 9. 71 MgSO4 · 7H20 8. 17在各烧杯中分别加入药品总重量33-34倍重的纯净水溶解后，按照所列各药品先后顺序将溶液缓慢混合入更大的烧杯中，同时不断搅拌，待用；(2)称取以下重量分数的药品，药品总质量为(1)中药品总质量的1/22 MnSO4 · 4H2010. 8ZnSO4 · 7H204.17H3BO33. 00KI0.40Na2MoO4 · 2H200. 12CoCl2 · 6H200.012CuSO4 · 5H200. 012FeSO4 · 7H2013 47Na2-EDTA18. 07烟酸0.24维生素B60. 24维生素Bl0.05甘氨酸0. 97其余为肌醇将以上药品置于烧杯中，加药品总重量1000倍重的纯净水溶解，缓慢倒入(1)中配制好的溶液中，搅拌混勻后，待用；(3)配制浓度为0.2mg/ml的6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)溶液；(4)称取(2)中药品总重量30倍的琼脂、150倍的蔗糖倒入(1)步骤中的溶液中搅拌， 加热沸腾后，根据不同植物的试管苗加入不同体积的(3)配制的6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)溶液，最后按(1)中药品总重量计，每4. 53g定容到IOOOmL,再逐滴滴入氢氧化钾溶液(1N)调节培养基的PH值到5. 8 ；(二)分装与灭菌将配制好的培养基趁热分装入聚丙烯薄膜袋中，用小夹子固定在一个用铁丝做成的简易框架上使其直立，然后放入高压灭菌锅消毒，灭菌时间在121°C保持18 20min即可； (三)无菌操作(1)无菌操作实验器具和材料的准备包括超净工作台的无菌处理，消毒双手及切割刀和镊子等操作工具；(2)灭菌结束后，将简易架子放在超净工作台上，整理薄膜袋使其能够直立，用塑料袋封口机封住袋口，薄膜袋静置至培养基凝固，待用；(3)流水作业进行外植体的分离与接种装有试管苗的培养袋、操作器具、培养皿及塑料袋封口机等用新洁尔灭或75%酒精擦拭消毒后放入超净工作台内；1号组培技术工人在超净工作台内将试管苗从培养袋中取出，置无菌滤纸上，用切割刀按照不同试管苗的繁殖要求对待繁殖的试管苗进行切割；同时2号技术工人剪开已灌装培养基且培养基已凝固的薄膜袋封口处，用消毒过并冷却的镊子将1号组培技术工人切割的繁殖的试管苗夹入薄膜袋内；3号组培技术工人将2号组培技术工人放入的块茎或茎段微插入培养基中，若是叶柄水平放置；4号组培技术工人将3号组培技术工人做好的薄膜袋，用塑料袋封口机将其薄膜袋封口并编号，放置于培养室中的培养架上；(四)按(三)所述步骤进行无菌操作，将薄膜袋封装的试管苗放置于培养室中的培养架上进行组织培养，组织培养的照明光源采用节能灯，优选为11瓦的节能灯。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是1、采用聚丙烯薄膜袋作为培养容器，其具较玻璃好的透光透气性，培养物较传统玻璃容器的青绿、健壮。聚丙烯薄膜传热良好，有利于培养物提早炼苗，使之更适应自然温度，移栽成活率高。2、传统玻璃容器重量大而有效重量小，一般空瓶重约240克左右，而苗及培养基只有阳克左右，有效重量是空瓶重量的23%左右，玻璃瓶的搬运成了一项比较繁重的体力劳动，若要将组培苗运入温室移栽，运输成本增加，且玻璃瓶所占体积较大，放入培养室培养，增加了存放费用。而聚丙烯薄膜袋重量轻，不仅降低了运输成本，而且减轻了工人的劳动强度，移栽时也方便。3、传统玻璃容器成本高，一个350ml的玻璃容器需0. 8 1. 0元左右，而且容易破损，需要不断进行补充，而薄膜袋成本低，仅约0. 035元/个。除此之外，使用传统玻璃容器清洗与消毒费用高，而聚丙烯薄膜袋作为容器免去了清洗费用且消毒费也降低了。4、薄膜袋透光性好，再加上改进光源，使用节能灯，在培养室中若放置在 1. OmX 2. Om培养架上，仅需共44瓦的节能灯，培养物即可正常生长。5、本专利技术建立的组培技术简便且易于掌握。流水化的接种步骤，提高了工作效率，采用此种方法不仅降低了组培苗的生产成本，而且提高了组培苗的生产效率，与传统方法相比起到了事半功倍的效果。具体实施例方式下面结合具体实施方式对本专利技术的上述
技术实现思路
作进一步的详细描述。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于下述实施例。在不脱离本专利技术上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括在本专利技术的范围内。实施例1本实施例为培养基的配制 (1)称取 KH2PO4 170mg，NH4NO3 1650mg，KNO3 1900mg，CaCl2 ·2Η20 440mg，MgSO4 · 7Η20 370mg，分别置于200mL的烧杯中，加纯净水150 mL溶解后，按照所列各药品先后顺序将溶液缓慢混合入2000mL的烧杯中，同时不断搅拌，待用。(2)称取 MnSO4 ·4Η20 22. 3 mg, ZnSO4 · 7H20 8.6 mg, H3BO3 6. 2 mg , KI 0. 83 mg, Na2MoO4 ·2Η20 0. 25 mg，CoCl2 ·6Η20 0.025 mg，CuSO4 ·5Η20 0.025 mg，FeSO4 · 7H20 27. 8 mg, Na—EDTA 37.3 mg，烟酸 0.5 mg，维生素 B6 0. 5mg，维生素 Bl 0. lmg,甘氨酸 2.0 mg, 肌醇100 mg于500mL的烧杯中，加纯净水200 mL溶解后，缓慢倒入1中的2000mL的烧杯中，搅拌混勻后，待用。(3)配制浓度为0. 2mg/ml的6_苄氨基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)溶液；(4)准确称取琼脂6g、蔗糖30g倒入1步骤中的2000mL的烧杯中搅拌，加热沸腾后，根据不同植物的试管苗加入不同体积的6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)溶液，最后加纯净水至烧杯刻度IOOOmL处，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节培养基的PH值到5. 8。实施例2本实施例为分装与灭菌将配制好的培养基趁热分装入聚丙烯薄膜袋中。用小夹子固定在一个用铁丝做成的简易框架上使其直立，然后放入高压灭菌锅消毒，灭菌121°C保持20min。实施例3 本实施例为无菌操本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种低成本流水化生产组培苗的方法，包括以下步骤：（一）培养基的配制： （１） 称取以下重量分数的药品分别置于烧杯中：ＫＨ２ＰＯ４ ３．７５ＮＨ４ＮＯ３ ３６．４３ＫＮＯ３４１．９４ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ ９．７１ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ８．１７在各烧杯中分别加入药品总重量３３－３４倍重的纯净水溶解后，按照所列各药品先后顺序将溶液缓慢混合入更大的烧杯中，同时不断搅拌，待用；（２）称取以下重量分数的药品，药品总质量为（１）中药品总质量的１／２２：ＭｎＳＯ４·４Ｈ２Ｏ１０．８ ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ４．１７Ｈ３ＢＯ３ ３．００ ＫＩ ０．４０Ｎａ２ＭｏＯ４·２Ｈ２Ｏ ０．１２ ＣｏＣｌ２·６Ｈ２Ｏ ０．０１２ＣｕＳＯ４·５Ｈ２Ｏ ０．０１２ ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ １３．４７Ｎａ２—ＥＤＴＡ １８．０７ 烟酸 ０．２４维生素Ｂ６ ０．２４维生素Ｂ１ ０．０５甘氨酸 ０．９７ 其余为肌醇将以上药品置于烧杯中，加药品总重量１０００倍重的纯净水溶解，缓慢倒入（１）中配制好的溶液中，搅拌混匀后，待用；（３） 配制浓度为０．２ｍｇ／ｍｌ的６－苄氨基腺嘌呤（６－ＢＡ）和萘乙酸（ＮＡＡ）溶液；（４）称取（２）中药品总重量３０倍的琼脂、１５０倍的蔗糖倒入（１）步骤中的溶液中搅拌，加热沸腾后，根据不同植物的试管苗加入不同体积的（３）配制的６－苄氨基腺嘌呤（６－ＢＡ）和萘乙酸（ＮＡＡ）溶液，最后按（１）中药品总重量计，每４．５３ｇ定容到１０００ｍＬ，再逐滴滴入氢氧化钾溶液（１Ｎ）调节培养基的ＰＨ值到５．８；（二） 分装与灭菌：将配制好的培养基趁热分装入聚丙烯薄膜袋中，用小夹子固定在一个用铁丝做成的简易框架上使其直立，然后放入高压灭菌锅消毒，灭菌时间在１２１℃保持１８～２０ｍｉｎ即可； （三）无菌操作：（１）无菌操作实验器具和材料的准备：包括超净工作台的无菌处理，消毒双手及切割刀和镊子等操作工具；（２）灭菌结束后，将简易架子放在超净工作台上，整理薄膜袋使其能够直立，用塑料袋封口机封住袋口，薄膜袋静置至培养基凝固，待用；（３）流水作业进行外植体的分离与接种：装有试管苗的培养袋、操作器具、培养皿及塑料袋封口机等用新洁尔灭或７５％酒精擦拭消毒后放入超净工作台内；１号组培技术工人在超净工作台内将试管苗从培养袋中取出，置无菌滤纸上，用切割刀按照不同试管苗的繁殖要求对待繁殖的试管苗进行切割；同时２号技术工人剪开已灌装培养基且培养基已凝固的薄膜袋封口处，用消毒过并冷却的镊子将１号组培技术工人切割的繁殖的试管苗夹入薄膜袋内；３号组培技术工人将２号组培技术工人放入的块茎或茎段微插入培养基中，若是叶柄水平放置；４号组培技术工人将３号组培技术工人做好的薄膜袋，用塑料袋封口机将其薄膜袋封口并编号，放置于培养室中的培养架上；（四）按（三）所述步骤进行无菌操作，将薄膜袋封装的试管苗放置于培养室中的培养架上进行组织培养，组织培养的照明光源采用节能灯。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何俊蓉，王跃华，蒋彧，卓碧萍，文利，刘菲，李世元，杨桂蓉，
申请(专利权)人：四川省农业科学院园艺研究所，
类型：发明
国别省市：90
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