本发明专利技术公开了一种利用大孔吸附树脂DA201精制桦褐孔菌粗多糖的方法，其特征是，包括如下步骤：A．原料的脱脂预处理；B．热水浸提制备粗多糖；C．粗多糖酶解；D．大孔吸附树脂DA201处理；E．超滤去除小分子；F．真空冷冻干燥；制备桦褐孔菌多糖。使用该工艺最终得到脱色的并去除大部分蛋白和小分子杂质的桦褐孔菌精制多糖，具备较高的多糖保留率、脱色率为和蛋白脱除率，并适合产业化规模化生产桦褐孔菌精制多糖。
【技术实现步骤摘要】
利用大孔吸附树脂DA201精制桦褐孔菌粗多糖的方法
本专利技术属于生物
，具体是涉及一种利用大孔吸附树脂DA201精制桦褐孔 菌粗多糖的方法。
技术介绍
桦褐孔菌(Fr. )Pilat]是一著名的民间野生药用真菌。研究 表明，桦褐孔菌多糖是重要的活性成分之一，具有增强免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、降血糖及 抗病毒等多种药理活性，已成为国内外研究的热点领域之一。但目前对桦褐孔菌多糖的分 离纯化的研究报道相对较少。 由于多糖的组成复杂性，多糖粗提物的分子量分布较广，多糖种类也很多，而且前 期实验表明，提取后的桦褐孔菌粗多糖中含有一定量的蛋白和色素，影响多糖的化学结构 和生物活性研究，因此有必要对多糖进行分离纯化。但去除粗多糖中的蛋白和色素，一直是 多糖分离纯化中的一大难题，传统的去蛋白和去色素的方法操作繁琐、效率低。传统的去蛋 白以Sevage法为主，方法操作繁琐，效率低，采用的有机溶剂有毒性因而影响多糖的生物 活性；活性炭法去除色素效果较好，但后期的活性炭粉末不易去除，过氧化氢法因为较强的 抗氧化活性去除色素效果很好，但对多糖的活性影响较大，因此急需探索一种新的精制方 法。 大孔吸附树脂是一类不含交换基团的高分子吸附材料，具有良好的大孔网状结构 和较大的比表面积，具有很好的吸附活性，某些大孔树脂已经用到植物多糖中的去蛋白研 究中，取得了很好的效果。 申请公布号CN102603906A (申请号201110461635. 8)的中国专利文献公开了一种 桦褐孔菌多糖水溶液的制备方法：一种桦褐孔菌多糖水溶液的制备方法，包括以下步骤： 三氯乙酸脱蛋白：向桦褐孔菌提取物中加入三氯乙酸，静置，然后固液分离，取分离得到的 固体物质；活性炭脱色：向步骤；所得固体物质按体积加入50?100倍的水，然后加入活 性炭脱色，然后固液分离，取所得上清液；用天然澄清剂澄清：所得上清液加入天然澄清剂 澄清。 大孔树脂用以去除桦褐孔菌粗多糖尚未见有文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种精制桦褐孔菌粗多糖的工艺，本专利技术的核心技术是：应 用生物酶和阴离子交换吸附树脂替代传统的Sevage法、活性炭法和过氧化氢法去除蛋白 和色素，适合规模化产业化制备桦褐孔菌精制多糖。 本专利技术的技术方案如下： 利用大孔吸附树脂DA201精制桦褐孔菌粗多糖的方法，其包括如下步骤:A.原料的脱 脂预处理；B.热水浸提制备粗多糖；C.粗多糖酶解；D.大孔吸附树脂DA201处理；E.超 滤去除小分子；F.真空冷冻干燥；制备桦褐孔菌多糖。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤A.原料的脱脂预处理是指，取干燥的桦褐孔 菌菌核，粉碎，置于4-8倍体积的60-95%乙醇溶液中浸泡16-24 h (优选的，置于6_7倍体 积的70-90%乙醇溶液中浸泡18-20 h，更加优选的，置于6. 5倍体积的80%乙醇溶液中浸泡 20 h)，以除去脂肪、部分单(寡）糖及脂溶性色素，残渣阴凉处风干。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤B.热水浸提制备粗多糖是指，预处理后的残 渣风干后，加 10-20倍蒸馏水（v/w)，沸水提取1-3 h，80-120目纱布过滤(优选的，加 13-18 倍蒸馏水（v/w)，沸水提取1.5-2. 5h，85-100目纱布过滤，更加优选的，加 15倍蒸馏水（ν/ w)，沸水提取2 h，100目纱布过滤)，滤渣重复提取1-3次，合并滤液，浓缩，离心，喷雾干燥得 粗多糖。[0011 ] 前面所述的方法，优选的方案是，步骤C.粗多糖酶解是指，将粗多糖加水溶解，加 入木瓜蛋白酶，35-45 V反应20-40min (优选的，36-42 V反应25_35min，更加优选的，40 V 反应30min)，得粗多糖的酶解液。更加优选的，粗多糖加水溶解后配制为0.5-2.0% (w/w) 的水溶液(优选的，配制为0. 6-1. 8% (w/w)的水溶液,更加优选的,配制为1.5% (w/w)的水 溶液)。更加优选的，木瓜蛋白酶加入量为粗多糖水溶液的3-5% (w/w)(优选的，加入量为 粗多糖水溶液的3. 5-4. 5% (w/w)，更加优选的，加入量为粗多糖水溶液的4. 0% (w/w))。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤D.大孔吸附树脂DA201处理是指，粗多糖的 酶解液加入预处理好的DA201树脂层析柱中，按照DA201树脂：粗多糖酶解液=1. 2-2. 0 ： l(w/v)，流速控制在1.5-2. 2ml/min(优选的，按照DA201树脂：粗多糖酶解液=1. 5-1. 8 ： 1 (w/v),流速控制在1. 5-2 ml/min,更加优选的，按照DA201树脂：粗多糖酶解液=1. 6 ： 1 (w/v),流速控制在1. 8ml/min),收集流出液。更加优选的，所述的预处理是指，大孔吸附 树脂DA201用无水乙醇浸泡24 h,并以无水乙醇洗脱至无色，然后用水洗至无醇味。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤E.超滤去除小分子是指，采用超滤膜分子量 为1万的中空纤维素膜进行超滤，去除1万以下的小分子物质。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤F.真空冷冻干燥是指，先将桦褐孔菌多糖 样品放置于-20°C下3 h，然后转入-80°C下冷冻6 h以上，然后转入真空冷冻干燥机干燥， 得精制的桦褐孔菌多糖。 本专利技术公开了一种桦褐孔菌精制多糖及其制备工艺，制备工艺如下：1、原料的预 处理；2、桦褐孔菌多糖的溶出；3、蛋白酶水解；4、阴离子树脂处理；5、超滤，然后干燥。使用 该工艺最终得到脱色的并去除大部分蛋白和小分子杂质的桦褐孔菌精制多糖，具备较高的 多糖保留率、脱色率为和蛋白脱除率，并适合产业化规模化生产桦褐孔菌精制多糖。 【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术技术方案详加描述，但保护范围不被此限制。实施例中 所用原料皆可从市场获得。 实施例1利用大孔吸附树脂DA201精制桦褐孔菌粗多糖的方法，包括如下步骤： A.原料的脱脂预处理：取干燥的桦褐孔菌菌核，粉碎，置于4倍体积的60%乙醇溶液中 浸泡16 h，以除去脂肪、部分单(寡）糖及脂溶性色素，残渣阴凉处风干。 B.热水浸提制备粗多糖：预处理后的残渣风干后，加 10倍蒸馏水（v/w)，沸水提取 lh，80目纱布过滤，滤液浓缩，离心，喷雾干燥得粗多糖。 C.粗多糖酶解：将粗多糖加水溶解，配制为0. 5% (w/w)的水溶液，加入木瓜蛋白 酶，木瓜蛋白酶加入量为粗多糖水溶液的3% (w/w)，35°C反应20min，得粗多糖的酶解液。 D.大孔吸附树脂DA201处理是指，粗多糖的酶解液加入预处理(大孔吸附树脂 DA201用无水乙醇浸泡24 h,并以无水乙醇洗脱至无色,然后用水洗至无醇味）好的DA201 树脂层析柱中，按照DA201树脂：粗多糖酶解液=1. 2 : 1 (w/v),流速控制在1. 5 ml/min, 收集流出液。 E.超滤去除小分子：采用超滤膜分子量为1万的中空纤维素膜进行超滤，去除1 万以下的小分子物质，得桦褐孔菌多糖样品。 F.真空冷冻干燥：先将桦褐孔菌多糖样品放置于_20°C下3 h，然后转入_80°C下 冷冻6 h以上，然后转入真空冷冻干燥机干燥，得精制的桦褐孔菌多糖本文档来自技高网...
【技术保护点】
利用大孔吸附树脂DA201精制桦褐孔菌粗多糖的方法，其特征是，包括如下步骤：A．原料的脱脂预处理；B．热水浸提制备粗多糖；C．粗多糖酶解；D．大孔吸附树脂DA201处理；E．超滤去除小分子；F.真空冷冻干燥；制备桦褐孔菌多糖。
【技术特征摘要】
1.利用大孔吸附树脂DA201精制桦褐孔菌粗多糖的方法，其特征是，包括如下步骤:A. 原料的脱脂预处理；B.热水浸提制备粗多糖；C.粗多糖酶解；D.大孔吸附树脂DA201处 理；E.超滤去除小分子；F.真空冷冻干燥；制备桦褐孔菌多糖。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤A.原料的脱脂预处理是指，取干燥的 桦褐孔菌菌核，粉碎，置于4-8倍体积的60-95%乙醇溶液中浸泡16-24 h(优选的，置于6_7 倍体积的70-90%乙醇溶液中浸泡18-20 h，更加优选的，置于6. 5倍体积的80%乙醇溶液中 浸泡20 h)，以除去脂肪、部分单(寡）糖及脂溶性色素，残渣阴凉处风干。3.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤B.热水浸提制备粗多糖是指，预处理 后的残渣风干后，加 10-20倍蒸馏水（v/w)，沸水提取1-3 h，80-120目纱布过滤(优选的，力口 13-18倍蒸馏水（v/w)，沸水提取1. 5-2. 5h，85-100目纱布过滤，更加优选的，加 15倍蒸馏 水（v/w)，沸水提取2h，100目纱布过滤)，滤渣重复提取1-3次，合并滤液，浓缩，离心，喷雾 干燥得粗多糖。4.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤C.粗多糖酶解是指，将粗多糖加水溶 解，加入木瓜蛋白酶，35-45°C反应20-40min (优选的，36_42°C反应25_35min，更加优选的， 40°C反应30min)，得粗多糖的酶解液。5.根据权利要求4所述的方法，其特征是，粗多糖加水溶解后配制为0.5-2.0% (w/w) 的水溶液(...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈文灵，
申请(专利权)人：陈文灵，
类型：发明
国别省市：山东;37
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