一种水貂阿留申病毒的LAMP检测方法技术

本发明专利技术公开了一种水貂阿留申病毒的LAMP检测方法，包括DNA模板的提取；LAMP反应引物的设计；LAMP反应；LAMP反应结果检测,经试验得知，特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备的优点。

【技术实现步骤摘要】
—种水貂阿留申病毒的LAMP检测方法
本专利技术涉及一种动物疫病的检测方法，具体地说，涉及一种水貂阿留申病 毒的LAMP检测方法，属于动物检验检疫
。
技术介绍
水紹阿留申病(Aleutian disease, AD)是由水紹阿留申病毒(Aleutian diseaseparvovirus, ADV)侵害水紹引起的一种慢性、进行性传染病,一直是危害着世界养紹业健康发展的最重要的疫病之一。该病几乎存在于所有养貂的国家和地区，呈现世界分布性的特点。从发现AD以来世界各地所报道的与AD研究相关的文章中，我们也可从侧面了解AD感染的全球化趋势。就可查阅到的文献来看，美洲的美国、加拿大、阿根廷等国家，欧州的丹麦、芬兰、英国、西班牙、德国等国家，亚洲的中国、日本等国，均有该病的相关研究报道。我国水貂的主要养殖区在山东、辽宁和黑龙江三地，现在国际上ADV的流行情况还没有相关报道，国内根据闻喜军等2006-2007年的初步调查，在全国送检的221只水貂病例中检出水貂阿留申病貂22只，占剖检总数的约10% ;送检的阿留申病例以9-11月居多，说明其发病具有明显的季节性。因为水貂阿留申病潜伏期长，阿留申病貂多不表现明显的临床症状，故养殖户可能会忽视对阿留申病貂的检疫和淘汰，而且近年来我国毛皮动物市场的扩大，流通渠道增多，频繁引种和倒种及其动物产品数量增加，但配套措施不够健全，不同地区的饲养条件，管理水平参差不齐，一些饲养场疾病防治观念淡薄，对水貂阿留申病重视不够所以我国水貂阿留申病毒的感染率应高于10%。以上检测结果是通过对流免疫电泳(CIEP)检测得到，该法操作简便，对试验条件要求不高，有较高的特异性，但随着技术的进步和检测标准的提高， 该方法的结果判定的误差较大，易散毒，耗时长的缺点已不能适应我国水貂养殖业发展的要求，所以，为了阻断水貂阿留申病的传播，净化水貂养殖环境，亟待更加安全，高效的方法来代替。水貂阿留申病毒的LAMP检测方法的建立，必将为我国水貂阿留申病感染率的降低、经济效益的提升带来巨大的帮助。目前，还没有见到对水貂阿留申病毒LAMP检测方法的研究报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是针对以上不足，提供一种水貂阿留申病毒的LAMP检测方法，克服了现有检测方法误差大、易散毒、耗时长的缺陷，采用本专利技术的LAMP检测方法，可以快速诊断水貂是否感染水貂阿留申病毒，具有检测成本低，检测效率高的优点。LAMP,为 loop-mediated isothermal amplification 的简称，中文名称为环介导等温扩增。为解决以上技术问题，本专利技术采用的技术方案为:一种水貂阿留申病毒的LAMP检测方法，其特征在于:所述LAMP检测方法包括以下步骤: a.DNA模板的提取；b.LAMP反应引物的设计； c.LAMP 反应； d.LAMP反应结果检测。一种优化方案，所述步骤a包括:利用病毒DNA提取纯化试剂盒进行提取水貂阿留申病毒DNA，得样本DNA。进一步地，所述步骤b包括:选择水貂阿留申病毒VP2基因作为靶基因； 根据LAMP引物设计软件网址:http://primerexplorer.jp/e/,将待扩增的DNA分为六个独立的区域，根据这六个区域分别设计LAMP反应所需的引物，所述引物包括内引物FIP和BIP、外引物F3和B3、环引物LB、LF，共设计五套LAMP引物扩增VP2基因。进一步地，所述五套LAMP引物扩增VP2基因包括: 第一套为:本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水貂阿留申病毒的LAMP检测方法，其特征在于：所述LAMP检测方法包括以下步骤：a.DNA模板的提取；b.LAMP反应引物的设计；c. LAMP反应；d. LAMP反应检测。

【技术特征摘要】
1.一种水貂阿留申病毒的LAMP检测方法，其特征在于:所述LAMP检测方法包括以下步骤: a.DNA模板的提取； b.LAMP反应引物的设计； c.LAMP 反应； d.LAMP反应检测。2.如权利要求1所述的LAMP检测方法，其特征在于:所述步骤a包括:利用病毒DNA提取纯化试剂盒进行提取水貂阿留申病毒DNA，得样本DNA。3.如权利要求1所述的LAMP检测方法，其特征在于:所述步骤b包括:选择水貂阿留申病毒VP2基因作为靶基因； 根据LAMP引物设计软件网址:http://primerexplorer.jp/e/,将待扩增的DNA分为六个独立的区域，根据这六个区域分别设计LAMP反应所需的引物，所述引物包括内引物FIP和BIP、外引物F3和B3、环引物LB、LF，共设计五套LAMP引物扩增VP2基因。4.如权利要求 3所述的LAMP检测方法，其特征在于:所述五套LAMP引物扩增VP2基因包括: 第一套为:ADV55-F3:CCAACCAAGGTAACGCATADV55-B3:TGTTGTAAATGTAACATGGATGAADV55-FIP:GCTGGAGTATATGGCAATATGTTGTTTTTTCAACAATGACTTAACTGCGADV55-BIP:CCGTTGGGAGAAACACTGGGTTTTATACCTATATTGGGTTGGTTTGADV55-LF:GTGTCTAAAGCAACCTGTAACGA ； 第二套为:ADV8-F3:GTTTGGTTACTTTAGAACAAGAGADV8-B3:TGCTCTCCAAGGAACAAAGADV8-FIP:TGCTTGGTAGATGCGTTACCTTTTTTATAGACAATGTAACCATAAAGACTGADV8-BIP:TAACTGCGTCGTTACAGGTTGCTTTTCCCAGTGTTTCTCCCAACADV8-LB:ACAACATATTGCCATATACTCCAGC ； 第三套为:ADV21-F3:GATAGACAATGTAACCATAAAGACTADV21-B3:TTGGTTTGGTTGCTCTCCADV21-FIP:CGACGCAGTTAAGTCATTGTTGATTTTGTAACAGAAACCAACCAAGGTAADV21-BIP:TACAGGTTGCTTTAGACACTAACAATTTTAAGGAACAAAGCCCAGTGADV21-LB: CATATACTCCAGCTGCGCCGTT ； 第四套为:ADV3...

【专利技术属性】
技术研发人员：田国宁，张金玲，孙军，赵晗，韩亮，吴伟，田国华，丁葵英，
申请(专利权)人：田国宁，
类型：发明
国别省市：山东;37