一种快速检测皂苷含量的方法技术

本发明专利技术提供一种快速检测皂苷含量的方法，采用衰减全反射-紫外可见光谱仪测量柱层析过程中上样流出液、水洗流出液、洗脱液等多种液体的光谱图，用化学计量学方法建立皂苷含量和光谱图的定量模型，在分析待测样品时，直接扫描未知浓度层析流出液的紫外-可见光光谱图，然后将光谱图数据输入定量模型中，计算得到层析流出液中的皂苷含量值。该方法简单快速，无污染，样品不需要稀释或者过滤，可用于柱层析过程不同流出液中皂苷含量的快速测定，有助于监控柱层析过程，提高过程质量控制水平。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供，采用衰减全反射-紫外可见光谱仪测量柱层析过程中上样流出液、水洗流出液、洗脱液等多种液体的光谱图，用化学计量学方法建立皂苷含量和光谱图的定量模型，在分析待测样品时，直接扫描未知浓度层析流出液的紫外-可见光光谱图，然后将光谱图数据输入定量模型中，计算得到层析流出液中的皂苷含量值。该方法简单快速，无污染，样品不需要稀释或者过滤，可用于柱层析过程不同流出液中皂苷含量的快速测定，有助于监控柱层析过程，提高过程质量控制水平。【专利说明】
本专利技术属于医药领域，特别涉及。
技术介绍
皂苷类成分广泛存在于五加科、豆科、远志科、葫芦科、薯蓣科、百合科和玄参科的植物中，具有扩张血管、降低心肌耗氧量、延长凝血时间、调血脂、清除自由基、抗炎、抗氧化、解热、镇静和抗癌等多种药理作用。皂苷类成分也是诸如人参和三七等多种名贵药材的主要有效成分。近年来，以皂苷为主要活性成分的中药制剂在心脑血管疾病、糖尿病等慢性疾病的治疗中取得了良好效果。柱层析工艺是精制皂苷的常用工艺，所得产物具有杂质少、色素少、总皂苷含量高等优点，有利于降低病人用药剂量，减少不良反应。柱层析往往是生产中的关键工艺，对药品质量影响较大，具有耗时长，影响因素多，控制难度大等特点。目前的柱层析工艺多以大孔树脂为分离材料，主要包括上样、水洗、洗脱、再生等四个基本工序。上样、水洗和洗脱等3个工序都具有明显的除杂能力。但如果控制不当，上样流出液和水洗流出液中都可能会出现皂苷损失；洗脱工序则可能出现皂苷没有完全洗脱等不良生产状况。因此，为了减少皂苷损失，提高生产效率，有必要快速检测柱层析过程流出液中的皂苷含量，以准确判断各个工序的终点。目前常用的皂苷检测方法有高效液相色谱法、毛细管电泳法、近红外光谱法和紫外光谱法等。其中高效液相色谱法分析时间较长，毛细管电泳法稳定性较差。另外，高效液相色谱法、毛细管电泳法和近红外光谱法设备昂贵。相比近红外光谱，紫外光谱意义相对明确。常规的紫外-可见光谱设备具有价格较低，分析速度快等优点。但由于此范围内的光波穿透性能弱，在一般的生产过程流出液中吸收值太高，无法用于测定液体中成分的浓度。稀释法和降低光程法是两种常用于减少紫外光谱吸收值的方法。稀释法的弊端在于使设备或者步骤变得复杂，而且在结果中引入了稀释误差。降低光程法要求比色皿中液体厚度变薄，但是薄了之后很容易造成堵塞，同时液体对比色皿的腐蚀对光程的影响也会变大。衰减全反射-紫外可见光谱(ATR-UV)技术通过测定反射光谱的强度获得样品溶液信息，提供了一种解决困难的新思路。衰减全反射-紫外可见光谱技术测定溶液中成分的浓度可以达到普通紫外-可见分光光度法测定成分浓度的1000倍以上。由于具备分析时间短，设备成本低，光谱意义相对明确，无需稀释，不受液体中小颗粒影响等多个优点，衰减全反射-紫外可见光谱技术非常适合用于快速检测大孔树脂柱层析过程流出液中的皂苷含量。
技术实现思路
本专利技术针对常规技术存在的不足，结合衰减全反射-紫外可见光谱技术的特点，提供，是一种快速检测层析过程中皂苷含量的方法，通过以下步骤实现:(1)测定层析过程流出液校正集样本中的皂苷含量 采用高效液相色谱法测定层析过程中上样流出液、水洗流出液和乙醇洗脱液校正集样本的皂苷含量；色谱条件:色谱柱为Waters ACQUITY CSH C18 (50 mmX2.1 mm 1.d.，1.7Mm);流动相:0.01 %甲酸水(A)-0.01 %甲酸乙腈(B)，线性梯度洗脱程序:0 min 19 % B,6 min 20 % B, 8.5 min 31 % B, 11 min 33 % B, 17 min 90 % B,运行 19 min ;流速:0.35ml/min ;检测波长:203 nm ;柱温:40 °C ;进样量:5 μ?。按外标两点法方程计算含量。对照品溶液的制备:取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd 5种对照品或人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1 3种对照品适量，精密称定，加70 %甲醇-水溶液(ν/ν)溶解,制成每I ml约含各对照品为0.3 mg/ml和0.03 mg/ml的混合对照品溶液1、2，于4°C保存。临用时10000 rpm离心10 min，取上清液备用。供试品溶液的制备:分别将上样流出液、水洗流出液和洗脱液样品过滤，取续滤液，备用。精密量取续滤液适量加70 %甲醇-水溶液(ν/ν)成适当浓度，混匀，10000 rpm离心10 min，取上清液，即为供试品溶液。(2)紫外扫描得到校正集样本的紫外-可见光谱图 取层析过程中获取的上样流出液、水洗流出液和洗脱液样品，直接用衰减全反射-紫外可见光谱仪进行扫描，扫描的光谱区间是190nm~800nm，分辨率为0.1nm-1nm,光谱扫描三次之后，取平均值作为校正集样本。(3)采用偏最小二乘法或者主成分回归法分别对上样和水洗流出液、乙醇洗脱液构建定量模型 使用Simca、Unscrambler或者Minitab软件处理数据，在构建光谱图和阜苷含量定量模型时使用的方法是偏最小二乘法或者主成分回归法，使用交叉验证法确定最佳主成分数，当定量模型的相关系数到0.9以上时，认为模型已经建立完成。(4)层析过程流出液中皂苷含量的快速测定 将光纤探头装于层析柱出口管路，直接扫描未知浓度的层析过程流出液的光谱图，层析过程流出液包括上样流出液、水洗流出液和洗脱液，紫外扫描的光谱范围和分辨率要求和建立标准集样本时相同，将光谱数据代入构建的定量模型中，作为预测集，就可以得到层析过程流出液中皂苷的含量。其中溶剂为水的流出液适用于采用上样流出液和水洗流出液构建的定量模型；溶剂为乙醇水溶液的洗脱液适用于采用洗脱液构建的定量模型。本专利技术的另一个目的是提供所述方法在快速检测皂苷含量中的应用。本专利技术提供了一种快速检测柱层析过程流出液中皂苷含量的方法。该方法采用衰减全反射-紫外可见光谱仪测量柱层析过程中上样流出液、水洗流出液、洗脱液等多种液体的光谱图，并使用化学计量学方法建立皂苷含量和光谱图的定量模型，计算得到皂苷含量。该方法首先收集柱层析过程中上样流出液、水洗流出液和洗脱液作为校正集样本，然后扫描得到校正集样本的紫外-可见光谱图作为标准光谱图，再使用液相色谱法检测得到校正集样本中皂苷的含量，最后建立紫外-可见光光谱图和皂苷含量之间的定量模型。在分析待测样品时，直接扫描未知浓度层析流出液的紫外-可见光光谱图，然后将光谱图数据输入定量模型中，计算得到层析流出液中的皂苷含量值。该测量方法简单快速，无污染，样品不需要稀释或者过滤，可用于柱层析过程不同流出液中皂苷含量的快速测定，有助于监控柱层析过程，提高过程质量控制水平。本专利技术的方法操作过程简单、快速，样品溶液无需稀释或者过滤，所需设备为衰减全反射-紫外可见光谱仪，定量模型构建完毕后，无需专业背景的人员也可完成定量分析过程，因此，可以很好地在中药生产企业进行推广，作为柱层析过程质量控制的一种手段。【专利附图】【附图说明】图1是三七层析流出液光谱拟合效果。图2是采用衰减全反射-紫外可见光谱计算得到的上样出口液皂苷浓度曲线。图3是采用衰减全反射-紫外可见光谱计算得到的水洗出口液皂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速检测皂苷含量的方法，通过以下步骤实现： （1）测定层析过程流出液校正集样本中的皂苷含量 采用高效液相色谱法测定层析过程中上样流出液、水洗流出液和乙醇洗脱液校正集样本的皂苷含量；色谱条件：色谱柱为Waters ACQUITY CSH C18，50 mm×2.1 mm i.d. ，1.7 µm；流动相：0.01﹪甲酸水（A）‑0.01﹪甲酸乙腈（B）；线性梯度洗脱程序：0 min 19﹪（B），6 min 20﹪ （B），8.5 min 31﹪ （B），11 min 33﹪ （B），17 min 90﹪（B）；运行19 min；流速：0.35 ml/min；检测波长：203 nm；柱温：40 ℃；进样量：5 µl，按外标两点法方程计算含量；（2）紫外扫描得到校正集样本的紫外‑可见光谱图 取层析过程中获取的上样流出液、水洗流出液和洗脱液样品，直接用衰减全反射‑紫外可见光谱仪进行扫描，扫描的光谱区间是190nm～800nm，分辨率为0.1nm‑1nm，光谱扫描三次之后，取平均值作为校正集样本；（3）采用偏最小二乘法或者主成分回归法分别对上样和水洗流出液、乙醇洗脱液构建定量模型 使用Simca、Unscrambler或者Minitab软件处理数据，在构建光谱图和皂苷含量定量模型时使用的方法是偏最小二乘法或者主成分回归法，使用交叉验证法确定最佳主成分数，当定量模型的相关系数到0.9以上时，认为模型已经建立完成；（4）层析过程流出液中皂苷含量的快速测定 将光纤探头装于层析柱出口管路，直接扫描未知浓度的层析过程流出液的光谱图，层析过程流出液包括上样流出液、水洗流出液和洗脱液，紫外扫描的光谱范围和分辨率要求和建立标准集样本时相同，将光谱数据代入构建的定量模型中，作为预测集，得到层析过程流出液中皂苷的含量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：瞿海斌，程翼宇，龚行楚，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33