本发明专利技术涉及一种同时检测水环境中十种雌激素的技术。通过固相萃取技术对水样进行前处理后，使用液相色谱串联质谱仪检测其含量。本方法将采集后的水样通过微孔滤膜除去水中悬浮的杂质颗粒，并通过固相萃取装置将水样中的雌激素浓缩富集到固相萃取柱上，然后用乙酸乙酯将富集在固相萃取柱的雌激素洗脱下来，用氮气吹干，定容，最后用液相色谱串联质谱仪检测雌激素的含量。该方法操作简便，回收率较高，耗时低，能同时检测较多种类的雌激素。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种运用液相色谱串联质谱仪同时测定水环境中雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，双酚A等十种雌激素的方法。
技术介绍
环境雌激素是一种外源性物质，能够模拟和干扰人或动物体内雌激素的正常合成、运输、结合等过程，能对机体的生殖系统，免疫系统和生殖系统造成影响。环境中存在的雌激素主要包括天然雌激素如雌酮（Estrone，E1），17β-雌二醇（17β-Estradiol，E2）和雌三醇（Estriol，E3）以及人工合成雌激素如乙炔雌二醇（17α-Ethynylestradiol,EE2），壬基酚（4-n-Nonylphenol，NP），辛基酚（4-tert-Octylphenol，OP），戊酸雌二醇（17-beta-Estradiol 17-valerate，EV），己烯雌酚（Diethylstibestrol，DES），己烷雌酚（Hexestrol，HEX），双酚A（Bisphenol A）等，种类丰富。人和动物的每天都会排出天然雌激素，据报道，成年男性每天排出雌酮5μg，而女性每天排出的17β-雌二醇和雌酮分别为2-12μg和3-20μg。人工合成雌激素如乙炔雌二醇被用作避孕药被大量使用，当被排入水体中也会对水体造成影响。研究表明，即使在极低的浓度，这些雌激素也会对水体中的鱼类等生物产生性别干扰，如雄鱼雌性化，并会引起人类的疾病。 近年来雌激素引起水体中鱼类雌性化的现象越来越引起人们的关注，而采用现代的检测技术来对水体的痕量雌激素的检测显得尤为重要。检测雌激素的方法有很多，但能同时检出的雌激素种类还较少。主流检测手段有气相色谱（GC）和液相色谱（LC），特别是它们与质谱联用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）与气相色谱（GC/MS）相比，无需衍生化，耗时少。建立重现性好，回收率和灵敏度高，多种雌激素同时检出的检测方法十分重要。
技术实现思路
本专利技术是针对自然水体中的雌激素的含量，拟开发一种回收率高，快速，准确地同时测量雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，双酚A等十种雌激素的技术。 本专利技术的技术方案如下： 一种同时测量雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，双酚A十种雌激素法定方法，该方法的步骤如下步骤：（1）水样前处理将采集的水样用0.45 μm孔径的滤膜过滤并将pH值调至3.0。量取1.0 L的水样，用Waters公司的C18（6 mL，200 mg）固相萃取小柱对水样进行富集，速度控制在10ml/min。固相萃取小柱使用前进行活化，条件为，先后用6 mL乙酸乙酯，6mL甲醇和6 mL pH=3的盐酸水溶液预处理。待富集结束后，用6mL 10%(v/v)的甲醇水溶液洗柱去除其它杂质，然后抽真空干燥20 min以去除水分。干燥后，用6 mL的乙酸乙酯将目标化合物洗脱至氮吹管中，用温和的氮气流将其吹干。将样品转移至样品瓶中并保存在4℃的冰箱中待测；（2）使用液相色谱串联质谱仪检测雌激素浓度色谱柱：Thermo Accucore C18, 100×2.1mm，粒径2.6μm；流动相及梯度洗脱条件：流动相为0.5%的氨水（流动相A）和纯甲醇（流动相B），梯度洗脱条件为，流动相B的比例在前2min内保持在20%，2-8min内从20%升到60%，8-13min内从60%继续增加到90%，13-16min内维持在90%，16-16.1min从90%降至20%，16.1-20min内维持在20%不变；（3）标准曲线的绘制，以外标法绘制标准曲线；（4）样品含量的测定：将采集的水样按照1）的方法进行前处理，按照2）所述的条件进行雌激素的测定，并用3）中的方法计算雌激素的含量。本专利技术所述的方法还包括采用Milli-Q超纯水，添加浓度为200μg/L，500μg/L的十种目标混合标样，安装（4）所述的含量测定方法，测定各雌激素的浓度。 本专利技术所述的雌激素为雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，双酚A。 本专利技术的有益效果是运用固相萃取技术所需的有机溶剂较少，减少对环境的污染，并且富集倍数高，所用的液相色谱串联质谱仪灵敏度高，操作简便，检测限低，与气相色谱相比更节约时间。本专利技术提供一种回收率高，重现性好，灵敏度高的共检测方法，能同时测定较多种（十种）雌激素的含量。 附图说明图1为100μg/L标样的谱图，出峰顺序为EE2：10.06min，NP：14.58min，OP：13.07min，EV：14.20min,HEX:10.53min, E3:6.46min,DES:9.79min,BPA:8.44min,E1:9.92min, E2:9.90min。 图2为100μg/L的NP的标样的谱图，出峰时间为14.58min。 图3为100μg/L的OP的标样的谱图，出峰时间为13.07min。 图4为100μg/L的EV的标样的谱图，出峰时间为14.20min。 图5为100μg/L的HEX的标样的谱图，出峰时间为10.53min。 图6为100μg/L的E3的标样的谱图，出峰时间为6.46min。 图7为100μg/L的DES的标样的谱图，出峰时间为9.79min。 图8为100μg/L的BPA的标样的谱图，出峰时间为8.44min。 图9为100μg/L的E1的标样的谱图，出峰时间为9.92min。 图10为100μg/L的E2的标样的谱图，出峰时间为9.90min。 具体实施方式下面结合实例和附图对本专利技术做进一步的描述： （1）水样前处理将采集的水样用0.45 μm孔径的滤膜过滤并将pH值调至3.0。量取1.0 L的水样，用Waters公司的C18（6 mL，200 mg）固相萃取小柱对水样进行富集，速度控制在10ml/min。固相萃取小柱使用前进行活化，条件为先后用6 mL乙酸乙酯，6mL甲醇和6 mL pH=3的盐酸水溶液预处理。待富集结束后，用6mL 10%(v/v)的甲醇水溶液洗柱去除其它杂质，然后抽真空干燥20 min以去除水分。干燥后，用6 mL的乙酸乙酯将目标化合物洗脱至氮吹管中，用温和的氮气流将其吹干。将样品转移至样品瓶中并保存在4℃的冰箱中待测；（2）使用液相色谱串联质谱仪检测雌激素浓度：液相色谱串联质谱仪的条件：液相为岛津LC-20A，带自动进样器，日本岛津公司，质谱仪为AB的3200QTRAP线性离子阱质谱仪，带电喷雾离子源（ESI），美国Applied Biosystem公司；色谱柱：Thermo Accucore C18, 100×2.1mm，粒径2.6μm。离子源：电喷雾离子源（ESI），检测模式：负离子检测模式，离子喷雾电压：-4500本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种水环境中同时测定十种雌激素的方法，包含以下十种：雌酮，17β‑雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，双酚A。
【技术特征摘要】
1.一种水环境中同时测定十种雌激素的方法，包含以下十种：雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，双酚A。
2.该十种雌激素共检测方法包含以下步骤：
（1）水样前处理
将采集的水样用0.45 μm孔径的滤膜过滤并将pH调值至3.0，量取1.0 L的水样，用Waters公司的C18（6 mL，200 mg）固相萃取小柱对水样进行富集，速度控制在10ml/min，固相萃取小柱使用前进行活化，条件为先后用6 mL乙酸乙酯，6mL甲醇和6 mL pH=3的盐酸水溶液预处理，待富集结束后，用6mL 10%(v/v)的甲醇水溶液洗柱去除其它杂质，然后抽真空干燥20 min以去除水分，干燥后，用6 mL的乙酸乙酯将目标化合物洗脱至氮吹管中，用温和的氮气流将其吹干，将样品转...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗专溪，王大鹏，张娴，颜昌宙，林立峰，
申请(专利权)人：中国科学院城市环境研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35
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