本发明专利技术提供一种解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SZ-60，其特征在于，其保藏号为CGMCC No.8277。所述菌株在牛肉膏蛋白胨（NB）培养基上单细胞繁殖生长形成的菌落不规则、乳白色、中心稍隆起、表面湿润、半透明；镜检呈杆状，大小为0.3～0.4×3.2～3.3μm，具鞭毛，G﹣，有芽孢在含有2%～5%的NaCl的牛肉膏蛋白胨（NB）培养基上均能生长；所述的牛肉膏蛋白胨（NB）培养基的配方为：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，琼脂17g，水1000ml，pH 6.8～7.2。解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SZ-60对引起人参根腐病、疫病、菌核病、锈腐病、黑斑病和立枯病的主要病原菌具有显著拮抗作用。本发明专利技术还提供解淀粉芽孢杆菌SZ-60在防治植物真菌病害中的应用，或在制备防治植物真菌病害的微生物制剂中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种解淀粉芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
人参(Panax ginseng C．A．Mey)为五加科人参属多年生宿根阴性双子叶药用植物，是我国的名贵药材，有“百草之王”的美誉。人参在中国、韩国、朝鲜、俄罗斯等国家有大面积种植，其中，中国东北是人参的主产区，已成为当地的重要支柱产业之一。人参的长期人工种植和品种选育难度大导致人参种质退化、病害严重、质量差、产量低。化学农药的大量使用，导致农药残留和环境污染，降低了人参药材的安全性和商品价值。病害防控问题已成为制约人参产业可持续发展的重大问题之一。人参病害约有20～40种，其中，以下6类病原菌是导致人参常见病害并限制人参产业发展的主要病原菌：由腐皮镰孢菌(Fusarium solani)导致的人参根腐病一般发病率在30%左右，六年生人参根腐病造成的死亡率可达50%～80%，主要危害幼苗根部和根茎部(地表以下茎部)，腐烂的参根呈黑褐色湿腐状，后期糟朽状，仅存中空的根皮；恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)导致的人参疫病发病率可达70%，其症状为发病轻时叶片上产生不规则的暗绿色斑，重者茎叶枯萎，根部腐烂，植株成片枯死，减产严重；人参核盘菌(Sclerotinia schinseng)导致的人参菌核病主要危害3年生以上参根，发病部位为芽苞、根和根茎，参根被害后，初期在表面生少许白色绒状菌丝体，以后，内部迅速腐败、软化，细胞全部被消解殆尽，只留下坏死的外表皮，表皮内外形成许多鼠粪状的菌核；人参链格孢菌(Alternaria panax)导致的人参黑斑病一般发病率20%-30%，严重时达到100%，造成早期落叶，植株枯萎，不结实，参根和参籽减产；立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)导致的人参立枯病是人参苗期主要病害之一，在低温湿度大的条件下，发展蔓延极为迅速，一般发病率为8～30%，严重者可达40%左右，病菌使幼苗在地面3～5厘米干湿土交界面的茎部缢缩、腐烂，切断输导组织，致使幼苗倒伏；毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans)导致的人参锈腐病严重时发病率达70%以上，该病发生于根的各部位，病斑呈铁锈色，由点至面扩散至全根，土壤湿度大、透气不好、腐殖质层厚，发病重。长期以来通过使用化学农药等化学防治措施来防治人参病害远远未达到人们预想的效果，而且过量使用化学农药会破坏土壤的微生态环境，加重环境污染，也使有毒物质在参根内大量积累，降低人参的使用安全性和商品价值，因此，人们把防治重点逐步转向生物防治措施和农业防治措施上。在农作物植物保护领域，利用作物根际土壤筛选对病原菌具有显著拮抗效果的土壤微生物，并制成微生物制剂是生物防控研究的重要手段，也是有益微生物资源开发的重要途径。生物防治是以生态学原理为基础，利用生物物种间的相互作用，以一种或一类生物抑制另一种或另一类生物。生物防治最大的优点是不污染环境，没有农药残留，这是农药等非生物方法防治病虫害所无法比的。利用拮抗微生物防治病原微生物是生物防治技术的重要组成部分，它避免了化学农药使用带来的一系列植保、环境和能源方面的问题，避免了农药残留对人畜的危害，更重要的是促进了农业的可持续发展。美国已有GB03、MBI600、QsT713和解淀粉枯草芽孢杆菌变种等4株枯草芽孢杆菌生防菌株获得环保局商品化或有限商品化生产应用许可。在德国解淀粉枯草芽孢杆菌变种FZB24被商业化生产，用于控制粮食作物的不同真菌病害。芽孢杆菌(Bacillus)是植物病害生物防治研究中的重要微生物之一，其种类多分布广，是土壤和植物微生态的优势种群。该类微生物通过分泌抗生物质和生长竞争，在防治植物病害方面发挥多种有益作用。目前利用解淀粉芽孢杆菌防治人参真菌性病害未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于：针对人参生产中的主要真菌性病害，尤其是人参土传病害发生面积日益扩大，化学药剂防治除易造成环境污染和农药残留外，防效也不理想的实际情况，提出一种解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）菌株SZ-60及其在分别引起人参根腐病、锈腐病、黑斑病、立枯病、疫病和菌核病的腐皮镰孢菌(F.solani)、毁灭柱孢菌(C.destructans)、人参链格孢菌(A.panax)、立枯丝核菌(Rh.solani)、恶疫霉菌(Ph.cactorum)和人参核盘菌(S.schinseng)6种病原菌防控上的应用。本专利技术提供了一种对上述引起人参根腐病、锈腐病、黑斑病、立枯病、疫病和菌核病的6种病原菌均具有良好防控作用的解淀粉芽孢杆菌SZ-60，该菌株的保藏名称为解淀粉芽孢杆菌SZ-60，分类命名为Bacillus amyloliquefaciensSZ-60，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2013年9月25日，保藏编号：CGMCC No.8277，其16SrDNA序列长度为1436bp，具体如SEQ ID No:l所示。应用BLAST软件和DNAMAN软件等进行分析，将SZ-60菌株的16SrDNA序列通过BLAST比对，能在GenBank中找到同源性非常高的相近菌株序列。与SZ-60菌株相似性最高的是Bacillus amyloliquefaciens，同源性达到99%。根据MEGA5.10Beta2软件以UPGMA法构建系统发育树发现，SZ-60与Bacillus amyloliquefaciens同属一个遗传分枝，亲缘关系十分接近，亲源性达到了100%。结合形态学和生理生化性状的鉴定结果，可以确认本专利技术的菌株SZ-60为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。本专利技术的解淀粉芽孢杆菌SZ-60在牛肉膏蛋白胨（NB）培养基上单细胞繁殖生长形成的菌落不规则、乳白色、中心稍隆起、表面湿润、半透明；镜检呈杆状，大小为0.3～0.4×3.2～3.3μm，具鞭毛，G﹣，有芽孢；其能在25℃～40℃的温度下生长，其最适生长温度为32℃；其生长pH范围为6.5～8.0，最适生长pH为7.2；需氧生长；硝酸盐还原反应生成红色化合物；接触酶测定为阳性；脂肪酶反应为阴性；酪蛋白、酪氨酸反应呈阴性；不能利用D-葡萄糖、D-木糖；淀粉水解试验镜检有糊精生成；明胶液化试验呈阳性；柠檬酸盐利用试验培养基呈酸性(绿色)；V-P(pH 7.0)测定生成红色化合物；L-阿拉伯糖、甘露醇检测呈阳性；在含有2%～5%的NaCl的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SZ‑60，其特征在于，其保藏号为CGMCC No.8277。
【技术特征摘要】
1.一种解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SZ-60，其特征在于，其
保藏号为CGMCC No.8277。
2.如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌SZ-60，其特征在于，该菌株在牛肉膏
蛋白胨（NB）培养基上单细胞繁殖生长形成的菌落不规则、乳白色、中心稍隆
起、表面湿润、半透明。镜检呈杆状，大小为0.3～0.4×3.2～3.3μm，具鞭毛，G
﹣，有芽孢。其能在25℃～40℃的温度下生长，其最适生长温度为32℃。其生
长pH范围为6.5～8.0，最适生长pH为7.2。需氧生长；硝酸盐还原反应生成红
色化合物。接触酶测定为阳性；脂肪酶反应为阴性；酪蛋白、酪氨酸反应呈阴
性。不能利用D-葡萄糖、D-木糖。淀粉水解试验镜检有糊精生成。明胶液化试
验呈阳性；柠檬酸盐利用试验培养基呈酸性(绿色)。V-P(pH7.0)测定生成红色化
合物；L-阿拉伯糖、甘露醇检测呈阳性；在含有2%～5%的NaCl的牛肉膏蛋白
胨（NB）培养基上均能生长。
所述的牛肉膏蛋白胨（NB）培养基的配方为：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，
NaCl5.0g，琼脂17g，水1000mL，pH6.8～7.2。
3.如权利要求1或2所述的解淀粉芽孢杆菌SZ-60在防治植物真菌病害中的应
用，或在制备防治植物真菌病害的微生物制剂中的应用。
优选地，所述植物为人参。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述真菌为腐皮镰孢菌(Fusarium
solani)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans)、人参链格孢菌(Alternaria
panax)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)和人
参核盘菌(Sclerotinia schinseng)中的一种或多种。
5.一种微生物制剂，其特征在于，含有权利要求1的解淀粉芽孢杆菌SZ-60的
全培养液培养物和解淀粉芽孢杆菌SZ-60的孢子。
6.如权利要求5所述的微生物制剂，其特征在于，其是通过以下制备方法制备
得到的：
（1）将如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌SZ-60试管种接种于用1000mL三
角瓶装的300mL营养肉汤酵母膏（NBY）培养液中，在180r/min，30℃下培养
36小时，获得发酵菌液；
（2）将发酵菌液在以种子罐体积20%接种于种子罐中的发酵培养液中发酵培
养，溶氧量为18～20%，搅拌速度200rpm，种子罐的温度30～34℃，接种发酵
菌液4小时后，每隔2小时对种子罐中的发酵液进行发酵质量检测，直到发酵
液菌体生长比较饱满即将出现芽孢时，获得发酵菌种，种子罐中的发酵时间为
\t12～16小时；
...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨利民，孙卓，韩梅，林红梅，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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