【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术系属以聚合酶连锁反应(PCR)扩增核酸序列之领域。更特定而言,本专利技术 系关于热对流PCR之方法及其装置。
技术介绍
以聚合酶连锁反应(PCR)扩增特定核酸序列已为成熟技术,且为医学及生物学研 究之有力工具。此生化反应过程需要三个主要步骤「变性反应」、「炼合反应」及「延伸反 应」,其各需不同之反应温度。现今商业化之PCR扩增技术所需样本包含欲扩增之模板DNA、 与模板DNA各股上特定序列互补之寡核苷酸引子对、热安定性DNA聚合酶、以及脱氧核苷三 磷酸(dNTP)。随后藉由反复加热与冷却样本,使样本在三种不同温度间循环,藉以扩增模板 DNA核酸序列之特定部分。PCR之第一步骤为变性反应,其系将样本加热至高温,俾使双股之模板DNA分离成 为单股DNA。第二步骤为炼合反应,其系将样本冷却至较低温度,俾使引子与第一步骤所形 成之单股DNA结合,形成DNA与引子之复合物。最后步骤为聚合(延伸)反应,其系将样本 维持于适当温度,藉由DNA聚合酶之作用,使DNA与引子之复合物中之引子得以延伸,从而 产生与模板DNA各股互补之新单股DNA。每一次由上述三步骤组成之循环可复制两份引子 结合位置间之DNA序列。典型地,将包含变性反应、炼合反应及延伸反应等三个温度各异之 步骤的PCR循环重复约20至40次,可生产出数百万个标的核酸序列之复制物。变性反应之温度典型地系介于90至94°C之范围。炼合反应之温度系依据所用引 子之解链温度(melting temperature ;Tm)而选择,典型地系介于35至65°C之范围。聚合 反应之典型温度为72°C,这是由于最常 ...
【技术保护点】
一种以聚合酶连锁反应(PCR)扩增标的核酸序列的方法,其特征是包含步骤:(1)提供管状容器;(2)将PCR样本置于该管状容器内,其中该PCR样本包含具有欲扩增之标的核酸序列的模板DNA、DNA聚合酶、脱氧腺苷三磷酸(dATP)、脱氧胞苷三磷酸(dCTP)、脱氧鸟苷三磷酸(dGTP)、脱氧胸苷三磷酸(dTTP)及至少二种具有互补于标的核酸序列之3’端之序列的寡核苷酸引子,其中该等引子系经设计为具有介于40℃至约90℃间之解链温度(Tm);及(3)将该容器之底部埋置于热源中,然后加热该PCR样本,使引子解链并于容器中之PCR样本表面维持稳定温度(Ts),该温度低于该引子之解链温度(Tm)至少约2℃,因而造成由PCR样本底部至顶部渐减之温度梯度,藉此诱发热对流并使下列事件在PCR样本之不同区域依序并重复地发生:(i)变性反应,其中双股之模板DNA分离成为两条单股DNA,(ii)炼合反应,其中引子与单股DNA杂交形成DNA与引子之复合物,及(iii)聚合反应,其中DNA与引子之复合物中之引子藉由DNA聚合酶而延伸。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2008-1-24 61/023,219一种以聚合酶连锁反应(PCR)扩增标的核酸序列的方法,其特征是包含步骤(1)提供管状容器;(2)将PCR样本置于该管状容器内,其中该PCR样本包含具有欲扩增之标的核酸序列的模板DNA、DNA聚合酶、脱氧腺苷三磷酸(dATP)、脱氧胞苷三磷酸(dCTP)、脱氧鸟苷三磷酸(dGTP)、脱氧胸苷三磷酸(dTTP)及至少二种具有互补于标的核酸序列之3’端之序列的寡核苷酸引子,其中该等引子系经设计为具有介于40℃至约90℃间之解链温度(Tm);及(3)将该容器之底部埋置于热源中,然后加热该PCR样本,使引子解链并于容器中之PCR样本表面维持稳定温度(Ts),该温度低于该引子之解链温度(Tm)至少约2℃,因而造成由PCR样本底部至顶部渐减之温度梯度,藉此诱发热对流并使下列事件在PCR样本之不同区域依序并重复地发生(i)变性反应,其中双股之模板DNA分离成为两条单股DNA,(ii)炼合反应,其中引子与单股DNA杂交形成DNA与引子之复合物,及(iii)聚合反应,其中DNA与引子之复合物中之引子藉由DNA聚合酶而延伸。2.如权利要求1所述的方法,其特征是进一步于步骤(2)之后包含将油加入容器中之 样本上方以密封样本之步骤,其后为步骤(3)。3.如权利要求1所述的方法,其特征是PCR之各参数PCR样本之总体积(V,单位为 μ 1)、PCR样本之黏度(μ,单位为Ns/m2),容器之内直径(d,单位为mm),以及容器中之PCR 样本之表面温度(Ts,单位为。C ),其系由下列公式决定V = (AXTs+B-500 μ +0. 7) X e(L 86+100u)d其中A值介于-0. 019与-0. 016之间,且B值介于1. 85与2. 27之间。4.如权利要求3所述的方法,其特征是A值为-0.01812而B值为2. 1。5.根据申请专利范围第1项之方法,其特征是PCR样本之表面温度系介于约40°C与约 80°C之间。6.如权利要求1所述的方法,其特征是PCR样本之...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈培哲,陈炳辉,周文彬,谢一帆,叶秀慧,
申请(专利权)人:基亚生物科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:71[]
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