特异性增强的双特异性抗体(SEBA)制造技术

技术编号:38316517 阅读:16 留言:0更新日期:2023-07-29 08:58
一种对人上皮生长因子受体(EGFR)具有结合特异性的双特异性四价抗体,其从N末端到C末端包含:对人EGFR具有第一结合特异性的Fab区,其中Fab区包含具有与本文公开的序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的可变区;Fc结构域;和对HER3具有第二结合特异性的scFv结构域。域。域。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特异性增强的双特异性抗体(SEBA)
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年9月21日提交的美国临时申请系列号63/081,315和2020年11月5日提交的美国临时申请系列号63/109,877在《美国法典》第35卷第119(e)节(35 U.S.C.119(e))下的优先权,其全部公开内容通过引用并入本文。


[0003]本公开总体涉及抗体癌症疗法的
,并且更具体地涉及双特异性四价抗体。

技术介绍

[0004]人表皮生长因子受体(EGFR,也称为ErbB1、HER1)家族具有四个成员EGFR、HER2、HER3和HER4。通过突变、扩增和过表达使每个成员解除调节(deregulation)在肿瘤发生和肿瘤转移中起重要作用。过表达与多种肿瘤的发展有关。通过阻断受体胞外结构域上的EGFR结合位点或通过抑制细胞内酪氨酸激酶活性来阻断EGFR信号传导可预防表达EGFR的肿瘤的生长并改善患者的病症。例如,HER2过表达发生在30%的乳腺癌患者中,指示增加的疾病复发和不良预后。已知过表达也发生在胃癌、卵巢癌和胃癌癌症、肺腺癌、侵袭性子宫癌症和涎腺导管癌中。已在非小细胞肺癌中发现HER2突变。潜在的HER2突变和扩增产生异常的生长信号,其激活其下游信号传导通路,导致肿瘤发生。在许多这些情况下,HER2与肿瘤细胞表面上的HER3二聚化,其激活促进肿瘤生长和存活的PI3K/AKT信号传导1。
[0005]针对EGFR和HER2的几种治疗性抗体和小分子抑制剂已被批准用于治疗癌症<br/>25
。治疗性抗EGFR抗体,例如西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)和尼妥珠单抗(nimotuzumab)已被批准用于治疗转移性结肠直肠癌、头颈部鳞状细胞癌和神经胶质瘤
26,27
。抗EGFR或HER2的单克隆抗体在结肠癌
28
、头颈部鳞状细胞癌
29
、乳腺癌和胃癌
25
中表现出良好的临床应答。
[0006]曲妥珠单抗(trastuzumab)(Herceptin)和靶向HER2的其他药剂在患有表达HER2的乳腺癌和胃癌的患者中具有抗肿瘤功效。曲妥珠单抗是与HER2结合的单克隆抗体,并且该结合增加p27的活性,p27是停止细胞增殖的蛋白质。曲妥珠单抗仅在HER2过表达的癌症中有效。对于同时接受化疗且超过12个月没有额外的疗效的HER2阳性乳腺癌症患者,建议使用曲妥珠单抗疗法一年。帕妥珠单抗是另一种能够抑制HER2与诸如HER3的其他受体二聚化的单克隆抗体,并且是FDA批准的与曲妥珠单抗和多西他赛联合使用的治疗剂,多西他赛是用于治疗转移性HER2阳性乳腺癌的化学治疗剂
2,4

[0007]尽管存在这些成功,但长期疗效似乎在一些患者中受到限制。最初对这些治疗剂有应答的许多形式的肿瘤由于对这些药剂的获得性耐药性而最终进展。耐药性的发展降低了这些治疗的功效。在HER2靶向疗法的情况下,抗性可经由HER3或其配体HRG的上调而发生5。因此,目前旨在抑制HER2/HER3信号传导通路活化的治疗方法未能提供有意义的临床疗效
31,32

[0008]总之,目前批准用于临床使用的靶向HER2和/或HER3的单特异性、双特异性和联合抗体疗法具有对治疗的低应答率或患者对治疗发展抗性的缺点。仍然需要更好地治疗这些癌症。

技术实现思路

[0009]本申请一般涉及抗体治疗剂的
,且更具体地涉及针对EGFR家族成员的双特异性四价抗体。
[0010]一方面,本申请提供了对人EGFR(上皮生长因子受体)具有结合特异性的双特异性四价抗体。在一个实施方案中,抗体从N末端到C末端包含Fab区、Fc结构域和scFv结构域。Fab区具有对人EGFR的第一结合特异性。Fc结构域对HER3具有第二结合特异性。在一个实施方案中,Fab区可包括具有与SEQ ID NO.1或3具有至少70%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列的可变区。
[0011]在一个实施方案中,双特异性四价抗体可包括与SEQ ID NO.11、13或其组合具有至少98%、95%或92%序列同一性的氨基酸序列。
[0012]在一个实施方案中,第一结合亲和力可以比第二结合亲和力高2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、50或100倍。在一个实施方案中,第一结合亲和力具有的KD小于20nM,第二结合亲和力具有的KD大于约50nM。在一个实施方案中,第一结合亲和力具有的KD小于10nM,第二结合亲和力具有的KD大于约100nM。在一个实施方案中,第一结合亲和力具有的KD小于5nM,第二结合亲和力具有的KD大于约50nM。
[0013]在一个实施方案中,第一结合亲和力具有的KD为约0.1至约150nM、约0.5至约50nM、约1至约10nM、约1nM至约25nM、约0.1、0.5或1.0nM至约10、25或50nM。在一个实施方案中,第一结合亲和力具有的KD为约4.61nM。
[0014]在一个实施方案中,第二结合亲和力具有的KD为约10至约500nM、约10至250nM、约50至约250nM、约10或50nM至约250或500nM。在一个实施方案中,第二结合亲和力具有的KD为约117nM。
[0015]在一个实施方案中,Fab区可以用二硫键订合。
[0016]在一个实施方案中,四价双特异性抗体可以是分离的单克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体或重组抗体。
[0017]在一个实施方案中,双特异性四价抗体包括人框架区。
[0018]在一个方面,本申请提供重链、轻链或其组合。在一个实施方案中,重链包含与SEQ ID NO.9、13或其组合具有至少98%序列同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中,重链包含与SEQ ID NO.11具有至少98%序列同一性的氨基酸序列。
[0019]一方面,本申请提供的CDR序列与本文公开的氨基酸序列具有至少98%的序列同一性。
[0020]一方面,本申请提供编码本文公开的四价双特异性抗体、轻链或重链的分离的核酸。
[0021]在一个方面,本申请提供了包含本文公开的分离的核酸的表达载体。在一个实施方案中,表达载体在细胞中可表达。
[0022]在一个方面,本申请提供包含如本文公开的核酸的宿主细胞。在一个实施方案中,
宿主细胞包含如本文公开的表达载体。宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞。
[0023]一方面,本申请提供产生本文公开的四价双特异性抗体、轻链或重链的方法。在一个实施方案中,本申请包括培养本文公开的宿主细胞以产生四价双特异性抗体、轻链、重链的步骤。
[0024]一方面,本申请提供包含本文公开的四价双特异性抗体和细胞毒性剂的免疫缀合物。在一个实施方案中,细胞毒性剂可以是化疗剂、生长抑制剂、毒素或放射性同位素或其组合。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种对人EGFR(上皮生长因子受体)具有结合特异性的双特异性四价抗体,其从N末端到C末端包含:对人EGFR具有第一结合特异性的Fab区,其中所述Fab区包含具有与SEQ ID NO.1、3或其组合具有至少98%序列同一性的氨基酸序列的可变区;Fc结构域,以及对HER3具有第二结合特异性的scFv结构域。2.如权利要求1所述的双特异性四价抗体,其包含与SEQ ID NO.11、13或其组合具有至少98%序列同一性的氨基酸序列。3.如权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述第一结合亲和力具有的KD为约0.1至约50nM。4.如权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述第二结合亲和力的KD为约10nM至约500nM。5.如权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述第一结合亲和力具有的KD小于20nM,且所述第二结合亲和力具有的KD大于约50nM。6.如权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述Fab区用二硫键订合。7.如权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述四价双特异性抗体是分离的单克隆抗体。8.如权利要求1所述的双特异性四价抗体,其包含人框架区。9.如权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述抗体是人源化抗体、嵌合抗体或重组抗体。10.一种重链,其包含与SEQ ID NO.9、13或其组合具有至少98%序列同一性的氨基酸序列。11.一种轻链,其包含与SEQ ID NO.11具有至少98%序列同一性的氨基酸序列。12.一种编码如权利要求1所述的四价双特异性抗体的分离的核酸。13.一种包含如权利要求12所述的分离的核酸的表达载体。14.一种包含如权利要求12所述的核酸的宿主细胞。15.一种生产四价双特异性抗体的方法,其包含培养如权利要求14所述的宿主细胞以便生产所述四价双特异性抗体。16.一种药物组合物,其包含如权利要求1所述的四价双特异性抗体和药学上可接受的载体。17.如权利要求16所述的药物组合物,进一步包含放射性同位素、放射性核素、毒素、治疗剂、化疗剂或其组合。18.一种免疫缀合物,其包含如权利要求1所述的四价双特异性抗体和细胞毒性剂。22.如权利要求18所述...

【专利技术属性】
技术研发人员:丹尼斯
申请(专利权)人:成都百利多特生物药业有限责任公司
类型:发明
国别省市:

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