与人CD3ε结合的新型人抗体制造技术

本公开提供对人CD3ε特异性的新型全人抗体和抗体片段。体和抗体片段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与人CD3
ε
结合的新型人抗体


[0001]本公开涉及与人CD3ε结合的全人抗体及其改进的变体。本公开还提供包含这种人CD3特异性抗体和抗体片段的多特异性抗体形式。本公开还涉及能够表达这种抗体的核酸、载体和宿主细胞，包含所述抗体的药物组合物以及所述抗体和药物组合物用于治疗特定疾病的用途。

技术介绍

[0002]CD3是T细胞上表达的与T细胞受体复合物(TCR)相关的同二聚体或异二聚体抗原，是T细胞活化所必需的。CD3由四种不同链中的两种的二聚缔合形成：ε、ζ、δ和γ。CD3二聚排列包括γ/ε、δ/ε和ζ/ζ。
[0003]与CD3结合的抗体已被证明能在T细胞上聚集CD3，从而导致T细胞活化，其方式类似于T细胞受体(TCR)被载肽MHC分子结合。CD3特异性抗体已被提出用于涉及T细胞活化的治疗。因此，已经开发出与CD3和一种以上癌症相关抗原(CAA)共接合的双特异性或多特异性抗体形式，以将T细胞重定向到攻击和裂解癌细胞。尽管CD3靶向方法已显示出相当大的前景，但本领域中描述的这种多特异性抗体形式的治疗用途具有一些共同的缺点。首先，缺乏特异性肿瘤抗原。事实上，通常被靶向的癌症相关抗原通常由肿瘤和非恶性细胞共有。其次，多特异性抗体形式依赖于使用CD3特异性抗体片段(例如单链可变片段(scFv))的主要问题是这些片段活化T细胞的固有能力，而与目标抗原(例如癌症相关抗原)的结合无关。事实上，在基于CD3的抗体治疗中观察到的许多副作用似乎与T细胞功能异常有关(例如可能导致毒性细胞因子释放综合征的相关细胞因子的产生)。
[0004]WO2013/104804[JULIUS
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MAXIMILIANS
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中描述了一种多特异性抗体形式的新方法，参见“DUAL ANTIGEN
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INDUCED BIPARTITE FUNCTIONAL COMPLEMENTATION”，该方法克服了上述基于抗体的治疗方法中共接合CD3和癌症相关抗原的缺点。这种方法或多特异性抗体形式在本文中称为(肿瘤处细胞毒性细胞活化(Cytotoxic cell activation at tumour))。
[0005]作为上述方法的一部分，设计了两种多肽，每种多肽由与活化T细胞的抗CD3抗体的可变轻链(VL)结构域或互补的可变重链(VH)结构域融合的靶向部分(例如单链可变片段(scFv)或抗体Fab片段)组成。这种分开或分裂的Fv结构域在本文中称为“分裂效应器结构域”，而重新组装的Fv结构域反映了“效应器结构域”。
[0006]未配对的VH或VL结构域(例如分裂的CD3 VH结构域和分裂的CD3 VL结构域)不能单独与CD3结合。然而，一旦上述两种多肽通过其靶向部分与细胞表面上的靶抗原结合，CD3特异性抗体的互补VL和VH结构域就非常接近并相互作用以重建原始CD3抗体(例如，CD3特异性抗体Fv结构域)。因此，在靶细胞上形成的三特异性异二聚体分子(例如常规的三价双或三特异性抗体形式)接合并刺激T细胞以破坏癌细胞。
[0007]上述方法的关键方面之一在于鉴定合适的CD3特异性抗体。这种抗体不仅必须满足常规双特异性抗体形式在物种交叉反应性、亲和力、效力、安全性(例如治疗窗)和免疫原
性方面的要求，而且还必须满足CyCAT形式的特定要求。
[0008]如上所述，在CyCAT方法中，所采用的CD3特异性Fv结构域必须是可分裂的或可分开的。该特征意味着对CD3抗体的若干特定要求。
[0009]首先，分裂的Fv结构域的VH和VL结构域必须能够以CyCAT形式(例如作为未配对的CyCAT多肽)以可接受的纯度、可接受的产率以及可接受的单体含量生产。这尤其具有挑战性，因为未配对的VH或VL结构域在生产后往往形成强聚集体。这种聚集倾向(除其他以外)取决于特定的抗体序列，对于携带未配对VH结构域的多肽来说似乎更为关键。事实上，本专利技术所要求保护的新型CD3特异性抗体的专利技术人发现，即使是源自一种亲本抗体的抗体变体的CDR序列中的轻微变化，也显示出CyCAT形式的可生产性的强烈差异。
[0010]其次，一旦CyCAT多肽组中存在的未配对的CD3特异性VH和VL结构域配对，CD3特异性抗体(例如Fv结构域)必须在活化T细胞和/或将T细胞杀伤重定向到癌细胞方面保持其功能活性。
[0011]第三，未配对的CD3特异性VH或VL结构域或包含其的相应的未配对CyCAT多肽不应单独与CD3结合。
[0012]第四，未配对的CD3特异性VH或VL结构域或包含其的相应的未配对CyCAT多肽不应单独活化T细胞和/或介导重定向的T细胞杀伤。
[0013]最后，在两种多肽与靶细胞上其各自的癌症相关抗原结合之前，未配对的CD3特异性VH或VL结构域或包含其的相应的未配对CyCAT多肽不应配对。在单独施用两种多肽(例如作为两种药物组合物的一部分)之后，或者当两种多肽都是一种药物组合物中的一部分时，这种不需要的预配对(或异种缔合)可能发生在患者血清中。不需要的预配对被认为是(除其他以外)浓度依赖性的，并且依赖于分裂的VH和VL结构域彼此的亲和力。
[0014]本领域中描述了大量与CD3结合的抗体。然而，这些具有预期治疗用途的抗体中的大多数是从1980年代和1990年代早期发现的一小组啮齿动物抗CD3抗体中获得的(例如人源化的)。其中，SP34(Yoshino N.等人，Exp.Anim 49:97
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110,2000；Conrad ML.等人,Cytometry71A:925
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33,2007)可能是人源化方法中使用最多的抗体，因为它是少数与食蟹猴CD3(食蟹猴CD3或cyno CD3)具有交叉反应性的CD3特异性抗体之一，因此既可以用于灵长类动物的安全性、活性和/或药代动力学特征的临床前评估，也可以以相同的形式用于人类药物。SP34识别人CD3ε胞外结构域的N
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末端1
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27氨基酸残基多肽片段。然而，本专利技术的专利技术人发现，至少三种现有技术的抗体(其中两种来自SP34)不适合用于所讨论的CyCAT形式，因为其不利的生产性质和/或功能活性。
[0015]有趣的是，在体外从头(de novo)生成与CD3结合的完全人抗体，其识别人CD3ε的N端胞外区并从而对食蟹猴CD3交叉反应，这似乎具有挑战性，至少就本专利技术人所知，迄今为止尚未报道。
[0016]因此，本公开提供了对CD3ε特异性的新抗体和抗体片段，其优于本领域中报道的CD3特异性抗体。
[0017]特别是，根据本公开的对CD3ε特异性的抗体或抗体片段是完全人抗体，其也与食蟹类CD3以良好的亲和力交叉反应，并结合了以前从未观察到的理想的可生产性、功能性和安全性性质。
[0018]这些特征使得本公开的抗体和抗体片段对于多特异性抗体形式，特别是本文所述
的CyCAT形式的治疗用途非常理想。

技术实现思路

[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种对人CD3ε特异性的分离的人抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包括：a)HCDR1区，其包含GFTFX1SX2X3MX4的氨基酸序列，其中X1是S、K或R；X2是Y或H；X3是W或Y；且X4是S或T(SEQ ID NO:90)；b)HCDR2区，其包含NIX1X2X3X4X5X6X7YYX8X9SVKG的氨基酸序列，其中X1是K或D；X2是Q或Y；X3是D、Q或E；X4是S或G；X5是S、Q或T；X6是E、H或R；X7是K、A或T；X8是V或A；且X9是D或E(SEQ ID NO:91)；c)HCDR3区，其包含GYSAEFAHRSGLDV(SEQ ID NO:39)的氨基酸序列；d)LCDR1区，其包含SGSSSNIGX1X2YVY的氨基酸序列，其中X1是S、I、A、K或Q；且X2是N或T(SEQ ID NO:92)；e)LCDR2区，其包含RNX1X2RPS的氨基酸序列，其中X1是N、K、S、H、T或Y；且X2是Q、I或K(SEQ ID NO:93)；和f)LCDR3区，其包含AX1WDX2X3X4X5GAV的氨基酸序列，其中X1是A或G；X2是H或R；X3是H或R；X4是R、S或L；且X5是S或H(SEQ ID NO:94)。2.根据权利要求1所述的对人CD3ε特异性的分离的人抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包括：a)HCDR1区，其包含GFTFSSYWMS(SEQ ID NO:40)、GFTFKSYYMS(SEQ ID NO:41)或GFTFRSHYMT(SEQ ID NO:42)的氨基酸序列；b)HCDR2区，其包含NIKQDGSEKYYVDSVKG(SEQ ID NO:43)、NIDYQSQHAYYAESVKG(SEQ ID NO:44)或NIDYEGTRTYYAESVKG(SEQ ID NO:45)的氨基酸序列；c)HCDR3区，其包含GYSAEFAHRSGLDV(SEQ ID NO:39)的氨基酸序列；d)LCDR1区，其包含SGSSSNIGSNYVY(SEQ ID NO:46)、SGSSSNIGINYVY(SEQ ID NO:47)、SGSSSNIGANYVY(SEQ ID NO:48)、SGSSSNIGQTYVY(SEQ ID NO:49)或SGSSSNIGKNYVY(SEQ ID NO:50)的氨基酸序列；e)LCDR2区，其包含RNNQRPS(SEQ ID NO:51)、RNNIRPS(SEQ ID NO:52)、RNNKRPS(SEQ ID NO:53)、RNKKRPS(SEQ ID NO:54)、RNKQRPS(SEQ ID NO:55)、RNSQRPS(SEQ ID NO:56)、RNHIRPS(SEQ ID NO:57)、RNTQRPS(SEQ ID NO:58)或RNYQRPS(SEQ ID NO:59)的氨基酸序列；和f)LCDR3区，其包含AAWDHHRSGAV(SEQ ID NO:60)、AAWDRHSHGAV(SEQ ID NO:61)或AGWDRRLHGAV(SEQ ID NO:62)的氨基酸序列。3.根据权利要求1或权利要求2所述的对人CD3ε特异性的分离的人抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包括可变重链(VH)，其包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15的氨基酸序列。4.根据前述权利要求中任一项所述的对人CD3ε特异性的分离的人抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包括可变轻链(VL)，其包含选自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38的氨基酸序列。5.根据前述权利要求中任一项所述的对人CD3ε特异性的分离的人抗体或抗体片段，其
中所述抗体或抗体片段包括：a)可变重链(VH)，其包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15的氨基酸序列；和b)可变轻链(VL)，其包含选自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38的氨基酸序列。6.根据前述权利要求中任一项所述的对人CD3ε特异性的分离的人抗体或抗体片段，其中所述可变重链和可变轻链选自：a)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，b)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，c)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL，d)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL，e)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL，f)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VL，g)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VH和包含SEQ I...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：莫佛塞斯公司，
类型：发明
国别省市：