一种用于蛋白高表达的细胞试剂制造技术

本发明专利技术依据现有技术中通过抑制P185蛋白的活性即可影响癌细胞生长的特性，特异性的制备并获得了针对P185的单克隆抗体，该抗体不仅具有较好的特异性和亲和特性，还能够有效的抑制癌细胞的增殖，可以制备成为药物。可以制备成为药物。可以制备成为药物。

【技术实现步骤摘要】
一种用于蛋白高表达的细胞试剂


[0001]本申请涉及生物领域，更具体的涉及一种用于蛋白高表达的细胞试剂。

技术介绍

[0002]乳腺癌是女性常见恶性肿瘤，每年全世界约有130万人被诊断为乳腺癌，而有约40万人死于该病。近年来我国乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势，在某些大城市已占女性恶性肿瘤的第一位。
[0003]Her
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2也称为c
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erB2或Her
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2/neu，属于EGF受体家庭成员。该家族有4个成员，分别为erb
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B1、erb
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B2、erb
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B3和erb
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B4。Erb
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B2由922个腺嘌呤、1382个胞嘧啶、1346个鸟嘌呤和880个胸腺嘧啶组成。原癌基因Her
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2位于染色体17q21，编码185kDa具有跨膜酪氨酸激酶活性的生长因子受体。由胞外结构域(ECD)、跨膜结构域和细胞内结构域(ICD)三部分组成，胞外结合域主要是由2个配体结合域(RLD)与2个富含半胱氨酸区构成。Her
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2基因的生物学功能迄今为止，尚未发现与其有高亲和力的特异性配体。但Her
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2RLD可与EGF受体家族的其他成员及配体形成复合物，参与细胞增殖信号的转导。Her
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2是EGF受体家庭中表达更为广泛的受体，其过度表达的肿瘤细胞对化疗不敏感；它参与了抑制细胞凋亡，促进肿瘤细胞存活；上调血管内皮生长因子(VEGF)/血管通透性因子(VPF)，促进肿瘤新生血管生成：增加肿瘤细胞的侵袭力，破坏机体组织抗侵袭屏障等。因此，Her
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2是肿瘤免疫治疗研究的一个重要靶分子。
[0004]P185蛋白是癌基因Her
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2编码的跨膜糖蛋白受体，相对分子量是185ku，具有酪氨酸激酶活性，P185蛋白被异常激活后发生自身磷酸化，并磷酸化其他底物，引起下游的信号传导，最终导致细胞的增殖乃至癌变。研究认为P185升高是一个比Her
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2扩增更有意义的生物学参数。P185蛋白主要是在人体的胚胎发育时期表达，它参与多种组织器官的生长发育。而在成人正常组织中此基因常以单拷贝存在，表达水平较低。在许多上皮来源游的信号传导，最终导致细胞的增殖乃至癌变。临床前研究发现，P185蛋白的高表达可提高乳腺癌细胞的转移潜能，表现出较多的侵袭性临床病理特征。
[0005]P185蛋白高表达可导致乳腺上皮细胞的恶性转化，增加肿瘤细胞的侵袭性，并对默写化疗药物耐药，因此，选择有效抑制Her
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2信号激活通路，有望成为肿瘤治疗和改善预后的重要方法。以Her
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2为靶点治疗的，历史上第一个生物基因靶向治疗药物曲妥珠单抗(transtuzumab)即赫赛汀(Herceptin)己于1998年10月由美国FDA正式批准上市。这是一种重组DNA衍生的人源化(人鼠嵌合性)抗Her
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2单克隆抗体，对乳腺癌高表达患者有效。Herceptin与Her
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2受体细胞外区域结合，具有高度亲合力和特异性，既能阻断Her
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2受体而产生抗肿瘤效应，又能与人体免疫细胞作用，产生抗体依赖性细胞毒(ADCC)效应。比普通的放疗、化疗、激素治疗等方法好，靶向性生物基因疗法的作用机制在于可通过基因选择针对性的杀伤恶性肿瘤细胞，而不影响正常细胞的生存，这是一种具有突破意义的生物基因治疗方法。通过反义药物下调Her
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2的表达也有不少报道，还发现靶向Her
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2的反义药物HA824能够显著下调P185蛋白的表达并抑制P185蛋白高表达的乳腺癌细胞的生长，HA824还可以
显著抑制Akt的磷酸化。此外，有关酪氨酸激酶磷酸化的抑制剂的小分子化学药物的应用也是治疗肿瘤的新途径。
[0006]国内也有不少关于P185单克隆抗体的报道。CN1118568C中公开了一种抗P185neu/c
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erbB
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2单克隆抗体，其采用细胞表面表位包埋法免疫，即用neu/c
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erbB
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2转基因NIH/3T3细胞T6
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17经小鼠抗NIH/3T3抗血清包埋后免疫小鼠；得到的抗P185neu/c
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erbB
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2单克隆抗体杂交瘤，所分泌的单抗其亚类都为IgG1，都能专一性地与癌细胞膜上P185neu/c
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erbB
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2的膜外区结合，而与生长因子受体无交叉反应，与良性组织细胞也无反应；所得单抗结合特异性强，对人乳腺癌病理切片阳性染色为膜着色，背景低，可发展成诊断试剂盒用于临床检测肿瘤组织中P185neu/c
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erbB
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2的表达水平。CN105646704B公开了p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26能诱导SKOV3凋亡，该抗体能大大地降低了鼠源单克隆抗体的免疫源性，从而能有效避免抗抗体反应发生；与制备药用重组蛋白的细胞培养或微生物发酵罐等传统技术相比，通过本专利技术所得转基因FVB小鼠生产药用重组蛋白具有产量高、成本低、活性高、易规模化、能缩短新药上市周期和市场潜力巨大等优点。目前，针对P185设计并制备相应的单克隆抗体已有不少报道，但是针对该靶点的研究还有待进一步的提高和完善。

技术实现思路

[0007]本专利技术针对乳腺癌的治疗方法，提供了一种可选择的治疗方法。
[0008]一方面，本专利技术提供了一种用于治疗P185高表达的乳腺癌的药物组合物。
[0009]具体的，所述的组合物中含有本专利技术的单克隆抗体。
[0010]具体的，所述单克隆抗体是特异性针对P185蛋白，该抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO：1所示，重链可变区序列如SEQ ID NO：2所示。
[0011]具体的，本专利技术的单克隆抗体还可以被制备成为用于治疗癌症的药物组合物。
[0012]所述的药物组合物含有合适的各种适合给药的组分。
[0013]具体的，本公开提供的药物组合物中还含有离子盐赋形剂或缓冲剂、蔗糖。在一些实施例中，所述离子盐赋形剂或缓冲剂可以是来自由以下组成的组的一种或多种组分：磷酸二氢钾、磷酸钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、磷酸钠六水合物、磷酸二氢钠一水合物、氨丁三醇、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐)
[0014](Tris
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HCl)、氨基酸、组氨酸、组氨酸盐酸盐(组氨酸
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HCl)、琥珀酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠以及4
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(2
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羟乙基)
‑1‑
哌嗪乙磺酸(HEPES)、硫酸钠、硫酸镁、氯化镁6
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水合物、硫酸钙、氯化钾、氯化钙、柠檬酸钙。
[0015]所述药物组合物的pH为6.0到8本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性针对P185的单克隆抗体，其特征在于所述抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO：1所示，重链可变区序列如SEQ ID NO：2所示。2.一种药物组合物，所述组合物中含有特异性针对P185的单克隆抗体，所述抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO：1所示，重链可变区序列如SEQ ID NO：2所示，所述药物组合物能够特异性的抑制细胞中P185蛋白的表达。3.一种试剂，所述试剂中含有特异性针对P185的单克隆抗体，所述抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO：1所示，重链可变区序列如SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄劲舟，宋国义，
申请(专利权)人：山西牛舟科技有限公司，
类型：发明
国别省市：