用于影响细胞增殖和迁徙的组合物制造技术

本发明专利技术涉及用于影响细胞增殖和迁徙的组合物。本发明专利技术针对Msi1蛋白制备了特异性的单克隆抗体，该单克隆抗体具有较好的特异性以及和靶蛋白的亲和特性。将该单克隆抗体与癌细胞作用后，能够较好的抑制癌细胞的增殖以及癌细胞的迁徙能力，并且具有剂量依赖性。并且具有剂量依赖性。

【技术实现步骤摘要】
用于影响细胞增殖和迁徙的组合物


[0001]本申请涉及生物领域，具体的涉及一种用于影响细胞增殖和迁徙的组合物。

技术介绍

[0002]大肠癌是常见的恶性肿瘤，包括结肠癌和直肠癌。大肠癌的发病率从高到低依次为直肠、乙状结肠、盲肠、升结肠、降结肠以及横结肠，近年有向近端(右半结肠)发展的趋势。其发病与生活方式、遗传、大肠腺瘤等关系密切。结直肠癌(CRC)是世界范围内常见的恶性肿瘤，近年来，尤其在亚洲，随着人们饮食结构及生态环境的改变，CRC的发病率及死亡率呈上升趋势。
[0003]Msi1是通过调节转录后的翻译过程来维持干细胞特性和肿瘤形成。Msi1相关基因主要参与细胞增殖(39％)、细胞分化(36％)、细胞周期(36％)和细胞凋亡(33％)，是各种肿瘤的重要生长调节剂，Msi1基因全长2950bp，含15个外显子，基因定位于人染色体12q24.1
‑
q24.31，蛋白相对分子质量为39
×
103。在真核生物中，人Msi1N端含有2个保守的RNA识别结构域(RRM)，在转录后的基因表达调控中起着重要的作用，可参与RNA剪接、多聚腺苷化作用、序列编辑、RNA转运、维持RNA的稳定和降解、细胞内定位和翻译控制等。相关研究证明，Msi1通过2个特异性RNA识别模序识别结合(G/A)UnAGU位点，阻止如CDKN2A、Numb等mRNA的翻译。Msi1通过结合定位3
’
UTR片段影响它们的翻译过程。Msi1含有＞800名RNA结合蛋白家族成员，与多种基因表达调控密切相关，而当异常表达时可导致疾病，如癌症。
[0004]Msi1和β1整联蛋白可能参与大肠肿瘤发生、发展过程。在结肠癌的研究中发现，Msi1的表达是通过涉及Notch3机制反过来诱导刺激DLL4，通过抑制Numb维持Notch1信号从而增加了Msi1的水平。这些观察突出Notch活性的调节是癌细胞的一种新颖的前馈回路。通过免疫印迹、免疫组化及RNA等测定Msi1蛋白的表达，证实Msi1是结肠癌症患者的一种新型的预后标志物，在结肠癌转移过程中异常表达，表明它是一个潜在的治疗目标。Msi1表达增高与结肠癌的TNM分期直接相关，CD133与Msi1双阳性表达在大肠癌的浸润与转移中起重要协同作用，并且对奥沙利铂联合5
‑
氟尿嘧啶方案化疗高度耐药，提示Msi1能诱导肿瘤转移和导致肿瘤细胞耐药，最终影响患者预后。此外，Msi1表达增高亦与Ki
‑
67表达阳性及结肠癌的预后不良相关。Msi1的siRNA质粒表达载体可以有效阻断HCT116结肠癌细胞Msi1的mRNA表达，从而抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。Msi1在人结肠癌SW
‑
480细胞中有表达，沉默Msi1对癌细胞增殖有负性调节作用，可明显抑制其生长和增殖；后期实验结果证实，Msi1 siRNA能有效抑制人结肠癌SW
‑
480细胞中Msi1蛋白的表达；并且使其迁移和侵袭能力明显下降，和对照组相比差异有统计学意义。进一步证实，结肠癌Msi1的表达较正常癌旁组织高，差异有统计学意义。结肠癌中Msi1的表达与肿瘤浸润深度、Duke
’
s分期、淋巴转移、TNM分期和血管密度密切相关。Msi1蛋白可通过促进瘤内血管增生，从而促进结肠癌的生长和侵袭转移，并进一步影响患者的预后。
[0005]目前肿瘤治疗中使用最广泛的仍是化疗以及放射性疗法，其毒副作用较大，患者在治疗过程中还可能造成肿瘤细胞的残留或对使用的药物产生抵抗，以至不能达到治疗的
目的。随着基因工程技术和DNA重组技术的兴起，利用单克隆抗体治疗肿瘤已经日渐取代副作用较大的传统疗法而成为新的发展趋向。所以，研制更多的单克隆抗体以及怎样更好的利用单克隆抗体治疗大肠癌或者结肠癌是重要的研究方向。目前在临床上应用的针对结直肠癌的单克隆抗体主要有抗VEGF单克隆抗体贝伐单抗和抗EGFR单克隆抗体西妥昔单抗以及帕尼单抗。贝伐单抗和西妥昔单抗作为对结直肠癌有明显抗肿瘤活性的单克隆抗体，首先在联合化疗的研究中获得了突破，发挥了出色的抗肿瘤活性，显著增强放、化疗的疗效。目前大量的临床研究已证实这两种单抗在转移性结直肠癌(mCRC)中疗效确切，西妥昔单抗已经在我国上市，贝伐单抗正在中国进行注册临床试验，帕尼单抗尚未申请在中国进行注册。目前的肠癌分子靶向治疗中，单克隆抗体占据了主要地位。但是提供的可选择治疗单抗种类还不够多，特别是针对新靶点的开发，还有待进一步的加强。

技术实现思路

[0006]本专利技术克服现有技术的缺陷，提供了一种针对结肠癌治疗的解决方案。
[0007]具体的，本专利技术提供了一种特异性针对Msi1蛋白的单克隆抗体。
[0008]具体的，所述单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
[0009]在一些实施方式中，所述单克隆抗体与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少85％，或90％，或91％，或92％，或93％，或94％，或95％，或96％，或97％，或98％，或99％的序列同一性且与Mis1具K
D
≤1
×
10
‑8mol/L，K
D
值也可以选择1
×
10
‑9mol/L、2
×
10
‑9mol/L、3
×
10
‑9mol/L、4
×
10
‑9mol/L、4.5
×
10
‑9mol/L、5
×
10
‑9mol/L、6
×
10
‑9mol/L、7
×
10
‑9mol/L、8
×
10
‑9mol/L、9
×
10
‑9mol/L、1
×
10
‑
10
mol/L、3
×
10
‑
10
mol/L、5
×
10
‑
10
mol/L、7
×
10
‑
10
mol/L、9
×
10
‑
10
mol/L或1
×
10
‑8mol/L。
[0010]在一些实施方案中，本文所述的抗体部分可以进一步被修饰以包含现有技术中已知且容易获得的其他非蛋白质部分。适用于抗体衍生化的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例，包括但不限于：聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚1,3
‑
二氧戊环、聚
‑
1,3,6
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三恶烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)和右旋糖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种针对Msi1的单克隆抗体，其特征在于该单克隆抗体命名为M2D012，所述单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。2.一种用于抑制Msi1蛋白表达的药物组合物，其特征在于含有针对Msi1的单克隆抗体，该单克隆抗体命名为M2D012，所述单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。3.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴爱兰，赵云冉，
申请(专利权)人：成都兰坷干细胞生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：