具有改善睡眠功效的酪蛋白肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了具有改善睡眠功效的酪蛋白肽及其制备方法与应用，所述酪蛋白肽一级结构氨基酸序列分别为Tyr

【技术实现步骤摘要】
具有改善睡眠功效的酪蛋白肽及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于氨基酸多肽领域，具体涉及具有改善睡眠功效的酪蛋白肽及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]随着人们生活节奏的加快，以及近年来新冠肺炎疫情带来的压力和恐慌的积累，失眠和焦虑逐渐成为困扰全球许多人的十大流行精神障碍的前两名。失眠是最常见的精神障碍之一，据统计全世界范围内睡眠障碍的平均患病率已超过35％。目前临床治疗睡眠障碍的方法包括心理疗法和药物疗法(如行为策略、认知疗法、苯二氮卓类药物(BZDs)、抗组胺药、抗抑郁药和褪黑激素)。其中代表性的GABA受体是临床上治疗失眠和焦虑的药物的有效治疗靶点，常用的治疗药物有地西泮、苯二氮平等GABA受体激动剂。它们通常会造成高昂的费用，短期的治疗效果和不必要的副作用。因此，人们越来越关注天然的和食物来源的改善睡眠物质。
[0003]现有技术US2011/0312892A1公开含抗焦虑十肽YLGYLEQLLR(α
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CZP)的酪蛋白胰蛋白酶酶解物，已证明该酶解物具有显著延长大鼠戊巴比妥钠诱导睡眠时间的效果。同时专利US8685933B2公开几种酪蛋白十肽及其同源系列肽，具有抗焦虑活性，但是酪蛋白中是否含有其他具有改善睡眠活性的肽尚且未知。此外，据报道，大多数睡眠促进物质来自天然补充剂中的草药资源，只有极少数来自生物活性肽。已发表的中国专利一种具有改善睡眠功能的保健食品片剂表明两种纯中药成分缬草和甘草复配具有改善睡眠功效。同时中国专利申请公开了一种改善睡眠质量的口服液的制备方法，主要成分为人参、酸枣仁、大枣、益智仁、陈皮等中草药成分。然而这两篇专利主要侧重在于有效成分的简单复配，并没有发现原创性成分，而且活性成分均来自中草药成分。因此，目前关于食源性的改善睡眠活性多肽开发研究，还十分不足。

技术实现思路

[0004]本专利技术的首要目的在于提供具有改善睡眠功效的酪蛋白肽，包括YPVEP，PVEPF和PVEP。
[0005]本专利技术的另一目的在于提供上述具有改善睡眠功效的酪蛋白肽的定向制备方法及其应用。
[0006]本专利技术的目的通过下述技术方案之一实现。
[0007]本专利技术提供具有改善睡眠功效的酪蛋白肽，所述酪蛋白肽包括的氨基酸序列分别为Tyr
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Pro
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Val
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Glu
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Pro(YPVEP，f129
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134)(SEQ.ID.NO.1)，Pro
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Val
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Glu
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Pro
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Phe(PVEPF,f130
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134)(SEQ.ID.NO.2)及Pro
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Val
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Glu
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Pro(PVEP,f130
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133)(SEQ.ID.NO.3)，分子量分别为603.66Da，587.66Da，440.49Da。
[0008]进一步地，所述具有改善睡眠功效的酪蛋白肽SEQ.ID.NO.1～3可通过化学合成法等方式合成。
[0009]本专利技术提供具有改善睡眠功效的酪蛋白肽SEQ.ID.NO.1～3通过定向酶解制备方法获得，所述具有改善睡眠功效的酪蛋白肽的制备方法，包括如下步骤：
[0010](1)酪蛋白酶解：将酪蛋白与水按质量比1:6～1:12加水搅拌，升温至37～50℃，分步加入酪蛋白质量0.05％～3.0％的蛋白酶和酪蛋白质量0.5％～4.0％的消化酶，进行两步酶解，共3～8h，升温灭酶，酶解结束，酶解液经过滤浓缩和喷雾干燥获得酪蛋白酶解物；
[0011](2)将步骤(1)得到的酪蛋白酶解物通过高效液相色谱联用质谱法鉴定，得到YPVEP、PVEPF和PVEP，分别为SEQ.ID.NO.1、SEQ.ID.NO.2和SEQ.ID.NO.3(SEQ.ID.NO.1～3)。
[0012]进一步地，步骤(1)所述酪蛋白的来源包括牛乳、羊乳、骆驼乳、马乳中的一种以上。
[0013]进一步地，步骤(1)所述蛋白酶包括木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶或胰凝乳蛋白酶中的一种以上。
[0014]进一步地，步骤(1)所述消化酶包括胃蛋白酶和胰酶中的一种以上。
[0015]优选地，步骤(1)所述蛋白酶包括木瓜蛋白酶或胰凝乳蛋白酶，消化酶为胃蛋白酶复配胰酶。
[0016]进一步地，步骤(1)中加入蛋白酶的质量为加入酪蛋白质量0.1％～2.0％。
[0017]进一步地，步骤(1)中加入消化酶的质量为加入酪蛋白质量0.5％～3.0％。
[0018]进一步地，步骤(1)所述两步酶解具体指：第一步蛋白酶酶解1～4h，第二步消化酶酶解2～4h。
[0019]进一步地，步骤(1)所述升温灭酶的条件为：升温至100℃，煮沸15min。
[0020]进一步地，步骤(1)所述酪蛋白酶解物，还可以进一步通过分离纯化具体包括高效液相色谱法、醇沉法、凝胶色谱法中的一种分离获得本专利技术的三种具有改善睡眠功效的酪蛋白肽。
[0021]进一步地，步骤(1)中由酶解制备得到得酪蛋白酶解物应用于药物或保健品中。
[0022]进一步地，步骤(2)通过高效液相色谱联用质谱法鉴定，得到5.3min(YPVEP)，6.8min(PVEPF)，3.8min(PVEP)时出峰。
[0023]本专利技术还提供所述具有改善睡眠功效的酪蛋白肽在制备具有改善睡眠功效的药物或保健品物中的应用。
[0024]进一步地，所述药物或保健品还含有其他具有改善睡眠功效的活性成分和/或可接受的辅料。
[0025]进一步地，所述具有改善睡眠功效的活性成分为脱脂奶粉、γ
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氨基丁酸、茶氨酸、胶原蛋白肽、酸枣仁中的一种以上；所述可接受的辅料包括麦芽糊精、山梨糖醇、微晶纤维素中的一种以上。
[0026]进一步地，所述药物或保健品是粉末冲剂、功能饮料、压片糖果、凝胶软糖、口服液中的一种以上。
[0027]进一步地，具有改善睡眠功效的酪蛋白肽在药物或保健品中应用，所述应用具体包括以下几种形式：
[0028](1)直接用于冲剂、片剂、压片或凝胶糖果等形式，所述酪蛋白肽的纯化组分浓缩液的喷雾干燥粉末、麦芽糊精和山梨糖醇混合后进行过筛、造粒、喷雾干燥后制得组合物；
[0029](2)与其他具有改善睡眠或抗焦虑功效的活性成分和/或可接受的辅料，所述具有
改善睡眠功效的活性成分为脱脂奶粉、γ
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氨基丁酸、茶氨酸、酸枣仁、胶原蛋白肽等中的一种以上；所述可接受的辅料包括麦芽糊精、山梨糖醇、微晶纤维素等中的一种以上。
[0030]本专利技术相对于现有技术具有如下优点和有益效果：
[0031]本专利技术的具有改善睡眠功效的酪蛋白肽能提高戊巴比妥钠诱导小鼠的入睡率，极显著延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间，从而表现出改善睡眠的活性，可以用于制备具有改善睡眠功效的药本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.具有改善睡眠功效的酪蛋白肽，其特征在于，所述酪蛋白肽包括的氨基酸序列为Tyr
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Pro
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Val
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Glu
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Pro，记为SEQ.ID.NO.1；Pro
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Val
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Glu
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Pro
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Phe，记为SEQ.ID.NO.2；Pro
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Val
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Glu
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Pro，记为SEQ.ID.NO.3。2.权利要求1所述具有改善睡眠功效的酪蛋白肽的制备方法，其特征在于，通过以下酶解工艺步骤获得：(1)酪蛋白酶解：将酪蛋白与水按质量比1:6～1:12加水搅拌，升温至37～50℃，分步加入酪蛋白质量0.05％～3.0％的蛋白酶和酪蛋白质量0.5％～4.0％的消化酶，进行两步酶解，共3～8h，升温灭酶，酶解结束，酶解液经过滤浓缩和喷雾干燥获得酪蛋白酶解物；(2)将步骤(1)得到的酪蛋白酶解物通过高效液相色谱联用质谱法鉴定，得到YPVEP、PVEPF和PVEP，分别记为SEQ.ID.NO.1、SEQ.ID.NO.2和SEQ.ID.NO.3。3.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵谋明，钱兢菁，郑淋，赵翊君，
申请(专利权)人：广东华肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：